CAL模式在营销策划教学中的应用

营销策划课程的教学目标是培养学生的市场营销实战操作能力。传统教学模式并不利于学生分析和解决问题能力的培养,将CAL教学模式的具体实施步骤和课堂设计运用到营销策划课程教学中,有助于培养学生分析问题和解决问题的能力,同时可以体现营销专业课程教学与企业营销实践相结合的理念。

大麦芒型突变基因cal-d的遗传定位

芒是麦类作物穂部器官的重要组成部分,在提高籽粒产量、促进种子传播和防御虫害等方面具有重要作用。大麦具有丰富的芒型突变体,加之其二倍体的特性,成为麦类作物芒器官形态建成研究的理想作物。本研究报道了一个大麦芒型突变体材料calcaroides,表现为外稃顶端或是稃芒基部异形凸起,形成呈钩状不完全花器结构,属基部钩芒类型。突变体芒较短并伴随抽穗期推迟,株高、穗长和穗粒数显著降低等表型。遗传分析表明,突变体的芒型突变性状受单隐性基因cal-d控制。前期利用cal-d导入系BW106×Bowman的F_(2)群体,结合简化基因组测序(GBS,genotyping by sequencing)分析,将cal-d基因初步定位于3H染色体。进一步利用来自F_(2)的杂合单株,包括13000株单株的F_(2:3)群体进行精细定位,最终将cal-d基因定位于3H染色体153~329 Mb区间的近着丝粒区域。通过转录组混池测序分析结合大麦基因组和表达谱资源数据库,初步筛选了9个候选基因。本研究结果为大麦芒型突变基因cal-d的克隆与功能验证奠定了基础,对于解析麦类作物芒的遗传发育机制具有重要的意义。

基于单原子铁纳米催化剂的纳米催化疗法对 口腔鳞癌细胞Cal27的作用

目的:制备单原子铁纳米催化剂(single-atom Fe nanocatalysts,SAF NCs),探讨其体外治疗口腔鳞癌的疗效,为口腔鳞癌治疗提供新策略。方法:用隔离与热解结合方法制备SAF NCs,利用透射电镜和球差电镜观察微观形态,X射线衍射图和元素分布能谱分析其结构和成分,溶液层面采用TMB显色实验和电子自旋共振试验检测催化性能,最后通过CCK-8和流式细胞技术、共聚焦显微镜观察体外处理口腔鳞癌Cal27细胞后的活性变化。采用GraphPad Prism 9软件包对数据进行统计学分析。结果:成功合成和表征SAF NCs,在溶液层面显示出优异的催化特性。细胞实验中,SAF NCs显示出良好的生物相容性,在模拟肿瘤微环境特性的条件下,进行体外催化治疗,Cal27细胞活性低至32.08%。结论:初步实验证明,SAF NCs具有良好的生物催化性能,在体外可有效抑制口腔鳞癌细胞增殖,为口腔鳞癌治疗提供了新策略。

新藤黄酸对CAL27细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡作用的研究

目的:探讨新藤黄酸(GNA)对CAL27细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。方法:将18只SPF级裸鼠随机分为对照组、GNA低剂量组及GNA高剂量组(n=6)。通过接种对数生长期的舌鳞癌CAL27细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,低及高剂量组裸鼠分别隔日静脉注射新藤黄酸8.0 mg/kg与16.0 mg/kg干预,对照组给予等量生理盐水。给药期间绘制肿瘤生长曲线,2周后处死裸鼠并取出肿瘤组织,计算抑瘤率。TUNEL法检测各组裸鼠移植瘤细胞凋亡;免疫组化法检测瘤体组织的AKT、Bcl-2与PI3K蛋白的表达水平;HE染色法检测新藤黄酸对正常组织器官的毒副作用。结果:GNA低及高剂量组裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤重及瘤体积明显低于对照组(P<0.05),低和高剂量组抑瘤率分别为57.58%和83.68%。TUNEL结果表明,GNA低及高剂量组凋亡指数高于对照组;免疫组织化学结果表明,GNA低及高剂量组裸鼠肿瘤组织的AKT、Bcl-2及PI3K的表达显著低于对照组(P<0.05)。HE结果显示,GNA对正常组织器官无明显改变。结论:GNA可能通过调控肿瘤组织AKT、Bcl-2及PI3K等蛋白的表达,诱导CAL27细胞凋亡,抑制人舌鳞癌的发生发展,对正常组织器官无明显毒副作用。

