淫羊藿苷通过NO-cGMP-PKG减轻炎症并改善射血分数保留型心衰大鼠的心室重塑

目的:观察淫羊藿苷(ICA)通过一氧化氮(NO)-环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)通路对射血分数保留型心衰(HFPEF)大鼠心室重塑的影响。方法:建立醋酸脱氧皮质酮(DOCA)敏感型HFPEF大鼠模型,造模成功后,随机分成Model组、ICA低、中、高剂量组、抑制剂组,随机选取12只大鼠作为control组,各组灌胃相应药物,每天1次,连续6周。超声心动图检测大鼠心功能;心导管法测定血流动力学参数;HE染色观察大鼠心肌组织病理损伤;试剂盒检测NO、cGMP、活性氧(ROS)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;免疫荧光染色观察血小板-内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达;Western blot检测PKG、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性鸟苷酸环化酶α(sGCα)蛋白表达。结果:与control组比较,Model组大鼠左室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、二尖瓣舒张早期/舒张晚期血流速度最大峰值(E/A)、左心室收缩压(LVSP)、左室压力最大上升速率(+dp/dt max)、左室压力最大下降速率(-dp/dt max)、NO、cGMP水平、CD31及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平降低(P<0.05),左心室前壁厚度(LVAM)、左心室后壁厚度(LVPW)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平升高(P<0.05)。与Model组比较,ICA低、中、高剂量组大鼠LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max、NO、cGMP水平、CD31及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平升高(P<0.05),LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平降低(P<0.05),其中ICA高剂量组变化更显著(P<0.05)。与ICA高剂量组比较,抑制剂组大鼠LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max、NO、cGMP水平、CD31及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平降低(P<0.05),LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:ICA可能通过激活NO-cGMP-PKG通路,减轻炎症反应、改善心室重塑。

基于NO-cGMP-PKG信号通路探讨益母缩宫颗粒对药物不全流产大鼠阴道流血的影响

目的通过创建益母缩宫颗粒干预药物不全流产大鼠阴道流血模型,研究其对子宫组织中内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)、蛋白激酶G(PKG)水平的影响,以探讨该药物治疗模型大鼠的作用机制。方法通过联合米非司酮及米索前列醇进行药物不全流产大鼠阴道流血造模后分组,分别使用对照药物及不同剂量的益母缩宫颗粒进行干预,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠子宫组织处理后的eNOS、cGMP、PKG水平。结果缩宫素组及益母缩宫颗粒低、中、高剂量组的阴道流血时间明显短于模型组(P<0.01)。缩宫素组及益母缩宫颗粒低、中、高剂量组的eNOS、cGMP及PKG水平低于模型组(P<0.05)。益母缩宫颗粒低剂量组的eNOS、cGMP及PKG水平明显高于缩宫素组(P<0.01)。结论益母缩宫颗粒可能通过调控NO-cGMP-PKG信号通路,降低模型大鼠子宫组织中eNOS、cGMP、PKG水平,加强子宫平滑肌及血管收缩,缩短药物不全流产阴道流血时间。

