口腔鳞癌组织中CIAP1表达水平与PTP化疗方案疗效及预后的关系

目的:探究口腔鳞癌细胞CIAP1的表达水平与临床PTP(顺铂+替尼泊甙+平阳霉素/博莱霉素)方案化疗效果及患者预后之间的关系。初步评价其表达水平是否可以指导临床个体化化疗方案的制定。方法:采用回顾性研究的方法检测了42例原发晚期口腔鳞癌标本化疗前后CIAP1的表达情况,评价其化疗前表达水平与化疗效果及临床预后之间的相关性。同时,对比分析化疗前后CIAP1的表达变化情况。结果:42例口腔鳞癌标本中CIAP1在胞质及胞核均有不同程度的表达,其胞质表达水平与化疗效果及预后显著相关。化疗前后口腔鳞癌标本中CIAP1的表达没有相关性。结论:胞质CIAP1表达水平是临床PTP方案化疗疗效及患者预后的一个有效预测因子。

cIAP1基因的RNA干扰载体的构建及其对卵巢癌细胞的生物学影响

目的 构建针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体并稳定转染人卵巢癌Skov3细胞,观察该基因对卵巢癌细胞的影响。方法 设计合成针对cIAP1的shRNA重组质粒表达载体,并筛选出最有效的干扰序列,获取pGPU6-cIAP1-shRNA稳定表达细胞株。RT-PCR及Western blot检测转染组Skov3细胞cIAP1基因mRNA及蛋白表达的水平,MTT法检测细胞生长,绘制生长曲线。结果 测序验证针对cIAP1的shRNA重组质粒构建成功,并筛选cIAP1-2534为最佳干扰序列;流式细胞术分析cIAP1 shRNA载体的转染效率可达74.7%,RT-PCR及Western blot检测干扰组Skov3细胞的cIAP1基因mRNA及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。MTT实验结果显示干扰组细胞的OD值显著低于正常组细胞（P＜0.05）,干扰组细胞的生长速度明显慢于正常组（P＜0.05）。结论 针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体可以有效抑制Skov3细胞中该基因的表达,cIAP1基因表达下调能在一定程度上抑制卵巢癌Skov3细胞的体外增殖能力及细胞侵袭能力。

宫颈癌中cIAP1与Dab2的基因改变

目的通过检测cIAP1与Dab2基因在宫颈癌中是否有扩增或丢失,确定与宫颈癌发生发展相关的分子标志。方法对41例新鲜宫颈癌标本进行显微切割和DNA提取;PCR扩增宫颈癌DNA中的靶基因cIAP1与Dab2;运用bandscan 4.3对PCR扩增产物的电泳条带进行灰度扫描,并用软件SPSS13.0对数据进行处理,确定发生扩增或丢失的基因。结果在宫颈癌中,cIAP1与Dab2均有不同程度的扩增,宫颈癌组织中cIAP1相对灰度的均值为0.716,正常宫颈组织相对灰度的均值为0.550;宫颈癌组织中Dab2相对灰度值的均值为0.235,正常宫颈组织相对灰度的均值为0.189。癌组织较正常组织中cIAP1与Dab2的拷贝数明显增加,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 cIAP1与Dab2在宫颈癌中均表现为扩增,提示两者均可作为宫颈癌发生发展的分子标志物。

金葡菌对U937细胞XIAP和cIAP1/2表达的影响

目的探讨X-相关凋亡抑制蛋白(XIAP)和cIAP1/2在金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法采用Western印迹分析检测金葡菌感染不同时间后XIAP和cIAP1/2的表达水平;预先用不同浓度的Embelin(XIAP抑制剂)处理U937细胞60min,观察金葡菌感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果随着感染时间的延长,XIAP和cIAP1/2的表达逐渐下降。加入XIAP的抑制剂Embelin后,U937细胞的凋亡率随着Embelin的浓度增加而逐渐升高。结论 XIAP和cIAP1/2参与了金葡菌诱导的U937细胞凋亡过程。Embelin通过特异性地抑制XIAP表达增加金葡菌诱导的U937细胞凋亡率。

透明细胞肾细胞癌中cIAP1、cIAP2、XIAP的表达及其与临床指标的关系

目的:检测肾透明细胞癌中凋亡抑制蛋白cIAP1、cIAP2和XIAP基因表达状况及其与临床病理指标间的关系。方法:采用RT-PCR方法检测cIAP1、cIAP2和XIAP在透明细胞肾细胞癌中RNA水平的表达。分析其与透明细胞肾细胞癌临床病理指标间的关系。结果:在透明细胞肾细胞癌中cIAP1和cIAP2的mRNA阳性率分别为85%(17/20)和60%(12/20),均高于正常肾组织。cIAP1mRNA在Fuhrman核分级1、2级的肾细胞癌中表达高于核分级3和4的肿瘤。XIAP的表达在肾细胞癌与癌旁正常肾组织间无差异,并与TNM分期、Fuhrman分级没有相关性。结论:IAP家族成员cIAP1与肾细胞癌的临床病理指标相关。