miR-449a下调TGIF2抑制甲状腺癌细胞CAL-62恶性增殖的研究

目的 探讨miR-449a靶向TGIF2对甲状腺癌细胞CAL-62恶性增殖、氧化应激和上皮间质转化(EMT)的调控作用。方法 以甲状腺癌细胞CAL-62作为研究对象。分为对照组、miR-449a mimic组、pcDNA-TGIF2组、miR-449a mimic+pcDNA-TGIF2共转染组。采用RT-qPCR检测细胞中miR-449a和TGIF2表达;TargetScan软件与双荧光素酶报告实验验证二者靶向关系;CCK8检测细胞活力;Brdu染色检测细胞增殖;试剂盒检测氧化应激标记物SOD和MDA含量;DCF染色检测ROS含量;Western blot检测EMT标记分子E-cadherin, N-cadherin和Fibronectin的蛋白表达。结果 TGIF2在CAL-62细胞中表达较高,与对照组相比,pcDNA-TGIF2转染组BrdU阳性细胞数目和百分率显著增加,SOD含量显著升高而MDA和ROS含量显著降低,同时N-cadherin和Fibronectin表达显著上升而E-cadherin表达显著下降(均P<0.05)。在miR-449a mimic+pcDNA-TGIF2共转染组中上述现象被有效缓解和逆转。结论 miR-449a过表达可通过靶向TGIF2抑制甲状腺癌细胞CAL-62恶性增殖,加剧其氧化应激和上皮间质转换。

ADAMTS-7基因rs3825807及rs1994016位点多态性与KD发病及CAL的关联性分析

目的分析ADAMTS-7基因rs3825807、rs1994016位点多态性与川崎病(KD)发病及其冠状动脉损伤(CAL)是否存在关联性。方法选取KD患儿100例为KD组,健康体检儿童100例为健康组。提取两组外周血DNA进行基因测序,比较两组ADAMTS-7基因rs3825807位点及rs1994016位点的多态性差异。KD组根据是否存在冠状动脉损伤分为冠状动脉损伤组(KD-CAL组)和无冠状动脉损伤组(KD-NCAL组),比较两组ADAMTS-7基因rs3825807位点及rs1994016位点的多态性差异。结果KD组与健康组比较,KD-NCAL组与KD-CAL组比较,ADAMTS-7基因rs3825807位点A、G等位基因频率和AA、AG、GG基因型频率以及rs1994016位点C、T等位基因频率和CC、CT、TT基因型频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS-7基因rs3825807、rs1994016位点多态性与KD的发病及CAL不存在明显关联性。

