肾损伤分子1介导游离轻链内吞致近端肾小管上皮细胞损伤

目的:探究近端肾小管上皮细胞中肾损伤分子1(KIM-1)介导免疫球蛋白轻链(FLCs)内吞对肾小管损伤的影响及机制。方法:(1)选取4例多发性骨髓瘤肾损伤患者尿标本,采用离子交换层析法纯化FLCs;(2)体外实验构建纯化的FLCs诱导人肾脏近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤模型,继续给予FLCs刺激,并予KIM-1抑制剂TW-37干预;体内实验向小鼠腹腔注射FLCs,14 d后建立FLCs致小鼠肾小管损伤的动物模型,并予TW-37干预。Western Blot检测HK-2细胞和小鼠肾组织KIM-1、megalin、核因子E2相关因子2(Nrf2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β(TGF-β)等水平,ELISA法检测小鼠尿白蛋白/肌酐比值、尿液KIM-1的含量,天狼星红染观察小鼠肾间质纤维化程度等。结果:(1)体外实验中FLCs刺激HK-2细胞诱导KIM-1表达增加,并与FLCs存在共定位,TW-37处理后可减少HK-2细胞中FLCs内吞,减轻FLCs刺激所致的肾小管细胞溶酶体的核周聚集,降低氧化应激及纤维化指标表达。(2)动物模型结果显示,TW-37干预可缓解FLCs所致的肾小管损伤,包括尿KIM-1水平及肾组织KIM-1表达下降,肾组织氧化应激和纤维化指标表达下降,肾组织胶原沉积减轻。结论:KIM-1可介导肾近端小管细胞内吞FLCs,抑制KIM-1有助于缓解FLCs造成的肾损伤。

镉引起肾脏毒性的细胞凋亡通路

肾近端小管是镉主要的作用靶器官,但人们对镉引起肾脏毒性的作用机制仍不清楚。在体内外的研究中,镉能够诱导肾近端小管上皮细胞的凋亡,这表明通过细胞凋亡通路引起上皮细胞的凋亡可能是镉引起肾脏毒性的关键环节之一。部分研究表明镉在不同细胞可通过多个途径来引起细胞凋亡,包括线粒体介导的及死亡受体介导的凋亡通路。本篇综述将在以往镉相关及细胞凋亡的文献报道及其重大发现的基础上,特别是在肾脏及肾脏近端小管上皮细胞的研究基础上,来阐述镉通过细胞凋亡来诱导肾脏毒性的作用机制。

铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响

为观察铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响 ,对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后 ,采用 3× 3析因设计方法进行染毒实验 ,A组 :醋酸铅 0 0 2mmol L ;B组 :醋酸铅 0 1mmol L ;C组 :氯化镉 0 0 0 1mmol L ;D组 :氯化镉 0 0 0 4mmol L ;E组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;F组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L ;G组 :醋酸铅 0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;H组 :醋酸铅0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L。染毒时间为 6小时。经超声波粉碎细胞后 ,测定细胞内谷胱甘肽 (GSH)和丙二醛 (MDA)的含量 ,以及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)的活性。与对照组比较 ,联合染毒组GSH、GSH Px、SOD水平显著降低 ,MDA水平显著升高 ,析因分析表明 ,铅镉联合作用在对大鼠肾小管上皮细胞GSH、SOD、MDA改变方面有交互作用 (P <0 0 5 ) ,即铅镉联合作用呈现增毒作用 ;在对GSH

铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

目的 探讨铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的影响。方法 对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后,以醋酸铅0、0.02、0.1、0.5 mmol/L,氯化镉0、0.001、0.004、0.02 mmol/L进行染毒,以及铅、镉2X2联合染毒,测定NAG变化。结果 单独染铅0.02、0.1 mmol/L,NAG活力与对照组之间差异无显著性,染铅0.5mmol/L时,差异有显著性;单独染镉0.001、0.004mmol/L,NAG活力与对照组之间差异无显著性,染镉0.02 mmol/L时,差异有显著性。当铅+镉以（0.02+0.001）、（0.02+0.004）、（0.1+0.001）、（0.1+0.004）mmol/L的剂量联合染毒时,4组NAG活力明显高于对照组和单独染铅组;除（0.1+0.001）mmol/L组外,其余3组NAG活力明显高于单独染镉组。结论 铅镉联合作用使大鼠肾小管上皮细胞NAG释放增加。

镉染毒后肾小管上皮细胞内氧自由基代谢与损伤之间关系的研究

本文以离体肾小管上皮细胞为研究对象，观察了镉致肾小管上皮细胞损伤时细胞内氧自由基反应及其与细胞超微结构改变之间的关系。结果表明，镉可诱发离体肾小管上皮细胞脂质过氧化反应增强，脂质过氧化产物明显增加，超氧化物歧化酶及过氧化氢酶活性显著受抑，与此同时肾小管细胞出现一系列超微结构改变；抗氧化剂ＶｉｔＥ可使脂质过氧化作用明显减弱，提示镉致肾小管上皮细胞损伤与氧自由基对细胞膜结构及功能的损伤有关，氧自由基在镉致肾损伤中起重要作用，抗氧化剂的使用对镉中毒有一定的保护作用。

氧化应激对猪肠道损伤机制的研究进展

畜牧业生产过程中出现的种畜繁殖障碍、幼畜成活率低和发病率高、畜产品品质下降等都与氧化应激有关,氧化应激已经成为动物健康与营养研究的热点。本文对肠道氧自由基产生来源、氧化应激影响肠上皮细胞增殖分化机制及猪生产中氧化应激对肠道氧化损伤进行了综述。

茶多酚和维生素C对人胚肾293细胞缺糖缺氧损伤保护作用的比较

目的从细胞水平研究茶多酚(TP)对人胚肾293细胞缺糖缺氧性损伤的保护作用,并与抗氧化剂维生素C(VC)进行比较。方法采用缺糖培养基并以连二亚硫酸钠消除培养基中的氧,诱导产生缺氧缺糖损伤模型,测定细胞的存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及总抗氧化能力,并计算IC50。结果在细胞损伤模型中,TP和VC均表现出极强的抗氧化能力,TP能显著提高细胞的存活率、SOD活性和总抗氧化能力并抑制LDH的活性,TP的作用均大于VC。结论TP和VC体外具有强大的自由基清除作用,且呈现明显的剂量依赖性,TP在细胞损伤模型中的抗自由基作用均大于VC。

胎肾细胞悬液对去卵巢大鼠自由基的影响

目的探讨大鼠去卵巢后自由基的变化以及胎肾细胞悬液对其干预作用。方法48只SD大鼠,取8只作为正常对照组,行假手术;其余40只行去卵巢手术,术后随机分为4组。正常对照组及模型对照组给予生理盐水;阳性对照组给予尼尔雌醇;胎肾活细胞悬液组给予活细胞悬液、胎肾死细胞悬液组给予死细胞悬液。药物干预4周后,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量以及一氧化氮合酶(NOS)活力。结果与正常对照组比较,模型对照组血清SOD、NOS活力以及NO含量均明显下降,MDA含量明显上升(均P<0.01);与模型对照组比较,胎肾活细胞悬液组及胎肾死细胞悬液组SOD活力均有上升(P<0.05,P<0.01);NO含量、NOS活力均明显上升(P<0.05);MDA含量均明显降低(P<0.01);干预3组间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论去卵巢后大鼠自由基增高,应用胎肾细胞悬液进行干预,能减轻自由基的损伤,增强机体的抗氧化能力。