基于NO-cGMP-PKG通路探讨清腹通肠颗粒抑制术后腹腔粘连的作用机制

目的基于一氧化氮(NO)-环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)通路探讨清腹通肠颗粒对术后腹腔粘连大鼠的抑制作用。方法将48只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、清腹通肠颗粒组、马来酸曲美布汀组,每组12只。模型组、清腹通肠颗粒组、马来酸曲美布汀组采用盲肠刮擦+对应腹壁损伤+局部缺血法建立腹腔粘连模型,假手术组只开关腹。术后假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,清腹通肠颗粒组、马来酸曲美布汀组分别给予清腹通肠颗粒溶液和马来酸曲美布汀混悬液灌胃,均1次/d。分别于术后3 d、7 d、10 d灌胃后2 h,每组随机取4只大鼠,观察腹腔粘连情况并进行粘连程度评分,计算大鼠肠道推进率,HE染色观察回盲部肠管病理学改变,免疫组织化学法观察回盲部肠黏膜组织酪氨酸激酶受体(c-kit)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的阳性表达情况,ELISA法测定肠组织中NO及cGMP含量,RT-PCR法检测肠组织中PKG mRNA表达量。结果模型组大鼠术后3 d、7 d、10 d的腹腔粘连程度评分及肠组织中iNOS阳性面积比、NO及cGMP含量、PKG mRNA相对表达量均明显高于同期假手术组(P均<0.05),肠道推进率及肠组织中c-kit阳性面积比均明显低于同期假手术组(P均<0.05);肠道绒毛破坏严重、组织明显水肿。与模型组比较,清腹通肠颗粒组大鼠术后7 d、10 d的腹腔粘连程度评分及肠组织中iNOS阳性面积比、NO及cGMP含量、PKG mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05);清腹通肠颗粒组大鼠术后3 d、7 d、10 d的肠道推进率和肠组织中c-kit阳性面积比均明显增高(P均<0.05);清腹通肠颗粒组大鼠肠道损伤减轻,腺体排列较整齐。结论清腹通肠颗粒可通过促进胃肠蠕动减轻术后腹腔粘连,其作用机制可能与抑制NO-cGMP-PKG信号通路,下调iNOS表达、上调c-kit表达,从而减少Cajal间质细胞损伤有关。

中等强度运动对去卵巢大鼠骨量及cGMP-PKG Ⅱ-EnaC通路的影响

目的:通过中等强度跑台运动干预,探讨运动经cGMP-PKGⅡ-ENaC通路对去卵巢大鼠骨量的影响效应,为阐明有氧运动对骨量的影响及机制提供实验依据。方法:3月龄雌性SD大鼠随机分为10组:BC(基础对照组)、SHAM4、8、12(假手术4、8、12周)组;OVX4、8、12(去卵巢对照4、8、12周)组;OVX+T4、8、12(去卵巢+运动4、8、12周)组。运动组采用跑台训练,坡度5°,5d/w。以DXA测定大鼠全身骨密度(bone mineral density,BMD);以ELISA测定血清环鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量;以Western blot和实时PCR法分别测定cGMP依赖性蛋白激酶GⅡ(cGMP dependent protein kinase,PKGⅡ)和ENa C-γ的蛋白及mRNA表达量。结果:运动组大鼠BMD呈现出随运动时间增长而增加态势,OVX+T 12组BMD显著高于同期OVX组(P<0.01),OVX+T 8和12虽仍低于同期SHAM组,但无显著性差异。与同期OVX组比较,OVX+T8、12组cGMP血清水平、股骨PKGⅡmRNA、ENaC-γ mRNA表达均显著增加(P<0.05),但仍均低于同期SHAM组。与同期OVX组比较,OVX+T4、12组PKGⅡ蛋白表达显著增加(P<0.05),但仍低于同期SHAM组(P均<0.01),运动组PKGⅡ蛋白降低程度显著减缓。OVX+T4、8、12组ENaC-γ蛋白表达均显著高于同期OVX组(P均<0.01),但仍低于同期SHAM组(P<0.05—0.01),降低程度显著减缓。结论:中等强度跑台运动干预能增加去卵巢大鼠cGMP浓度,同时上调骨PKGⅡ、ENa C-γ蛋白及mRNA的表达;中等强度跑台运动能够有效地增加去卵巢大鼠骨密度;运动增加去卵巢大鼠骨量的机制与c GMP-PKGⅡ-ENaC通路激活密切相关。