芍药胼胝质合成酶基因家族鉴定及PlCalS5功能分析

【目的】CalS家族在调控植物胼胝质合成方面具有重要作用,鉴定芍药CalS家族成员,并进行生物信息学和表达模式分析,为芍药属远缘杂交不亲和研究提供依据。【方法】通过荧光显微镜观察自交、杂交柱头内花粉管生长过程及花粉萌发情况;测定柱头所含胼胝质、内源脱落酸含量(ABA)以及β-1,3-葡聚糖酶活性;分段克隆8个PlCalS并进行序列分析;使用Expasy、MEME、TBtools、MEGA 7.0等软件和在线工具预测PlCalS家族成员蛋白质基本理化性质、保守基序并构建系统发育进化树;利用qRT-PCR技术检测8个PlCalS在自交24 h、杂交24 h、杂交36 h的相对表达水平;对CalS5进行多序列比对并构建系统进化树,分析PlCalS5响应不同浓度ABA处理的表达特征。【结果】花粉管荧光显微观察发现杂交柱头内发生较为严重的胼胝质堵塞从而影响花粉管的正常生长及花粉的萌发。测定柱头内胼胝质含量发现多数时期自交柱头均低于同时期杂交柱头的含量,柱头内β-1,3-葡聚糖酶活性、ABA含量变化均具有一定的规律性。通过对结构域的完整性分析鉴定芍药PlCalS基因家族成员,后经同源性比对分析命名8个CalS,均含有15个保守基序且在PlCalS基因家族中的分布类似。多物种系统进化关系表明,CalS家族可分为3个分支,PlCalS家族仅分布在2个分支,其中PlCalS5与牡丹、拟南芥和番茄的CalS5亲缘关系较近。生物信息学分析结果表明8个家族成员编码1745—1951个氨基酸,原子总数为28583—31870个,等电点为7.99—9.13。对转录组FPKM值的分析表明,PlCalS家族成员在相同时期杂交处理中有较高表达,相同处理情况下在杂交36 h时高表达;荧光定量PCR表明,8个基因的相对表达量在自交24 h时均低于杂交24 h和杂交36 h。经两个浓度的ABA处理,发现PlCalS5对高浓度的ABA更为敏感。【结论】芍药CalS家族有8个基因成员且具有较高的保守性,8个家族成员对芍药胼胝质的生成起重要调控作用;大部分时期PlCalS在杂交柱头的表达量高于自交柱头,可能参与胼胝质异常沉积的过程;芍药杂交柱头异源花粉的刺激可能会增强某个ABA合成途径,ABA可能通过正调控胼胝质基因诱导胼胝质的积累,从而抑制花粉的萌发与花粉管的伸长,影响授粉亲和性。

线粒体calpains与细胞凋亡关系的研究进展

calpains是一类由Ca2+激活的内源性半胱氨酸蛋白酶。尽管先前研究认为calpains是一种胞质酶,最近研究发现μ-calpain、m-calpain、calpain10以及内源性抑制剂calpastatin也同时存在于线粒体中,在caspase依赖型和非依赖型细胞凋亡通路中均发挥着重要的作用。calpain除了与caspase相互作用外,还可剪切凋亡相关蛋白如Bcl-2、Bax、Bid等,促进Cyt-C、AIF的释放,从而参与调控细胞凋亡的病理过程。calpains作为潜在的治疗靶点,研究线粒体calpains与细胞凋亡通路的关系具有重大意义。

芍药苷对舌鳞癌CAL27细胞的抑制作用及机制探讨

目的:探讨不同浓度芍药苷(paeoniflorin,PF)对舌鳞癌CAL27细胞的体外抑制作用及可能的作用机制。方法:通过CCK-8法及克隆形成实验,研究PF对CAL27细胞增殖能力、克隆形成能力的影响。采用划痕实验及Transwell法,检测PF对CAL27细胞迁移和侵袭能力的影响。采用Hoechst33342染色,观察PF对CAL27细胞凋亡的影响。采用蛋白质免疫印迹(Western blot),研究PF对NF-κB通路及EMT相关蛋白表达的影响。通过一氧化氮检测试剂盒,检测PF对CAL27细胞NO产生量的影响。采用SPSS 27.0软件包对数据进行统计学分析。结果:PF在体外条件下对CAL27细胞的增殖、迁移及侵袭有抑制作用,且其抑制效应呈浓度依赖性。此外,PF促进CAL27细胞发生凋亡。PF可抑制NF-κB通路活化,降低P-P65表达,进而降低i NOS及MMP-9表达,抑制NO生成;同时抑制Vimentin表达,促进E-cadherin表达,最终抑制上皮-间质转化(EMT)。结论:PF抑制CAL27细胞增殖、迁移及侵袭,可能通过抑制NF-κB通路活化、抑制EMT而发挥抗癌作用。

