胃癌细胞中COX-2通过NF-κB/Snail调控E-cadherin表达的机制

目的探讨COX-2调控E-cadherin表达的相关信号通路及分子机制,揭示COX-2与胃癌侵袭转移的关系及作用机制。方法采用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,应用实时荧光定量RT-PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞中COX-2、NF-κB、Snail及E-cadherin mRNA和蛋白的表达情况。结果随着塞来昔布作用剂量的增大和干预时间的延长,COX-2、NF-κB和Snail mRNA及蛋白的表达量均显著下降(P<0.05),呈剂量和时间依赖性降低;E-cadherin mRNA及蛋白的表达量上升(P<0.05),呈剂量和时间依赖性升高。采用Spearman相关分析,显示COX-2与NF-κB及COX-2与Snail蛋白表达呈正相关性(r=0.881,P<0.01;r=0.839,P<0.01);COX-2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.814,P<0.01)。结论COX-2可能通过NF-κB/Snail信号通路调控E-cadherin的表达,进而参与胃癌的浸润转移过程。

p38MAPK抑制剂SB203580抑制人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用

目的 研究 p38MAPK通路在人绒癌 JAR细胞体外侵袭中的作用。方法 用细胞 EL ISA法测定 JAR细胞中 p38MAPK的活性变化 ;用 Transwell细胞侵入系统检测细胞的侵袭作用。结果 PMA呈浓度依赖性地激活 JAR细胞中 p38MAPK。 PMA能促进人绒癌 JAR细胞的体外侵袭作用 ,而 p38特异性抑制剂 SB2 0 35 80抑制了JAR细胞的侵袭能力。结论 p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为以及人绒癌的形成中具有重要作用。p38抑制剂可能会为人绒癌的防治提供新的途径。

MAPK信号传导通路对人炎性乳腺癌细胞系侵袭能力的影响

目的:本研究探讨上皮钙粘蛋白(E-cadherin)基因显性负调控质粒(pcDNA3.1(-)H-2kd-E-cadherin)导入SUM149细胞系后,对丝裂原活化蛋白激酶信号传导系统(mitogenactivatedproteinkinasecascade,MAPK)的相关信号通路及调控机制的改变情况。方法:应用蛋白印迹法,检测了人炎性乳腺癌细胞系SUM149、E-cadherin基因显性负调控突变体高表达的SUM149阳性克隆中MAPK激酶活性的变化。结果:与对照组(未转染及空质粒组)相比,转染后并稳定高表达小鼠H-2kd阳性克隆的细胞中,磷酸化的细胞外信号调节激酶(extracellularsignalregulatedkinase,p-ERK1/2,phospho-P44/42)明显降低;而磷酸化P38激酶无显著变化。结论:在异常高的E-cadherin功能性表达人炎性乳腺癌细胞系SUM149中,下调上皮钙粘着蛋白表达明显抑制其侵袭能力。其可能通过下调丝裂原活化蛋白激酶信号传导系统MAPK中的磷酸化细胞外信号调节激酶(phos-extracellularsignalregulatedkinase)phos-Erk1/2降低基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-9等表达,从而明显抑制其侵袭能力。

上调miR-200a、miR-141表达对胃腺癌细胞生长的体外研究

目的探究上调microRNA(miR)-200a和miR-141表达对胃腺癌细胞系SGC-7901细胞侵袭迁移的影响。方法脂质体介导miR-200a(miR-200a组)、miR-141(miR-141组)、miR-200a+miR-141(miR-200a+miR-141组)拟似物转染SGC-7901细胞,同时设未转染组(对照组)、无义序列转染组。应用qRT-PCR检测转染后各组miR的表达,Transwell小室法和划痕实验检测转染后细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测转染后E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,并进行比较分析。结果与对照组和无义序列转染组相比,miR-200a、miR-141和miR-200a+miR-141组miR表达较高,细胞穿膜细胞数较少(均P<0.05),划痕法显示SGC-7901细胞阻滞效果更明显,E-cadherin表达增加,N-cadherin、MMP-9表达减少,且以上变化在miR-200a+miR-141组更显著。结论上调miR-200a、miR-141表达可有效抑制SGC-7901细胞的侵袭迁移。

siRNA下调鞘氨醇激酶-1对结肠癌LOVO细胞凋亡和侵袭的影响及其机制的研究

目的研究siRNA下调鞘氨醇激酶-1(Sphk1)的表达对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭以及ERK和p38通路的影响。方法采用siRNA抑制Sphk1的表达;采用MTT法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,Western杂交检测蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞Sphk1 mRNA表达,ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂(uPA)的分泌。结果 Sphk1 siRNA显著抑制Sphk1 mRNA和蛋白表达,并可诱导细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。抑制Sphk1的表达可降低ERK和磷酸化ERK蛋白的表达,并促进p38和磷酸化p38蛋白的表达,同时可抑制细胞MMP-2、MMP-9和uPA的分泌。结论抑制Sphk1可能是通过抑制ERK并激活p38 MAPK通路,下调MMP-2、MMP-9和uPA的分泌,从而抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭并促进细胞的凋亡。

