对羟基苯甲醛对实验性肠纤维化的作用机制

目的基于小鼠肠纤维化模型、体外上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)模型探讨对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde,HD)对小鼠肠纤维化的作用和机制。方法采用HE染色、Masson染色、免疫组化、qPCR、Western blot等实验方法验证HD对小鼠肠纤维化的作用及其机制。结果在体内实验中,相较于正常组,葡聚糖硫酸钠诱导的肠纤维化模型组小鼠结肠缩短,结肠组织病理评分升高,胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)升高,Ⅰ型胶原(collagenⅠ)明显表达升高。在使用4、10、25 mg·kg-1HD治疗后,相较于模型组,缓解了小鼠结肠缩短,且组织病理评分、CVF及collagenⅠ的表达呈剂量依赖性降低。而在体内外实验中,相较于模型组,HD都能够呈剂量依赖性抑制结肠组织和IEC-6细胞中EMT相关因子α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(N-cadherin),升高上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白和mRNA表达。结论HD能够通过抑制EMT改善实验性肠纤维化。

P120-连环蛋白介导钙黏蛋白转换促进口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的实验研究

目的探索P120-连环蛋白(P120ctn)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞钙黏蛋白转换中的作用及其对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法采用质粒p GFP-V-RS-P120ctn sh RNA转染OSCC细胞株TSCCA,采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot检测细胞中P120ctn、E-钙黏蛋白(E-cad)和N-钙黏蛋白(N-cad)的m RNA和蛋白表达的变化,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移实验检测转染前后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果质粒p GFP-V-RSP120ctn sh RNA转染TSCCA细胞后,P120ctn表达明显降低,E-cad的m RNA和蛋白表达水平也明显降低,而N-cad的m RNA和蛋白表达水平明显提高,细胞迁移和侵袭能力也明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在OSCC中P120ctn可能通过介导钙黏蛋白转换来调节肿瘤的浸润和转移过程。

建立稳定敲减MAP4K4表达的A549细胞系及初步分析

目的分析敲减MAP4K4表达对癌细胞增殖及迁移运动的影响,并探究潜在的分子机理。方法构建稳定敲减MAP4K4表达A549细胞,并综合免疫荧光、细胞增殖与迁移运动等实验方法,检测其亚细胞定位,并分析对照组与敲减组细胞增长及迁移运动变化情况。结果A549细胞中MAP4K4定位于黏着斑及细胞边缘部位,稳定敲减MAP4K4表达诱导癌细胞成簇生长,阻滞细胞周期进程及细胞迁移运动。进一步分析发现,敲减MAP4K4表达诱导E-cadherin积累而下调N-cadherin,扰乱“钙黏蛋白转换”及上皮-间质转换。最终,对照组与敲减组细胞分别联合顺铂(终浓度为5μmol/L)及紫杉醇(终浓度为20 nmol/L)处理,稳定敲减MAP4K4表达可明显增强化疗药物对癌细胞的杀伤效果。结论A549细胞中MAP4K4可通过调控“钙黏蛋白转换”促上皮-间质转化而调控癌细胞恶性表型及化疗耐药。