miR-19a过表达对口腔鳞癌细胞CAL27增殖和迁移的影响及其机制研究

目的探究miR-19a对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响,进一步探究其机制与GRK6介导的PKC表达变化是否有关。方法脂质体法向CAL27细胞分别转染miR-19a模拟物(mimic组)和对照随机序列(对照组),RT-PCR检测miR-19a水平,MTT法检测增殖能力,划痕实验检验CAL27各组细胞迁移能力。通过蛋白免疫印迹法检测GRK6和PKC的表达。结果转染后的CAL27细胞株miR-19a表达明显增加(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-19a过表达的CAL27细胞增殖能力明显增强(P<0.05);划痕实验结果显示miR-19a过表达增强了CAL27细胞的迁移能力;与阴性对照组相比,miR-19a过表达组的GRK6蛋白水平下降,而PKC蛋白含量升高(均P<0.05)。结论miR-19a具有增强CAL27细胞增殖和迁移能力的作用,其机制可能与GRK6介导的PKC表达变化有关。

FaesCAL基因在同型长花柱甜荞中的表达分析

为探究同型长花柱甜荞花的发育调控的分子机制,从同型长花柱甜荞中分离得到1个全长984 bp的CAL同源基因cDNA序列,命名为FaesCAL。FaesCAL基因包含长726 bp的完整开放阅读框,编码1个由241个氨基酸残基组成的MADS-box转录因子。蛋白序列比对及系统发育分析结果表明:FaesCAL蛋白属于MADS-box转录因子中的CAL进化系,包含1个由57个氨基酸残基组成的高度保守的MADS结构域和1个由68个氨基酸残基组成的次级保守区域的K结构域。通过实时荧光定量(qRT-PCR)检测FaesCAL基因在同型长花柱甜荞中的组织表达特异性显示:FaesCAL基因主要在根、雄蕊、花被片和5 d果实中表达,在雌蕊中表达量很低,在茎和叶片中不表达,并且在雄蕊和花被片中的表达量极显著高于其他组织(LSD,P<0.01)。进一步通过qRT-PCR检测FaesCAL基因在甜荞花芽分化5个关键时期表达量的动态变化显示:FaesCAL基因的表达量在开花前雌雄蕊成熟时表达量最高,在雄蕊花丝的迅速伸长和花被片原基的出现时期的表达量其次。推测该基因参与了甜荞的成花转变,并在雄蕊以及花被片的发育中发挥作用。

白花前胡CAL基因的克隆和原核表达分析

目的:克隆得到白花前胡花发育关键基因CAULIFLOWER(CAL)并对其进行原核表达和基因表达分析。方法:根据白花前胡转录组数据中的基因序列信息,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从白花前胡中克隆CAL基因,命名为PpCAL1和PpCAL2。构建原核表达载体pET-32a-PpCAL1和pET-32a-PpCAL2,并转化至大肠埃希菌Transetta(DE3)进行诱导表达。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析抽薹开花前后白花前胡不同组织的基因相对表达量。结果:PpCAL1和PpCAL2的开放阅读框(ORF)长度分别为645、738 bp,分别编码214、245个氨基酸。结构功能域分析表明,PpCAL1和PpCAL2蛋白都具有MADS_MEF2_like和K-box保守结构域。原核表达结果显示,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷可成功诱导目的蛋白表达。系统进化树分析显示,白花前胡PpCAL1与胡萝卜DcCAL聚为一支,白花前胡PpCAL2与橡胶树HbCAL聚为一支。基因表达结果显示,PpCAL1和PpCAL2在不同组织中均在开花后表达量上调。结论:克隆并分析白花前胡PpCAL1和PpCAL2基因,为进一步研究白花前胡开花基因提供参考。

