Calcineurin/NFAT信号通路上调5型磷酸二酯酶的表达及介导内皮素-1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖

目的探讨Calcineurin/NFAT信号通路是否介导内皮素-1(ET-1)诱导的5型磷酸二酯酶(PDE5)的表达及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的增殖;同时验证Calcineurin抑制剂环孢素A及PDE5抑制剂西地那非能否抑制ET-1刺激的PASMCs增殖。方法以ET-1刺激PASMCs增殖,分别于ET-1刺激前给予环孢素A或西地那非抑制Calcineurin或PDE5的活性。采用Calcineurin活性检测试剂盒检测其活性,免疫印迹法检测PDE5的表达,酶联免疫吸附法检测cGMP的含量,3H-TdR渗入法检测PASMCs的增殖。结果 ET-1可激活原代培养的PASMCs中Calcineurin的活性,上调PDE5表达,降低cGMP的水平。Calcineurin特异性抑制剂环孢素A可阻断ET-1的上述作用;抑制PDE5的活性可逆转ET-1导致的cGMP含量减少。而环孢素A及西地那非可分别抑制ET-1刺激的PASMCs增殖。结论 ET-1可通过激活Calcineurin/NFAT信号通路介导ET-1诱发的PDE5表达,进而降低cGMP含量,引起PASMCs增殖;而抑制Calcineurin或PDE5可提高cGMP水平,抑制ET-1诱导的PASMCs增殖。

FGF23在不同分期慢性肾脏病患者中的表达水平及其与左心室肥厚、PLSγ/calcineurin NFAT信号通路的关系

目的探究针对慢性肾脏病不同分期患者FGF23水平的表达与左心室肥厚的相关性及对磷脂酶Sγ(PLSγ)/钙调神经磷酸活化T细胞核因子(NFAT)信号通路的影响。方法筛选2016年10月至2018年9月来新疆医科大学第五附属医院就诊的CKD患者,将符合标准的的107例患者按照肾小球过滤率(GFR)将患者划分为2~5期,另选择同期就诊的健康正常人30例作为对照。分别检测GFR、血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)、心脏结构和PLSγ/calcineurinNFAT通路信号,分析FGF23与心脏结构相关性及其对PLSγ/calcineurinNFAT信号通路的影响。结果按照健康对照组、CKD2期组、CKD3期组、CKD4期组、CKD5期组顺序,患者GFR水平依次降低,FGF23水平依次升高,且各组间两指标均存在显著差异(P<0.01);随着患者CKD分期数增加,患者心脏右室各参数IVST、LVPWT、LVID、LVM和LVMI水平依次升高,且与健康对照组均存在显著差异(P<0.05),CKD5期患者IVST、LVPWT和LVM均与其他组存在显著差异(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,107例CKD患者血清FGF23与LVID、IVS-R、LVPWT、LVM和LVMI呈正相关,相关系数分别为0.256、0.285、0.274、0.433和0.498,与E/A比值呈负相关,r=-0.431;CKD患者血清均表达神经钙蛋白和磷酸化NFAT(pNFAT)。结论CKD2-5期患者中血清FGF23水平升高普遍存在,与左室肥厚显著相关,同时FGF23水平升高激活PLSγ/calcineurinNFAT信号通路。

MLP参与心肌肥大发生过程与Calcineurin/NFAT信号通路有关

心肌肥大是心肌细胞面对多种病理刺激时的共同反应,以心肌细胞体积增大和胚胎期基因的重新表达为标志.心肌发育调控基因肌肉LIM蛋白(muscle LIM protein,MLP)的表达异常与心肌肥大有关.为研究MLP参与心肌肥大发生的分子机制,采用去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激大鼠原代培养心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,采用RNAi技术敲减MLP的表达,分析MLP与肥大信号通路钙调神经磷酸酶(calcineurin)/活化T细胞核因子(nuclearfactor of activated T-cells,NFAT)的关系.结果显示,原代培养的心肌细胞经一定浓度的PE刺激后细胞表面积增加,肥大标志蛋白ANP、BNP表达增高,并伴有MLP表达上调.RNAi方法敲减MLP的表达则明显抑制PE诱导的心肌细胞表面积增加和BNP表达增高,并且直接影响NFAT的转录激活活性,提示MLP与心肌肥大的发生密切相关,并且可能是通过calcineurin/NFAT信号通路而参与心肌肥大的发生.