铅镉联合对体外培养大鼠肾小管上皮细胞存活及凋亡的影响

采用机械筛网结合酶消化法建立了大鼠原代肾小管上皮细胞培养模型,在传代细胞增殖活性最强时间段进行铅、镉单独染毒或联合染毒。通过CCK-8还原法和流式细胞仪检测不同时间铅、镉对细胞存活率和凋亡率的影响。结果显示,铅、镉单独染毒高剂量组从第6 h开始、低剂量组从第12 h开始,其细胞存活率显著低于对照组(P<0.05);铅、镉联合染毒组从第3 h开始,细胞存活率显著或极显著(P<0.05或P<0.01)低于对照组,且存活率的降低幅度与剂量呈正相关;染毒后第12 h,各组的凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01),铅、镉联合染毒组的细胞凋亡率显著高于各相关单独染毒组(P<0.05),呈明显的剂量-效应关系。

游离脂肪酸对人近曲肾小管上皮细胞HK-2的影响及作用机制

目的探讨游离脂肪酸(Free Fatty Acids,FFAs)对人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)的影响及作用机制。方法 用含有不同浓度(0、125、250、500μmol/L)软脂酸的DMEM-F12培养人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)在0h、24h、48h三个时段:MTT法检测不同环境下FFAs对HK-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测FFAs对细胞凋亡的影响,免疫细胞化学法检测处理前后HK-2细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及凋亡相关蛋白caspase8蛋白表达的变化。结果FFAs呈剂量和时间依赖性抑制HK-2细胞的增殖(P<0.05),并可诱导细胞凋亡(P<0.05)。经FFAs作用后i,NOS及Caspase8的表达增加。结论游离脂肪酸有抑制HK-2细胞增殖,促进其凋亡的作用,FFAs可能通过激活肾小管上皮细胞内的诱导型一氧化氮合酶(iN-OS),加剧肾小管上皮细胞的凋亡,而caspase8参与了其发生和发展的过程。

游离脂肪酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨游离脂肪酸(FFAs)对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)的凋亡作用及凋亡机制。方法用含有不同浓度(0、125、250、500μM)软脂酸的DMEM-F12培养肾小管上皮细胞(NRK-52E),在24h、48h两个时段以原位末端标记(TUNEL法)检测细胞凋亡率,用硝酸还原酶法测定以上各组培养液中一氧化氮(NO)水平。在48h时段用免疫细胞化学法检测caspase-3表达水平。结果随着软脂酸浓度的增高、作用时间的延长:①NRK-52E细胞的凋亡率逐渐增高,24h时三个软脂酸组按软脂酸浓度由低到高的凋亡率依次为(9.7±1.9)%、(14.2±4.5)%、(23.4±5.3)%,48h时为(16.2±3.7)%、(24.8±4.4)%、(35.4±5.7)%,与对照组相比均有统计学意义(P<0.05);②在凋亡率增高组的培养液中测得NO浓度也增加,差异均有显著性(P<0.05)。③48h时各软脂酸干预组caspase-3阳性表达率增高,与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。结论游离脂肪酸具有促进肾小管上皮细胞凋亡的作用,而这种作用与其自身在FFAs作用下产生过多的NO使caspase-3高表达有关。

硒对急性镉中毒性肾损伤保护作用的研究

研究硒对急性镉中毒性肾损伤的保护作用。给大鼠腹腔注射镉（ＣｄＣｌ２１５μｍｏｌ／ｋｇ）与巯基乙醇（ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｌ，ＭＥ３００μｍｏｌ／ｋｇ）混合液的同时，皮下注射硒（Ｎａ２ＳｅＯ３１５μｍｏｌ／ｋｇ）。结果显示：加硒能明显降低肾皮质镉含量，降低肾线粒体、胞浆氧自由基含量，并可拮抗镉所致大鼠线粒体的脂质过氧化物含量，使ＧＳＨ－Ｐｘ活性在１２小时后显著升高；同时使镉所致肾功能及超微结构损伤得到改善。提示硒可能通过抗氧化作用来防治镉所致肾损伤。