柯里拉京体内外诱导口腔鳞癌CAL-27细胞凋亡及机制探讨

目的:观察柯里拉京(corilagin)对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的作用,探讨诱导其凋亡的分子机制。方法:体外实验采用不同浓度的柯里拉京预处理CAL-27细胞,通过CCK-8法及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR和Western印迹法检测对细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3mRNA及蛋白表达水平的影响。通过CAL-27细胞构建裸鼠移植瘤模型,检测柯里拉京的体内抗肿瘤效果。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外实验结果显示,柯里拉京以浓度依赖性方式抑制CAL-27细胞增殖,诱导细胞凋亡;在mRNA和蛋白水平上上调Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3,下调Bcl-2,差异均有统计学意义(P<0.05)。体内实验表明,与对照组相比,柯里拉京组可显著减小裸鼠瘤体体积(P<0.05)。结论:柯里拉京在体内和体外均能显著抑制人舌鳞癌CAL-27细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路有关。

miR-222-3p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-222-3p(miR-222-3p)对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞和正常口腔角质细胞株(hNOK)中miR-222-3p的表达,培养CAL-27细胞并分为对照组(NC组)、inhibitor NC组(转染阴性对照质粒)和miR-222-3p inhibitor组(转染miR-222-3p inhibitor)。分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化,蛋白质印迹法检测BAX、Bcl-2、MMP-2、N-cadherin及E-cadherin的表达。结果CAL-27细胞中miR-222-3p的表达水平显著高于hNOK细胞(P<0.05)。与inhibitor NC组和NC组相比,miR-222-3p inhibitor组CAL-27细胞的凋亡率显著升高,增殖、侵袭能力显著降低(P<0.05),且Bcl-2、MMP-2和N-cadherin蛋白表达水平显著降低,BAX和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-222-3p在CAL-27细胞中高表达,下调miR-222-3p可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

基于CALS及Surpac-FLAC^3D耦合技术的复杂空区稳定性分析

由于受地质条件和探测技术的限制,传统探测方法很难获得复杂空区精确的实际空间分布形状,由此得到的空区用于建立数值分析模型显得过于粗糙,在此基础上进行空区稳定性分析的可靠性程度不高。采用空区激光自动扫描系统(CALS)对复杂空区进行激光扫描,在获得精准三维点云数据的基础上,运用Surpac软件模拟出空区的三维地质模型,通过耦合方法可以在FLAC3D中生成与实际空区空间分布一致的数值模型,提高复杂空区稳定性计算的准确性和可靠性。选取三道庄露天矿的地下空区作为工程实例,利用CALS获得不规则空区的实际空间边界。在此基础上,运用Surpac进行三维块体模拟,研究Surpac与FLAC3D模型耦合技术,成功地将三维模型数据导入FLAC3D中,结合现场实际勘测的围岩力学参数,对空区进行静力计算,分析空区的稳定性。

长江下游巢湖9870cal.aB.P.以来孢粉记录的环境演变

根据对巢湖490cm湖泊沉积物柱样7个AMS14C年龄的测定以及98个孢粉样品的分析，植物种类分属于86个（科）属，可以划分为6个孢粉组合带：孢粉带I（9870～6040cal．aB．P．）代表了末次冰期之后全新世温暖气候到来之前气候转暖的早全新世过渡时期，气候呈现温和略干的特点，其中亚带Ⅰ-1（9870—7700cal．aB．P．），Ⅰ-2（7700—6250cal．aB．P．）和Ⅰ-3（6250～6040cal．aB．P．）分别对应温暖湿润-温暖较湿-温和干燥的气候波动；孢粉带Ⅱ（6040～4860cal．aB．P．）代表中全新世温暖湿润期，水热配置条件最佳；孢粉带m（4860～2170cal．aB．P．）体现中全新世后期温和干燥的气候，约2170cal．aB．P．干旱程度达到最高；孢粉带Ⅳ（2170—1040cal．aB．P．）反映巢湖流域由干燥向湿润气候的转型，气候总体上温和湿润；孢粉带V（1040～200cal．aB．P．）反映了晚全新世巢湖流域温凉稍湿的气候；孢粉带Ⅵ（200cal．aB．P．至今）则体现巢湖流域处在相对温暖湿润的时期。植被类型演替大体为：以壳斗科的落叶、常绿属种为主的落叶阔叶、常绿阔叶混交林-以落叶栎类、栗属、青冈属和栲／石栎属为主的落叶阔叶、常绿阔叶混交林-以落叶栎类占绝对优势的落叶阔叶、常绿阔叶混交林-以禾本科为主的草地-以禾本科、蒿属和蓼属等为主的草丛。