有氧运动对老龄小鼠心肌损伤及钠尿肽cGMP-PKG信号通路的影响

目的探讨有氧运动对老龄小鼠心肌钠尿肽-环磷酸鸟苷(cGMP)-cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)信号通路及心肌功能的影响。方法4月龄雄性C57BL/6J小鼠作为青年组,20月龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为老龄(aged)组和老龄运动(aged+E)组,每组15只。老龄运动组给予8周的游泳运动处理(60 min/d,每周5次)。采用小动物超声仪计算左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩末内径(LVESD)和左心室舒张末内径(LVEDD)以评价左心功能;通过检测心肌组织中Caspase-3活性评价心肌凋亡的变化,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及活性氧(ROS)的活性,评估心肌氧化应激;检测血浆及心肌组织中ANP和BNP的含量,评估钠尿肽的含量;检测心肌组织中cGMP活性及PKG蛋白表达,评估cGMP-PKG信号通路。结果与青年组相比,老龄组小鼠心脏功能显著降低(P<0.01),心肌组织Caspase-3、MDA及ROS活性显著增加(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),血浆及心肌组织中ANP和BNP含量显著增加(P<0.01),同时cGMP活性及PKG活性显著降低(P<0.01)。与老龄组相比,老龄运动组小鼠心脏功能增加(P<0.05),心肌组织Caspase-3、MDA及ROS活性降低(P<0.05或P<0.01),SOD的活性增加(P<0.05),血浆及心肌组织BNP的含量降低(P<0.05),同时cGMP及PKG活性增加(P<0.05或P<0.01)。结论游泳运动训练可改善老龄小鼠心肌功能,其机制与抑制心肌细胞凋亡Caspase-3的活性和氧化应激、激活BNP-cGMP-PKG信号通路有关。

Voltage-Gated Ion Channels in Nociceptors： Modulation by the cGMP-PKG pathway

AIM: Nociceptors contain a variety of ion channels that are modulated by proinflammatory mediators that may arise from tissue or nerve injury. The changes in activity of these channels, which primarily occurs through changes in intracellular pathways, may lead to the pathological states of hyperalgesia and allodynia. METHODS &RESULTS:

基于sGC-cGMP-PKG信号通路研究桂郁金水提物对异丙肾上腺素诱导小鼠心肌肥厚的作用及机制

目的基于sGC-cGMP-PKG信号通路研究桂郁金(Curcuma kwangsiensis root tubers,GYJ)水提物对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导小鼠心肌肥厚的改善作用及相关机制。方法将72只KM雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、普萘洛尔(40 mg/kg)组以及GYJS低(1 g/kg)、中(2 g/kg)、高(4 g/kg)剂量组。除正常对照组外,其余各组小鼠在第1~3天皮下注射ISO(10 mg/kg),第4~14天皮下注射ISO(5 mg/kg),皮下注射ISO 4 h后,各组小鼠灌胃相应的药物,给药周期为14 d。取材后,称量小鼠全心重和左心室重量;苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察小鼠心肌组织的病理情况;免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色观察鸟苷酸环化酶1β3(guanylate cyclase 1,soluble,beta 3,GUCY1B3)、转化生长因子-β1(ransforming growth factor beta 1,TGF-β1)心肌组织中的表达情况;试剂盒检测小鼠血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,检测心肌组织中超氧化物歧化酶活性(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;ELISA法测定小鼠血清中环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量;逆转录荧光定量PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、GUCY1B3、环磷酸鸟苷依赖蛋白激酶1(cGMP-dependent protein kinase 1,PKGⅠ)、磷酸二酯酶5A(phosphodiesterase 5A,PDE5A)mRNA表达水平。结果与模型组比较,普萘洛尔组和GYJS各剂量组可以显著降低小鼠全心重指数和左心室重量指数(P<0.001或P<0.0001),明显改善小鼠心肌组织肥厚和心肌纤维化,显著升高GUCY1B3在小鼠心肌组织中表达(P<0.05或P<0.01),显著降低TGF-β1的表达(P<0.05或P<0.01),心肌损伤标志物LDH、CK活力显著降低(P<0.05或P<0.01),NO、cGMP含量显著升高(P<0.05或P<0.01),心肌氧化应激指标MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),SOD活力显著上升(P<0.05或P<0.01),心肌肥厚标志物ANP、BNP和PDE5A mRNA表达水平显著降低(P<0.05、P<0.01或P<0.001),GUCY1B3、PKGⅠmRNA表达显著升高(P<0.01或P<0.001)。结论桂郁金水提物对ISO诱导小鼠心肌肥厚具有明显的改善作用,其机制可能与调节sGC-cGMP-PKG信号通路有关。