丹参对兔重症急性胰腺炎肠粘膜上皮细胞线粒体呼吸链功能的影响

目的 研究丹参对兔重症急性胰腺炎 (SAP)肠粘膜上皮细胞线粒体呼吸链功能及氧自由基的影响。方法 36只日本大耳兔 ,建立兔SAP模型 ,随机分为丹参组和生理盐水组 ,分别于术后 2、 6、12h分离小肠粘膜上皮细胞内线粒体 ,检测肠粘膜上皮细胞线粒体内细胞色素aa3、细胞色素C、能荷和SOD水平。结果 ①术后 2h内 ,两组肠粘膜上皮细胞线粒体内细胞色素aa3水平无显著差异 (P >0 0 5 ) ,术后 6h、 12h生理盐水组肠粘膜上皮细胞线粒体内细胞色素aa3水平均低于丹参组 (P <0 0 5 ) ;②术后2、 6、 12h生理盐水组肠粘膜上皮细胞内细胞素C水平、能荷和SOD活力较丹参组下降 (P <0 0 5 )。结论 丹参能显著提高细胞色素aa3、细胞色素C、能荷和SOD水平 。

人参皂甙Rb1,Rg1和维生素E保护氧化损伤的牛视网膜色素上皮细胞生长的研究

目的 检验人参皂甙Rb1,Rg1和维生素E是否能抑制次黄嘌呤 (HX) /黄嘌呤氧化酶 (XO)对培养的牛视网膜色素上皮 (RPE)细胞的氧化损伤作用。方法 建立牛眼RPE细胞培养体系以及RPE细胞氧化损伤模型。利用MTT法观察人参皂甙Rb1、Rg1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞增殖的影响。结果 加入不同浓度的Rb1后测得的细胞OD值普遍较HX/XO组的OD值高 ,但无显著性差异 ;当Rg1=0 1和 1μg/ml,维生素E =1和 10 μg/ml时测得的OD值与HX/XO组的OD值相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 Rg1和维生素E能对抗氧自由基对体外培养的牛RPE细胞生长的抑制作用 ,而Rb1的作用不明显。

镉对肾小管上皮细胞钙黏蛋白的影响

目的探讨镉对原代培养的肾小管上皮细胞毒作用的早期环节。方法采用筛网分离法分离Wistar大鼠肾小管上皮细胞;分别用10、20和50μmol/L的CdCl2溶液培养细胞01、、2和4 h,测定细胞活力、细胞内ALP活性、GSH含量、细胞外液LDH活性及上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)表达。结果不同浓度的CdCl2作用培养细胞后,可造成细胞内ALP活性下降,并表现出明显的剂量-反应关系和时间-反应关系;50μmol/L Cd Cl2作用细胞2 h时,细胞外液LDH活性已明显高于对照组;4 h时细胞内GSH含量与对照组比较显著下降;而10μmol/L的CdCl2作用细胞2 h,即可使肾小管上皮细胞钙黏蛋白在胞浆表达减少。结论在肾小管上皮细胞没有发生氧化损伤时,Cd2+就可干扰肾小管上皮细胞钙黏蛋白依赖的黏附连接;镉对肾小管上皮细胞钙黏蛋白依赖的黏附连接的损伤可能是镉毒性的最早表现之一。