RNAi靶向沉默乳腺癌细胞系MCF-7中EphA2表达的实验研究

目的探讨逆转录病毒介导的RNAi对乳腺癌细胞系MCF-7中EphA2表达的影响。方法构建重组的表达EphA2siRNA的逆转录病毒载体,将重组载体和空载体转染入MCF-7细胞中,筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养,并用Westen blot检测EphA2蛋白的表达情况。结果 Western blot分析,与对照空载体及未转染细胞比较,重组逆转录病毒载体转染的MCF-7细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论通过逆转录病毒载体介导的RNAi,能够抑制MCF-7细胞中EphA2的蛋白表达,为观察转染siRNA的逆转录病毒表达载体的乳腺癌细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础,为以EphA2为靶向的乳腺癌的基因治疗提供了新的思路和手段。

PP2可增强乳腺癌Hs578T细胞缝隙连接功能

目的：探讨Src激酶抑制剂PP2对乳腺癌细胞Hs578T缝隙连接功能的影响.方法：MTT法检测PP2对乳腺癌细胞生长的影响;细胞接种荧光示踪法观察PP2对乳腺癌细胞之间荧光传递功能的影响;Westem blot法检测PP2对乳腺癌细胞Sre激酶表达的影响.结果：1～8μmol/L浓度的PP2对乳腺癌细胞生长几乎无影响;细胞接种荧光示踪结果显示,1～8μmol/L的PP2能显著增强细胞荧光传递功能（P＜0.01）,8μmol/L的PP2作用6、12和24 h后细胞荧光传递功能亦明显增强（P＜ 0.01）;Western blot结果显示,PP2（1～8 μmoL/L）可显著降低Src激酶表达（P＜0.05 ～0.01）,8μmol/L PP2作用6、12和24 h后Src激酶的表达亦明显降低（P＜0.01）.结论：PP2能增强乳腺癌细胞Hs578T的缝隙连接功能,这种增强作用可能与其降低Src激酶表达有关.

热激蛋白在乳腺癌细胞中的表达及其意义

目的:探讨热激蛋白(heat shock protein,HSP)90、70、27在高转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-435s和MDA-MB-231中的表达情况及其意义。方法:MTT法检测HSP 90抑制剂geldanamycin(GA)对2株乳腺癌细胞株粘附基质胶能力的影响;侵袭小室重组人工基底膜侵袭实验检测HSP 90抑制剂GA对2株细胞的侵袭能力的影响;RT-PCR和Western blot实验检测2株细胞中HSP 90、HSP 70和HSP 27 mRNA及其蛋白质水平的表达差异。结果:GA能够明显抑制MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞粘附基质胶的能力(P<0.01);2株高转移性乳腺癌细胞株的侵袭能力比较无显著性差异(P>0.05),GA能够明显抑制2株乳腺癌细胞的侵袭能力,与对照组相比,MDA-MB-231细胞侵袭能力下降(P<0.05),MDA-MB-435s细胞的侵袭能力下降更为明显(P<0.01)。MDA-MB-435s细胞中HSP 90蛋白质和HSP 90αmRNA表达水平都明显高于MDA-MB-231细胞(P<0.01),MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中HSP 90βmRNA表达水平没有显著差异(P>0.05);MDA-MB-231细胞中HSP 27的mRNA和蛋白质的表达水平均明显高于MDA-MB-435s细胞(P<0.01);MDA-MB-435s细胞中HSP 70蛋白质的表达水平与MDA-MB-231细胞没有显著性差异(P>0.05),HSP 70 mRNA表达水平低于MDA-MB-231细胞(P<0.05)。结论:HSP表达特性与乳腺癌细胞的粘附、侵袭能力相关;MDA-MB-435s细胞中HSP 90较高水平表达,MDA-MB-231细胞中HSP 27表达水平较高。