转录组学联合网络药理学探究高血压通过cGMP/PKG信号通路诱导勃起功能障碍的机制

目的:运用转录组学与网络药理学探讨高血压诱导勃起功能障碍(ED)的作用机制。方法:将自发性高血压大鼠随机分为模型组和L-精氨酸组(LA组),Wistar Kyoto大鼠为对照组。对照组和模型组大鼠腹腔注射400 mg/kg 9 g/L生理盐水。LA组大鼠腹腔注射400 mg/kg L-精氨酸,每天一次,连续7 d。然后评估所有大鼠的血压和勃起情况。使用ELISA、Western印迹和RT-qPCR评估通路蛋白和mRNA的表达。结果:转录组学联合网络药理学发现,cGMP/PKG信号通路是高血压诱导ED发生的关键信号通路,动物体内实验中,模型组的勃起次数明显低于对照组(P<0.05),Western印迹和RT-qPCR显示,模型组eNOS和PKG蛋白水平低于对照组;模型组sGC蛋白水平显著低于对照组(P<0.05);LA组eNOS、sGC和PKG蛋白水平高于模型组(P<0.05)。结论:高血压抑制了cGMP/PKG信号通路,降低了eNOS、NO、sGC、cGMP和PKG蛋白的表达以及睾酮水平,从而抑制了阴茎血管平滑肌松弛,降低了勃起功能。

NO-cGMP-PKG信号通路在天麻素促进脑缺血后海马神经发生中的作用

研究天麻素(gastrodin,GAS)对脑缺血后海马神经发生的作用,并探讨其与NO相关可能机制。利用双侧颈总动脉夹闭法建立C57BL/6小鼠脑缺血模型,分别用HE染色和Morris水迷宫检测海马CA1区的病理形态及小鼠认知功能;免疫荧光染色检测Brd U/Neu N阳性细胞数;比色法、硝酸还原法分别检测NOS活力和NO含量;ELISA和Western blot法分别检测c GMP水平和PKG蛋白表达。术后8 d,小鼠海马CA1区锥体神经元结构不规则,出现明显核固缩,细胞排列松散,神经元数目明显减少;29 d空间学习和记忆能力下降。结果提示,小鼠出现了脑缺血损伤。同时,模型小鼠海马齿状回Brd U/Neu N阳性细胞数明显增加,提示脑缺血后海马出现神经发生。不同剂量GAS(50,100 mg·kg^-1)处理明显减轻小鼠CA1区的病理形态损伤,改善学习记忆能力,并促进海马神经发生。同时,模型组NOS-NO减少,但c GMP-PKG增加。GAS给药激活NOS,促进NO生成,增加c GMP水平,上调PKG表达。上述结果提示,GAS可促进脑缺血后海马神经发生,改善小鼠认知功能,该作用可能与NO-cGMP-PKG通路的激活有关。

甘草素对肺动脉高压大鼠肺血管重塑及右心重构的影响

目的探讨甘草素对肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管重塑及右心重构的影响。方法采用腹腔注射野百合碱(MCT)诱导法建立PAH大鼠模型。MCT建模2周后分别给予60和20 mg/kg甘草素干预2周,观察大鼠右心室收缩压(RVSP)、右心室肥厚指数(RVHI)、大鼠肺动脉组织和右心室心肌组织HE染色结果,以及检测大鼠血浆环磷酸鸟苷(cGMP)和肺动脉组织蛋白激酶G(PKG)水平。结果60和20 mg/kg甘草素均能降低MCT诱导的PAH大鼠RVSP及RVHI,增加cGMP和PKG蛋白表达(P<0.01或0.05)。结论甘草素对PAH大鼠肺血管重塑及右心重构有一定的效果。

大鼠背根节慢性压迫或急性分离引起的cGMP-PKG信号通路持续激活介导背根节神经元的异常兴奋性和痛觉过敏(英文)