镉对LLC─P_1细胞增殖与DNA合成的影响及硒的保护效应

观察了镉（Ｃｄ）对猪肾近曲小管上皮细胞（ＬＬＣ－ＰＫ１）增殖和ＤＮＡ合成代谢的影响，及亚硒酸钠和硒代蛋氨酸的保护作用。结果表明，Ｃｄ对ＬＬＣ－ＰＫ１细胞增殖有明显的抑制作用；低浓度Ｃｄ（３μｍｏｌ／Ｌ）与细胞作用３小时，对ＤＮＡ合成有一定的促进作用；当Ｃｄ浓度达到１６μｍｏｌ／Ｌ时ＤＮＡ合成受到明显的抑制；Ｃｄ与细胞作用１２小时，对ＲＮＡ及蛋白质合成也具有明显的抑制作用。结果还显示，Ｎａ２ＳｅＯ３对Ｃｄ抑制的ＤＮＡ合成作用无任何保护作用，而Ｄ，Ｌ－ＳｅＭｅｔ在一定程度上能减轻Ｃｄ对ＬＬＣ－ＰＫ１细胞ＤＮＡ合成的抑制作用；Ｄ，Ｌ－ＳｅＭｅｔ提前或与Ｃｄ同时加入的两种给药方式，其保护作用没有明显差异。

活性氧作用下肾上皮细胞的药物保护及机理

观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）及异搏停（ＶＥＲ）对活性氧作用下的肾上皮细胞（ＲＥＣ）的保护效果，以探讨其可能机制。结果显示预先应用ＡＴＰ、ＣＡＴ和ＶＥＲ均使处于活性氧作用下肾上皮细胞培养基中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及细胞活力维持或接近正常水准。提示能量危机、氧自由基（ＯＦＲ）毒性和钙超载可能是细胞缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤病理生理中的重要环节，向细胞供能、清除ＯＦＲ及维持钙稳态是防治肾Ｉ／Ｒ损伤的重要措施。

雷洛昔芬对氯化镉染毒肾小管上皮细胞的影响

目的观察雷洛昔芬对氯化镉染毒肾小管上皮细胞中雌激素受体α(ERα)、ERβ和金属硫蛋白-1a(MT-1a)基因表达的影响,并探讨其机制。方法选取新生Sprague Dawley(SD)大鼠的肾脏组织进行细胞培养,采用Percoll法分离纯化肾小管后原代培养。选取第2代细胞进行实验。实验分为空白对照组、氯化镉组、雷洛昔芬组。4 h后采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,24 h后应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化检测ERα、ERβ及MT-1a mRNA及蛋白水平。结果与空白对照组比较,氯化镉组大量细胞的形态发生改变,细胞大量死亡,存活率为55.3%,同时ERβ,MT-1a mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);与氯化镉组比较,雷洛昔芬组仅少量细胞形态发生改变,存活率88.6%,ERβ,MT-1a mRNA及蛋白表达水平下降(P<0.05)。而ERα表达在3组间变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论雷洛昔芬可竞争性与ERβ结合,下调MT-1a的表达,减少Cd-MT复合物的形成,而降低镉对肾小管上皮细胞的损伤。

酒精阳性乳乳腺上皮细胞ATP酶及膜磷脂组分的变化

为探讨酒精阳性乳的发病机理,试验从乳腺组织自由基代谢和膜损伤角度出发检测了酒精阳性乳患牛乳腺组织抗氧化指标,同时检测了膜ATP酶的活性,并对膜磷脂组分进行了检测。结果表明:酒精阳性牛乳腺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性略微下降,而丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性均显著降低(P<0.05);细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)的相对含量明显下降(P<0.05)。提示酒精阳性乳患牛乳腺组织氧化、抗氧化体系失去平衡,产生的过多自由基及脂质过氧化物攻击乳腺细胞膜,造成膜磷脂组分的改变,膜功能异常而分泌异常乳。

人小肠上皮细胞缺氧复氧损伤的预防研究

应用原代培养人小肠上皮细胞（IEC），观察缺氧复氧（A／R）对体外培养人IEC的损伤作用。结果表明：A／R可使IEC细胞存活率下降和乳酸脱氨酶（LDH）漏出增加，二者呈显著的负相关，其变化程度与A／R时间有依从关系。在缺氧前或缺氧后复氧前联合应用超氧化物歧化酶和过氧化氢酶可减轻A／R诱发的细胞存活率下降和LDH漏出量增加，应用别嘌呤醇世有同样的保护作用。表明：人IEC在复氧时可产生超氧基并引起细胞损伤。