穹窿主体蛋白通过上调干扰素调节因子2抑制动脉内皮细胞凋亡

目的:探究穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对动脉内皮细胞(endothelial cell,EC)增殖的作用,揭示MVP对动脉EC发挥保护作用的潜在机制。方法:以人主动脉EC(human aortic EC,HAEC)为细胞模型,感染慢病毒以抑制或过表达MVP。使用CCK-8实验和流式细胞术检测细胞增殖活性和死亡。使用凋亡抑制剂Z-VAD和坏死性凋亡抑制剂Nec-1确定细胞死亡方式。以流式细胞术检测Annexin V结合阳性率和Caspase 3活性,以Western blot检测Caspase剪切体蛋白表达以评价细胞凋亡。以荧光定量PCR和Western blot技术鉴定靶分子,并明确MVP与靶分子之间的调控关系。结果:敲降MVP抑制HAEC增殖,促进HAEC死亡,过表达MVP结果则相反。Z-VAD逆转MVP敲降引起的死亡,而Nec-1无此作用。过表达MVP抑制TNF-α诱导的HAEC凋亡,敲降MVP时作用相反。MVP通过上调干扰素调节因子2(interferon regulatory factor 2,IRF2)促进凋亡抑制蛋白1(cellular inhibitor of apoptosis protein 1,cIAP1)的转录。敲降IRF2逆转MVP过表达引起的cIAP1表达增多和凋亡抑制。结论:MVP通过上调IRF2蛋白促进cIAP1转录表达从而抑制TNF-α诱导的HAEC凋亡,发挥对EC的保护作用。

胆道损伤愈合过程中cIAP-1及caspase3的表达及其意义

目的观察凋亡调控蛋白cIAP1及其下游凋亡因子caspase3在胆道良性狭窄形成过程中的表达和定位情况,并探讨其意义。方法建立胆管损伤后愈合犬模型,分别利用原位杂交检测技术及免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素(Streptavidin Peroxidase Method,SP)法对犬胆道损伤愈合不同时期的组织中cIAP1及caspase3的表达和定位情况进行分析。结果 cIAP1于各时间点均显著性表达(P<0.05),定位于间质细胞,以成纤维细胞为甚;各组间差异无统计学意义(P>0.05)。Caspase3表达明显弱于对照组(P<0.05),腺上皮表达相对较强,各期之间差异无统计学意义(P>0.05)。cIAP-1mRNA与caspase3蛋白表达呈负相关(r=-0.97,P<0.05)。结论抗凋亡基因cIAP-1通过抑制其下游凋亡因子caspase3可能在胆道损伤后的瘢痕愈合转归中发挥重要作用。

雷公藤红素增强TNF-α对膀胱癌细胞系T24凋亡诱导效应及机制研究

目的研究雷公藤红素是否能增强TNF-α对膀胱癌细胞的杀伤活性及机制。方法用MTT法及AnnexinⅤ染色法检测TNF-α单独治疗及联合雷公藤红素治疗对膀胱癌细胞系T24细胞活力及凋亡的影响。将T24细胞用雷公藤红素和TNF-α处理后,用免疫共沉淀及Western blot方法检测RIP1蛋白与FADD及caspase-8的相互作用。雷公藤红素和TNF-α处理后,用Western blot方法检测T24细胞c IAP1的表达水平。用Lipofectamine 2000试剂将cIAP1表达质粒转染入T24细胞,再用MTT法、AnnexinⅤ染色法、免疫共沉淀及Western blot方法检测雷公藤红素联合TNF-α对T24细胞凋亡通路的影响。结果雷公藤红素能显著增强低浓度TNF-α对T24细胞的杀伤活性和凋亡诱导活性,并增强TNF-α对RIP1的活化,增加RIP1-FADD-caspase-8复合物的形成。雷公藤红素能显著下调T24细胞c IAP1的表达水平,转染c IAP1表达质粒后,雷公藤红素对TNF-α的凋亡促进作用丧失。结论雷公藤红素通过抑制c IAP1的表达增强TNF-α对膀胱癌细胞系T24的凋亡诱导效应。

杆状病毒凋亡抑制基因IAP1促进家蚕CyclinB的核内积累

【目的】家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是生产上危害最严重的病原之一。BmNPV感染Bm N-SWU1细胞将细胞周期阻滞于G2/M期。CyclinB是调控细胞周期G2期向M期转换的重要细胞周期蛋白。因此,研究BmNPV感染后CyclinB变化对解析病毒调控细胞周期的机制具有重要意义,同时探究这个过程中与CyclinB互作的病毒蛋白,可为构建家蚕转基因品系提供分子靶标。【方法】q RT-PCR检测BmNPV感染后BmCyclinB的表达变化;免疫荧光观察病毒感染前后BmCyclinB的定位变化,通过细胞质细胞核蛋白分离实验验证。免疫共沉淀钓取与BmCyclinB互作的病毒蛋白。BmNPV感染期间敲除BmNPV IAP1观察BmCyclinB的入核比例。【结果】BmNPV感染后BmCyclinB转录水平下调。BmNPV感染前BmCyclinB主要定位于细胞质,而感染后主要定位于细胞核。BmNPV感染Bm N-SWU1细胞后促进BmCyclinB在核内积累。共钓取了7个与BmCyclinB互作的病毒蛋白,免疫共沉淀和细胞共定位证明BmNPV IAP1与BmCyclinB之间存在相互作用。敲除BmNPV IAP1后BmCyclinB进入细胞核的数量显著减少。【结论】BmNPV IAP1可通过与BmCyclinB互作,促进BmCyclinB在核内积累。