背根节(dorsal root ganglion,DRG)损伤或炎症可导致DRG神经元兴奋性异常增强和痛觉过敏。我们近期研究显示,长期慢性在体压迫(chronic compression of DRG,CCD)或急性离体分离(acute dissociation of DRG,ADD)背根节导致的神经元兴奋性异常增强和痛觉过敏受环鸟苷酸(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)信号通路活动的调控。本研究采用大鼠CCD模型和ADD模型,直接在DRG上检测cGMP浓度和PKG mRNA及其蛋白质的表达,进一步证明了cGMP-PKG信号通路活动在CCD和ADD DRG所致神经元兴奋性异常增强和痛觉过敏中的重要作用。酶联免疫吸附测定(ELISA)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的实验结果显示,CCD或ADD明显增高DRG内的cGMP浓度,上调I型PKG mRNA和PKG蛋白质表达。电生理膜片钳全细胞记录结果显示,CCD和ADD显著增强伤害特异性DRG细胞的兴奋性及其对cGMP-PKG信号通路激动剂的反应强度。增强的细胞兴奋性可以被cGMP-PKG通路阻断剂所抑制。在体压迫DRG的椎间孔内注射cGMP-PKG抑制剂显著减轻痛觉过敏。以上研究结果表明,CCD和ADD可以激活DRG细胞内的cGMP-PKG信号通路,而损伤的DRG细胞的超兴奋性和痛觉过敏的维持则需要cGMP-PKG信号通路处于持续的激活状态。

胰高血糖素样肽1受体激动剂对阿霉素诱导大鼠心肌纤维化的作用

目的研究胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)激动剂对阿霉素诱导的心肌纤维化大鼠的影响及机制。方法将40只SD大鼠随机数字表法分为正常组(N组)、阿霉素组(DOX组)、阿霉素+度拉糖肽组(GLP-1RA组)、阿霉素+度拉糖肽+Exendin(9-39)组(EX9-39组)。除N组外,利用阿霉素(3 mg/kg,每周3次)建立心肌纤维化大鼠模型,GLP-1RA组予以度拉糖肽1 mg·kg^(-1)·w^(-1)皮下注射,EX-9-39组予以度拉糖肽1 mg·kg^(-1)·w^(-1)皮下注射及Ex9-39200μg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射。4周后完善心脏超声测量左室收缩末期内径(LVDs),左室舒张末期内径(LVDd)和左室射血分数(LVEF)后处死大鼠,HE染色观察心脏组织形态学变化;Masson染色检测胶原含量;蛋白质印迹法(Western blotting)测GLP-1R、肌质网钙泵(SERCA2a)、受磷蛋白(PLB)、磷酸化受磷蛋白(p-PLB)、蛋白激酶G(PKG)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、磷酸化兰尼碱受体(p-RyR);酶联免疫吸附试验(ELISA)测N端脑钠肽前体(NT-proBNP)、环单磷酸鸟苷(cGMP)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、血糖(GLU)、胰岛素(INS)。结果各组间血糖及胰岛素的浓度均差异无统计学意义(P>0.05);HE染色提示DOX组纤维化程度较N组重,度拉糖肽可改善心肌纤维化,Exendin9-39可部分抑制度拉糖肽作用;Masson染色结果显示,与N组相比,DOX组CVF明显升高[(5.88±0.13)%比(0.3±0.05)%];给予度拉糖肽治疗后,GLP-1RA组[(0.83±0.14)%]CVF较DOX组下降;Exendin9-39削弱了度拉糖肽的保护作用(均P<0.05);蛋白质印迹法(Western blotting)结果显示DOX组与N组相比,GLP-1R、PKG、SERCA2a、p-PLB水平降低,PLB、p-RYR、CaMKⅡ水平升高,给予度拉糖肽治疗后可使GLP-1R、PKG、SERCA2a、p-PLB水平升高,PLB、p-RYR、CaMKⅡ水平降低,Exendin9-39可部分削弱度拉糖肽作用(均P<0.05);ELISA结果显示与N组相比,DOX组cGMP、GLP-1有所下降,GLP-1RA组则可使cGMP、GLP-1升高,Exendin9-39可使cGMP、GLP-1部分下降(均P<0.05);心脏超声与NT-proBNP结果显示,与N组相比,DOX组LVDs(4.00±0.34)mm、LVDd(6.00±0.52)mm值明显上升,LVEF(68.33±1.53)%降低,给予度拉糖肽治疗后,LVDs(2.99±0.06)mm、LVDd(4.60±0.21)mm值降低,LVEF(81.00±3.61)%升高,Exendin9-39可拮抗度拉糖肽的保护作用(均P<0.05)。与N组相比,DOX组NT-proBNP明显升高,予以度拉糖肽治疗后NT-proBNP有所下降,而予以Exendin9-39可抵消部分度拉糖肽保护作用(均P<0.05)。结论GLP-1RA可改善阿霉素诱导的心肌纤维化而逆转心肌重构;GLP-1RA逆转心肌重构可能与cGMP-PKG通路相关。

