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全能性相关基因cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达 被引量:4
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作者 刘本杰 陈志胜 +3 位作者 陈胜锋 计慧琴 王丙云 邓衔柏 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第41期7733-7736,共4页
背景:全能性相关基因cPouV、cNanog和Sox2对鸡胚胎干细胞自我更新和全能性的维持起重要调控作用,其在鸡早期胚胎中的表达情况和作用缺乏了解。目的:通过检测cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达情况,研究基因在早期胚胎发育过程中... 背景:全能性相关基因cPouV、cNanog和Sox2对鸡胚胎干细胞自我更新和全能性的维持起重要调控作用,其在鸡早期胚胎中的表达情况和作用缺乏了解。目的:通过检测cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎中的表达情况,研究基因在早期胚胎发育过程中的作用。方法:将180枚新鲜受精种鸡蛋分为6组,分别孵育0,8,16,22,32,42h后取出。获取胚胎样品,以β-actin为内参基因,采用实时定量PCR检测其cNanog、cPouV和Sox2的相对表达量。结果与结论:cNanog和cPouV的表达量模式相似,在孵育的第0,8,16,22h表达量增加,孵育22h达到峰值,随后逐级下降。Sox2的相对表达量呈明显上调趋势。说明,cNanog、cPouV和Sox2在鸡早期胚胎发育调控中的重要作用,且作为全能性的标志基因,作用有所相同。 展开更多
关键词 干细胞 全能性 cnanog cPouV SOX2
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cPouV和cNanog基因在鸡胚多能性细胞发育过程中的表达定位 被引量:2
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作者 李东升 陈志胜 +4 位作者 王丙云 彭特 陈胜锋 计慧琴 陈金顶 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期733-739,共7页
研究cPouV和cNanog基因在鸡早期胚胎中的时空表达规律,探索鸡胚早期发育过程中胚胎干细胞的增殖分化规律,为进一步研究2基因在鸡胚早期发育中的作用奠定基础。本试验分别构建了pMD-18T-cPouV和pMD-18T-cNanog重组质粒,制备了地高辛(DIG... 研究cPouV和cNanog基因在鸡早期胚胎中的时空表达规律,探索鸡胚早期发育过程中胚胎干细胞的增殖分化规律,为进一步研究2基因在鸡胚早期发育中的作用奠定基础。本试验分别构建了pMD-18T-cPouV和pMD-18T-cNanog重组质粒,制备了地高辛(DIG)标记cPouV和cNanog基因的cDNA探针,采用原位杂交的方法检测cPouV和cNanog在鸡早期胚胎中的表达模式。结果表明:在原条发生前,cPouV和cNanog基因均匀表达于明区。原条期,cPouV基因在原条及其周围表达,cNanog基因则表达于原条周围,原条上未见表达。随着神经板的形成,2基因大量表达于神经板、神经管和脑部周围。待鸡胚发育至14HH阶段,2基因主要集中表达于头部和心等血管富集处,在外周血管中也能检测到其表达信号。综上表明:随着胚胎的发育,能够表达cPouV和cNanog基因的多能性干细胞逐渐由中央明区向外周迁移。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 原始生殖细胞 cPouV cnanog 原位杂交 鸡胚
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鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV干扰载体的构建及筛选 被引量:2
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作者 彭特 王丙云 +4 位作者 李东升 陈志胜 陈胜锋 计慧琴 陈金顶 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期117-121,共5页
旨在构建靶向鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV的siRNA表达载体,并在体外检测其对cNanog和cPouV表达的抑制作用。分别选择cNanog和cPouV中3个区域合成寡聚核苷酸构建siRNA表达载体,同时构建cNanog和cPouV全基因表达载体来检测... 旨在构建靶向鸡胚胎干细胞多能性相关基因cNanog和cPouV的siRNA表达载体,并在体外检测其对cNanog和cPouV表达的抑制作用。分别选择cNanog和cPouV中3个区域合成寡聚核苷酸构建siRNA表达载体,同时构建cNanog和cPouV全基因表达载体来检测基因表达下调的效果。经Western blotting检测显示,所构建的siRNA表达载体可在293T细胞内表达siRNA或shRNA,诱发RNA干扰效应,从而抑制目的基因cNanog和cPouV的表达。不同位点的寡核苷酸序列抑制效率不同,其中pS3-cNanog和pS3-cPouV重组质粒的干扰效果和抑制效率最好。研究结果为后续得到稳定干扰cNanog和cPouV基因的重组载体和进一步研究cNanog和cPouV基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 cnanog cPouV 干扰载体
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Effect of Down-regulated Expression of cPouV and cNanog on Pluripotency of Chicken(Gallus gallus) Embryonic Stem Cells(cESCs)
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作者 Zhisheng CHEN Te PENG +4 位作者 Shengfeng CHEN Dongsheng LI Huiqin JI Bingyun WANG Jinding CHEN 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2015年第3期53-58,共6页
To explore the pluripotency maintenance and update the functional influence of pluripotency genes cNanog and cPouV in chicken ( C,a/lus gallus) embry- onic stem cells ( cESCs), the stable RNAi vectors pSuper-cNano... To explore the pluripotency maintenance and update the functional influence of pluripotency genes cNanog and cPouV in chicken ( C,a/lus gallus) embry- onic stem cells ( cESCs), the stable RNAi vectors pSuper-cNanog and pSuper-cPouV constructed previously were used to transfect cESCs. The mRNA levels of two target genes were detected with real- time PCR. These two genes were down-regulated since the 48^th and the down-reg-lation continued with the extension of time, the interference efficiency reached 65% at 96^th hour (P 〈0.05). With the down-regulation of cNanog or cPouV gene, cESCs showed differentiation and prolifera- tion rate of these cells slowed down, the domed colony of these cells disappeared gradually when the edge of colony became irregular. At 96^th hour after transfection, the alkline phosphatase (AKP) and stage-specific embryonic antigen-1 ( SSEA-1 ) were not be detected in cNanog gene-knecked out eESCs, but it was done in that with cPouV gene -knocked out. The cPouV-suppressing cESCs were again transfected with pSuper-cNanog, the pluripotency markers AKP and SSEA-1 were both not found expressing at the 48^th hour. The results showed that cPouV and cNartog genes played an important role in maintaining pluripotency and self- renewal in cESCs, and cNanog gene was dominant. To sum up, our results may provide insights into the molecular regulation mechanism of avian during development. 展开更多
关键词 Chicken embryonic stem cells cnanog cPouV PLURIPOTENCY RNA interference
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