MicroRNA-206可能通过调控Cx43表达调节人乳腺癌细胞的转移能力

目的通过干预人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中微小RNA206(microRNA-206,miR-206)的表达,观察连接蛋白43(connexin43,Cx43)的表达以及细胞在增殖、迁移和侵袭能力等方面的变化。方法使用荧光定量RTPCR(qRT-PCR)检测正常乳腺细胞MCF-10A和MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-206的表达水平。通过构建慢病毒载体转染MCF-7及MDA-MB-231细胞,分别升高和降低miR-206的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Cx43的mRNA及蛋白表达水平的变化。利用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力。结果 MCF-7和MDA-MB-231中miR-206的表达均明显低于正常细胞株;其中MCF-7细胞中miR-206表达水平较MDAMB-231中低,Cx43表达水平较MDA-MB-231中高。转染慢病毒包装靶向增强miR-206表达的shRNA载体LV-hsa-miR-206(1569-11)后,MCF-7细胞的miR-206表达明显上升,Cx43的mRNA表达水平及蛋白表达水平均明显下降;细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低。转染慢病毒包装靶向抑制miR-206表达的shRNA载体LV-hsa-miR-206-inhibition后,MDAMB-231细胞的miR-206表达明显下降,Cx43 mRNA表达水平及蛋白表达水平均明显上升;细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显增强;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论干预miR-206的表达可导致Cx43表达水平的变化,并影响人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力;miR-206可能通过抑制Cx43的表达调节了乳腺癌细胞的转移能力。

紫杉醇对人肝癌细胞SMMC-7721黏附及侵袭转移潜能的影响

目的探讨紫杉醇对人肝癌细胞株SMMC-7721的黏附及侵袭转移潜能的影响及机制。方法应用体外细胞-基质黏附实验检测不同浓度紫杉醇对SMMC-7721与Matrigel胶(人工基底膜胶)黏附性的影响;Transwell小室模型测定紫杉醇对细胞侵袭和迁移能力的影响;蛋白免疫印迹检测紫杉醇对细胞内黏着斑激酶(FAK)蛋白表达量的影响。结果不同浓度紫杉醇(10、20、40 nmol/L)作用SMMC-7721细胞60 min后,细胞与Matrigel胶黏附性下降;紫杉醇干预24 h后,细胞的侵袭能力及迁移能力随紫杉醇浓度提高而明显减弱;细胞内FAK蛋白的表达量也随紫杉醇浓度增高而明显下降。结论紫杉醇能抑制肝癌细胞SMMC-7721的黏附及侵袭转移,其机制可能与其抑制肝癌细胞内FAK的表达相关。

塞来昔布对人高转移性鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭力的影响

目的 研究塞来昔布（Cox-2选择性抑制剂）对人鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭力的影响及其相关机制.方法 用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,Transwell小室检测细胞侵袭力的改变;免疫细胞化学检测肿瘤细胞中E钙黏素蛋白表达变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中Cox-2和E钙黏素mRNA表达变化.结果 塞来昔布明显抑制CNE-2Z细胞存活率,呈明显的浓度依赖性,24 h后25、50、100 μmol/L塞来昔布组细胞存活率（-x±s,下同）分别为（94.75±1.34）%、（91.77±2.70）%、（64.54±1.20）%,48 h后细胞存活率分别为（88.41±1.28）%、（78.84±1.56）%、（52.46±2.25）%,50%抑制浓度（IC50）为100 μmol/L,同一时间点细胞存活率差异有统计学意义（F值分别为462.204和1328.306,P值均＜0.01）.0、25、50 μmol/L塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h,侵袭实验显示穿膜细胞数（-x±s,下同）分别为（263.7±13.5）个、（185.3±8.7）个、（144.0±8.2）个,用药组穿膜细胞数明显减少,组间差异有统计学意义（F=102.089,P＜0.01）.免疫细胞化学结果显示,0、25、50μmol/L塞来昔布组E钙黏素阳性表达的CNE-2Z细胞数分别为（21.7±2.6）个、（28.7±2.4）个、（40.3±1.3）个,50 μmol/L组阳性细胞数明显增多（F=78.637,P＜0.01）.RT-PCR结果显示：25、50 μmol/L组Cox-2 mRNA的表达比对照组明显下降（t值分别为23.950和36.651,P值均＜0.01）;25、50 μmol/L塞来昔布组E钙黏素mRNA的表达明显高于对照组（t值分别为35.829和81. 497,P值均＜0.01）.结论 塞来昔布抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的侵袭能力,其机制可能与E钙黏素表达升高有关.

SRGN诱导乳腺癌细胞EMT改变促进肿瘤侵袭转移

目的研究糖蛋白丝甘蛋白聚糖（SRGN）促进乳腺癌细胞侵袭转移的机制及SRGN表达调控的可能机制。方法运用实时定量PCR和信息检索检测SRGN在淋巴结转移与未转移乳腺癌临床标本中的表达差异；利用慢病毒shRNA干扰及过表达技术，建立稳定降低和过表达SRGN的乳腺癌细胞系MDA-MB-231shRNA及MCF-7-SRGN；体外Transwell实验检测SRGN对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响；Western blot实验检测上皮-间质转化（EMT）相关标志物的改变；最后通过West—ern blot实验检测SRGN可能的表达调控机制。结果SRGN在淋巴结转移的乳腺癌临床标本中表达明显增高，干扰SRGN可抑制肿瘤细胞的侵袭转移，并且SRGN可促进乳腺癌细胞发生EMT改变，TGFβ1可促进SRGN的转录表达。结论SRGN可诱导乳腺癌细胞发生EMT改变，进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移。