柴胡皂苷a对癫痫神经保护及神经元兴奋性的影响

目的 研究柴胡皂苷a(SSa)对癫痫大鼠的神经保护及对海马神经元兴奋性的影响及其作用机制。方法 用氯化锂-匹鲁卡品建立大鼠癫痫模型,将大鼠随机分为模型组、丙戊酸钠(VPA)组、SSa高剂量组和SSa低剂量组,另设15只未造模大鼠作为正常组,每组15只。连续给药4周,Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,全细胞膜片钳技术分析海马区神经元的动作电位变化,HE染色观察海马区神经元病变,试剂盒检测大鼠海马组织一氧化氮合酶(NOS)活力及一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和蛋白激酶G(PKG)蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠Racine评分显著升高,逃避潜伏期显著延长,60 s内穿越过平台的次数和平台象限的停留时间减少,海马神经元兴奋性显著提高,海马区神经元有明显损伤,海马组织NOS活力、NO和cGMP含量及Bcl2、PKG蛋白表达降低,Bax、Caspase-3增加(P<0.05)。与模型组比较,SSa各剂量组大鼠Racine评分降低,逃避潜伏期缩短,60 s内穿越过平台的次数和平台象限的停留时间增加,海马神经元兴奋性降低,海马区神经元损伤减轻,海马组织NOS活力、NO和cGMP含量及Bcl2、PKG蛋白表达增加,Bax、Caspase-3降低(P<0.05)。结论 SSa对癫痫大鼠具有神经保护作用,并可降低海马神经元的兴奋性,其机制可能与促进NO生成并激活cGMP/PKG通路有关。

小鼠前扣带回皮质PKG-Ⅰ介导吗啡诱导的痛敏和焦虑样行为

目的:探讨前扣带回皮质cGMP依赖的蛋白激酶-Ⅰ(PKG-Ⅰ)在吗啡诱致的小鼠痛敏及焦虑样行为中的调控作用。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为2组:对照组和吗啡组,在小鼠皮下每天两次、连续4 d注射吗啡建立吗啡诱致的痛敏模型。分别采用von Frey纤维丝和高架十字迷宫检测小鼠机械性痛阈变化和焦虑样行为。通过Western Blot和免疫荧光组织化学染色技术检测前扣带回皮质PKG-Ⅰ表达水平的变化。结果:长期大量皮下注射吗啡可诱致小鼠产生显著的痛觉敏化和焦虑样行为。Western Blot结果显示小鼠前扣带回皮质PKG-Ⅰ在吗啡诱致的痛敏后表达显著下调,同时免疫荧光组织化学染色结果显示前扣带回皮质PKG-Ⅰ在吗啡痛敏后的平均荧光强度显著下降。结论:前扣带回皮质PKG-Ⅰ在吗啡诱致的小鼠痛觉过敏和焦虑样行为中发挥关键作用。

肌球蛋白磷酸化靶向亚基家族与心血管疾病

肌球蛋白磷酸化靶向亚基(MYPT)家族包含5个成员,MYPT可通过其自身磷酸化影响肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)活性与细胞功能,调控Rho/ROCK通路和NO/cGMP/PKG通路,从而在心血管疾病的发生发展中发挥重要作用。现就MYPT家族成员的结构、与细胞功能及信号通路的关系及其在心血管疾病中的作用机制进行综述,为心血管疾病的研究和治疗提供理论基础。