CALS 与综合数字数据环境

论述ＣＡＬＳ的产生及其发展成为全球信息化基础工程的过程，由ＣＡＬＳ建立的综合数字数据环境，以及实施ＣＡＬＳ的意义和在并行工程、敏捷制造与电子商务中的应用前景。建议我国启动ＣＡＬＳ工程。

新疆巴里坤湖9.0 cal ka BP以来沉积物地球化学元素分布特征与古气候环境演化

根据中国西北干旱区巴里坤湖BLK-1剖面沉积物的地化元素分析,采用SPSS因子分析法提取了对沉积环境变化敏感的地化元素和氧化物组分.在R、Q型因子分析的基础上,结合沉积物的硅铁铝率(SiO2/(Al2O3+Fe2O3))、淋失系数(SiO2/(MgO+K2O))、CaO/MgO以及腐殖化度等指标,提取出古气候环境信息.初步研究结果表明:近9.0 cal ka BP以来,巴里坤湖地区气候环境仍以干旱化为主,全新世期间出现过多次不同程度的干湿变化,经历了5个气候阶段:9.0—7.5 cal ka BP期间,气候干旱;7.5—5.8 cal ka BP期间,气候温暖湿润,为研究区全新世最佳适宜期;5.8—3.0 cal ka BP期间,气候干旱;3.0—1.0 cal ka BP期间,气候湿润;1.0—0 cal ka BP期间,气候干旱.

HE4、CAl53联合检测在乳腺癌辅助诊断中的应用

目的研究血清人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)、癌抗原153(CAl53)联合检测在乳腺癌辅助诊断中的价值。方法收集46例乳腺癌患者、52例乳腺良性疾病患者以及50名正常对照者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HE4含量、电化学发光法检测CAl53含量。采用受试者工作特征(ROC)曲线确定HE4和CA153的临界值。分别计算HE4和CA153单项检测和联合检测的敏感性和准确性并作比较。结果乳腺癌组HE4和CAl53水平分别是49.0(41.7～67.4)pmol/L和20.6(13.4～28.7)U/mL,均明显高于乳腺良性疾病组及正常对照组(P<0.01)。经ROC曲线确定HE4和CA153的临界值分别为62.5 pmol/L和21.6 U/mL,乳腺癌HE4、CAl53联合检测的敏感性为63.0%,准确性为82.4%,均高于单项检测。结论联合检测CAl53和HE4可以明显提高乳腺癌诊断的准确性及敏感性。

芸苔属植物CAL基因的结构特征与花球的形态遗传

从花椰菜变种 (BrassicaoleraceaL .var.botrytis)中分离出 4种花球类型的纯合株系 :光滑型花球curd_s、毛状物花球curd_h、颗粒状花球curd_c和刺状物花球curd_t。用PCR方法分别扩增各株系的BobCAL基因并分析其中的部分序列 ,发现 4种株系的CAL基因在第五个外显子中都有AAG向TAG的终止突变 ,而且该终止密码子上游 6 38bp的DNA序列完全一致 ,说明花蕾、茎生叶等花球附生物的形态发生不是BobCAL的单一调节作用。花椰菜与结球甘蓝 (B .oleraceavar.capitata)和青花菜 (B .oleraceavar.italica)杂交后其F1代植株都失去了原有花球的形态特征 ,表现出花序的多态性 ,从而显示了不同变种CAL相互作用的形态学差异。从大白菜中分离出CAL的同源基因 ,发现BcpCAL基因没有发生终止突变。分析了从大白菜 (B .campestrisL .ssp .pekinensis)中分离出的BcpCAL的基因结构特征以及与其他基因间的同源性。为了解CAL基因的生物学功能 ,研究花球形态发生的机制提供了分子和遗传证据。