乳腺肌上皮细胞抑制乳腺癌细胞体外浸润能力的研究

目的研究乳腺肌上皮细胞对乳腺癌细胞浸润能力的影响。方法通过免疫组织化学、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｍａｔｒｉｇｅｌ细胞浸润能力实验，检测了乳腺癌细胞和乳腺肌上皮细胞中Ｍａｓｐｉｎ的含量，并分析肌上皮细胞抑制乳腺癌细胞浸润的作用机制。结果组织学检查发现在正常乳腺导管和乳腺原位癌的周围都有一层完整的乳腺肌上皮细胞，而在乳腺的浸润性乳腺癌中，这层肌上皮细胞就发现有缺损和断裂。在Ｍａｔｒｉｇｅｌ肿瘤细胞浸润实验中，肌上皮细胞及其ＣＭ能明显降低雌激素受体阴性乳腺癌细胞ＭＤＡＭＢ２３１的浸润能力。肌上皮细胞含有高含量的抗癌蛋白Ｍａｓｐｉｎ，并能大量分泌出细胞外。而这种蛋白在乳腺癌细胞中没有表达。结论乳腺肌上皮细胞具有抗肿瘤细胞浸润的能力，提示乳腺肌上皮细胞在体内乳腺癌的生长及发展中，可能具有重要的抗癌作用。

miR-181b/c靶向调控SRGN抑制乳腺癌细胞侵袭转移

目的 研究糖蛋白丝甘蛋白聚糖（SRGN）的表达与乳腺癌细胞侵袭转移的关系,及小分子RNA在SRGN表达调控中的作用.方法 应用实时定量PCR和Western blot检测SRGN在侵袭转移增强的乳腺癌MCF-7/5-Fu细胞与亲本转移能力弱的MCF-7细胞中的表达差异,利用siRNA干扰技术结合体外Transwell实验检测SRGN对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响.运用生物信息学软件预测可靶向SRGN的miRNA,并对接乳腺癌细胞MCF-7 vs MCF-7/5-Fu的miRNA差异表达芯片数据,同时利用miRNA定量PCR确定候选miRNA的表达差异.通过转染miRNA模拟物结合western blot实验验证候选miR-NA对SRGN靶向调节作用,最后通过Transwell实验检测候选miRNA对肿瘤细胞侵袭转移的影响.结果 SRGN在侵袭转移增强的MCF-7/5-Fu细胞中表达明显增高,干扰SRGN可抑制肿瘤细胞的侵袭转移.此外,miR181b/c在MCF-7/5-Fu细胞中表达明显降低与SRGN表达呈负相关,并且miR181 b/c可靶向抑制SRGN表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭转移.结论 miR181 b/c可靶向抑制SRGN表达,抑制乳腺癌细胞的侵袭转移.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对Her2阳性乳腺癌细胞侵袭转移的抑制作用和机制

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275和线性肟酸（SAHA）对HER2阳性乳腺癌细胞系BT474和SKBR3侵袭转移能力的影响和可能的作用机制。方法采用4μmol／LMS-275、50μmol／LSAHA分别处理BT474及SKBR3细胞，对照组加入适当体积的PBS，四唑氮化合物（MTS）法检测细胞存活率，流式计数检测细胞凋亡率，Transwell实验检测细胞侵袭转移能力，Western blotting检测相关蛋白表达水平。结果SAHA、MS-275处理的BT474细胞存活率分别为（39±11）％、（54±8）％，SKBR3细胞存活率分别为（62±6）％、（71±9）％；SAHA、MS-275处理BT474细胞的凋亡比例分别为对照组的（8．46±0．29）倍和（4．15±0．71）倍，SKBR3细胞的凋亡比例分别为对照组的（5．51±1．24）倍和（4．04±0．69）倍；BT474细胞对照组、SAHA处理组、MS-275处理组迁移至下室细胞数分别为184．7±18．8、104．3±7．1、131．3±9．1，SKBR3细胞对照组、SAHA处理组、MS-275处理组迁移至下室的细胞数分别为60．0±16．7、14．3±6．5、34．3±8．7；Western结果显示SAHA、MS-275能够抑制BT474、SKBR3细胞中Vimentin、Her2、β-eatenin、HDAC1的表达，上调H3的乙酰化水平及E-eaherin的蛋白表达水平。结论SAHA和MS-275抑制HER2阳性乳腺癌细胞系BT474和SKBR3侵袭转移作用，可能与其抑制Vimentin、Her2、β—catenin，上调E—eaherin表达有关。