有氧运动对糖尿病小鼠心肌损伤及氧化应激和内质网应激的影响

目的探讨有氧运动对小鼠糖尿病心肌损伤的保护作用及其相关机制。方法8周龄C57BL/6J雄性小鼠45只随机分为3组,分别为正常对照组(Con)、糖尿病心肌损伤组(DCM)和糖尿病心肌损伤+有氧运动处理组(DCM+E)。DCM组和DCM+E组小鼠连续5 d腹腔注射50 mg/kg STZ溶液;DCM+E组小鼠在造模成功4周后,给予8周的游泳运动训练。采用小动物超声计算左心室射血分数(LVEF)以评价左心功能;通过检测血浆中肌钙蛋白I(cTnI)及肌酸激酶(CK-MB)含量,评价心肌损伤;检测心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的活性,评估心肌氧化应激;检测心肌组织中内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达,评估内质网应激情况;检测心肌组织中cGMP活性及PKG蛋白表达,评估cGMP-PKG信号通路情况。结果与Con组相比,DCM组小鼠心脏功能显著降低(P<0.01),血浆cTnI及CK-MB显著增加(P<0.01),心肌组织MDA及GSH活性显著增加(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),心肌组织GRP78和CHOP的表达显著增加(P<0.01),同时cGMP活性及PKG蛋白表达显著降低(P<0.01)。与DCM组相比,DCM+E组小鼠心脏功能显著增加(P<0.01),血浆cTnI及CK-MB含量显著降低(P<0.01),心肌组织MDA及GSH活性降低(P<0.05),SOD的活性增加(P<0.05),心肌组织GRP78和CHOP的蛋白表达降低(P<0.01),同时cGMP活性及PKG蛋白表达增加(P<0.05)。结论有氧运动可改善糖尿病小鼠心肌损伤,其机制与抑制氧化应激、降低内质网应激和激活cGMP-PKG信号通路有关。

电针对高血压前期Dahl盐敏感大鼠肾脏保护作用机制研究

目的:观察电针"曲池""足三里"穴对高血压前期Dahl盐敏感(DS)大鼠肾脏NO/c GMP/PKG信号通路的影响及组织形态的改变,探讨电针"曲池""足三里"对高血压前期肾脏损害保护作用机制。方法:盐抵抗大鼠(DR)10只作为正常组;DS大鼠30只,随机分为模型组、针刺组和非穴位组,每组10只。采用高盐饲料喂养的方法诱发高血压前期模型。电针组电针"曲池""足三里"穴,1次/d,6次/周,共5周。非穴位组取双侧髂嵴上10~15 mm、后正中线旁开20mm区段内一个固定对照点,治疗方法同电针组。测量大鼠治疗期间血压变化情况以及治疗后血清血清尿素氮(UREA)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)含量;ELISA法检测NO含量;荧光定量PCR检测大鼠肾组织溶解型鸟苷酸环化酶(s GC)、蛋白激酶G(PKG)的mRNA表达;HE染色检测大鼠肾组织病理形态变化。结果:治疗期间,电针组大鼠血压逐步下降。与正常组相比,模型组血清UREA、CREA、UA含量显著升高(P<0.05),NO含量显著降低(P<0.05),s GC、PKG mRNA表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,电针组血清UREA、CREA、UA含量显著降低(P<0.05),NO含量显著升高(P<0.05),s GC、PKG mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:电针能有效降低高血压前期DS大鼠血压,提高NO含量、c GMP、PKG基因表达,改善组织小管扩张、间质炎症细胞浸润等,这可能是电针通过NO/c GMP/PKG信号通路发挥对高血压前期DS大鼠肾脏保护作用机制之一。

朱氏润肠方对慢传输型便秘大鼠结肠动力的影响

目的:观察朱氏润肠方对慢传输型便秘大鼠结肠动力的影响。方法:将50只雄性大鼠随机分成正常组、模型组、朱氏润肠方高剂量组、朱氏润肠方低剂量组和莫沙必利组,每组10只。除正常组外,其余大鼠均灌胃大黄复制慢传输型便秘模型,随后给予相应药物干预。观察大鼠的一般状态,记录大鼠24 h粪便总量与粪便含水量;采用活性炭法测定大鼠的肠道运输功能;采用ELISA法检测大鼠结肠神经递质NO、cGMP和PKG的表达。结果:模型组大鼠毛发枯燥,活动减少,易激怒;模型组大鼠24 h粪便总量、粪便含水量、活性炭推进率均明显低于正常组,结肠NO、cGMP、PKG的表达明显高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.01);给药后,朱氏润肠方高、低剂量组和莫沙必利组大鼠24 h粪便总量、粪便含水量均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);朱氏润肠方高剂量组和莫沙必利组大鼠结肠NO、cGMP和PKG的表达均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);朱氏润肠方低剂量组大鼠结肠NO、cGMP的表达均低于模型组(P<0.05)。结论:朱氏润肠方能明显改善慢传输型大鼠的便秘症状,其机制可能与抑制NO-cGMP-PKG信号通路的表达,增强结肠动力有关。

NO-cGMP信号通路舒张甲亢性高血压大鼠胸主动脉的特性

目的探讨NO-cGMP信号通路舒张甲亢性高血压大鼠胸主动脉的特性。方法大鼠皮下每天注射甲状腺素(T4)0.5 mg.kg-1的剂量或等体积的生理盐水连续16 d,制备甲亢性高血压大鼠模型组和对照组。采用两组大鼠的离体胸主动脉环标本,观察NO供体SNAP对胸主动脉环的影响;利用可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)激活剂BAY 41-2272(BAY)、sGC阻断剂ODQ和能透过细胞膜进入胞内而激活蛋白激酶G(PKG)的8-Br-cGMP,观察NO-cGMP信号通路对甲亢性高血压大鼠胸主动脉的舒张作用的影响。结果与对照组相比,甲亢性高血压大鼠体重明显下降而心率、脉压差和收缩压明显升高;SNAP对两组大鼠的胸主动脉环均有明显的舒张作用,但在甲亢性高血压大鼠中的舒张作用明显弱于对照大鼠;用ODQ预处理后,SNAP对两组大鼠胸主动脉环的舒张作用均被阻断;BAY和8-Br-cGMP对两组大鼠的血管环均有明显的舒张作用,但在甲亢性高血压大鼠中的舒张作用明显弱于对照大鼠。结论甲亢性高血压的病理状态下,NO-cGMP信号通路对胸主动脉的舒张作用减弱,且此效应可能与sGC和PKG功能下调有着密切关系。

鸡矢藤环烯醚萜苷抑制NO-CGMP/PKG信号保护新生大鼠神经元

目的本研究旨在探讨鸡矢藤环烯醚萜苷(iridoid glycosides from Paederia scandens,IGPS)通过抑制NO-cGMP/PKG信号通路,保护新生大鼠神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经元的作用。方法SD大鼠连续灌胃给药后,采集血清制备IGPS含药血清;采用硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)200μmol·L^-1制备DRG神经元损伤模型;MTT法测定IGPS含药血清对SNP损伤后DRG神经元存活率的影响;紫外分光光度法测定DRG神经元NO含量和iNOS活性;放射免疫分析法测定DRG神经元cGMP含量;RT-PCR法检测DRG神经元PKGΙ(α,β)mRNA的表达;激光共聚焦显微镜检测DRG神经元胞内钙离子浓度的变化。结果IGPS含药血清可明显升高SNP损伤后DRG神经元的存活率,明显降低DRG神经元NO、cGMP含量及iNOS活性,抑制iNOSmRNA、PKGΙ(α,β)mRNA的表达。IGPS含药血清可有效抑制损伤DRG胞内钙离子浓度的升高。结论IGPS含药血清对SNP导致的背根神经节神经元损伤有良好保护作用,其机制可能与抑制cGMP/PKG信号及降低胞内钙离子浓度有关。