针对NFAT信号途径的新型免疫抑制剂

免疫抑制剂cyclosporin A和FK-506通过抑制依赖钙调蛋白的磷酸酶calcineurin(CaN)的活性,阻断了活化T细胞核因子(NFAT)的活化,最终抑制了机体的免疫应答.然而,这种直接对CaN酶活性的破坏,使得这类药物具有严重的临床毒副作用.随着对NFAT调节机制的研究深入,近年来,人们运用各种试验方法、手段筛选了一些天然的以及合成的抑制剂,它们针对NFAT信号通路的下游靶点发挥作用,从而选择性更强,毒性更小,为临床抗移植排斥反应、自身免疫性疾病的治疗奠定了基础.本文综述了这方面的进展,并就这些抑制剂的特点进行了简单的分析,另提出了一些新的有治疗潜力的靶点.

Calcineurin和TRPC6参与ET-1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:探讨Calcineurin和瞬时感受器电位6(TRPC6)的相互作用以及对内皮素-1(ET-1)诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:以ET-1刺激肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)检测Calcineurin活性以及TRPC6的表达;分别于ET-1刺激前给予Calcineurin特异性抑制剂环孢素A(CsA)和TRPC6 siRNA处理,测定Calcineurin活性、TRPC6的表达以及细胞的增殖情况;采用Calcineurin活性检测试剂盒检测其活性,Western blot和RT-PCR检测TRPC6的表达,MTT法检测PASMCs的增殖。结果:ET-1可激活原代培养的PASMCs中Calcineurin的活性,上调TRPC6的表达;CsA和TRPC6 siRNA可以分别降低TRPC6表达和Calcineurin活性;也可以抑制ET-1刺激的PASMCs增殖。结论:Calcineurin与TRPC6参与ET-1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖并相互影响。

钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号途径在骨骼肌细胞生长和发育中生理作用的研究进展

钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)信号途径作为肌肉细胞内重要的生物信号转导途径,在肌肉细胞中起到调节枢纽的作用,与肌肉生长及肌纤维的类型有密切关系。而肌肉组织降解在动物肌肉嫩化过程中具有重要的意义。因此,钙调磷酸酶-NFAT信号途径可能与肌肉嫩化有密切关系,深入研究其调控肌肉组织降解的分子机制将有助于揭示肌肉嫩化的深刻机理。

压力负荷下缬沙坦对钙调神经磷酸酶介导心肌肥大通路的影响

目的 :探讨压力超负荷模型下血管紧张素 ( Ang )受体拮抗剂缬沙坦对钙调神经磷酸酶 ( Ca N)介导心肌肥大通路的影响及 Ang 的致心肌肥厚作用。方法 :腹主动脉缩窄法建立大鼠压力超负荷模型 ,放射免疫法检测血浆、心肌 Ang 浓度 ,Western Blot检测心肌 Ca N,活化 T细胞核因子 ( NFAT3 )蛋白表达 ,发色底物法检测 Ca N比活性 ,并测定左室重量指数。结果 :缬沙坦组血浆 Ang 浓度高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,心肌 Ang 浓度则相反 ( P<0 .0 5 ) ,缬沙坦组 Ca N表达及活性低于对照组 ( P<0 .0 1) ,NFAT3 表达低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,两组各项指标与假手术组相比均差异显著。结论 :Ang 参与激活压力负荷下钙调神经磷酸酶通路 。

中药提取物对钙调磷酸酶-活化T细胞核因子通路的抑制作用

通过研究多种具有清热解毒、除湿功效的中草药提取物对钙调磷酸酶-活化T细胞核因子（Ca N-NFAT）信号通路的抑制作用发现天然的Ca N-NFAT通路抑制剂。采用荧光素酶报告基因方法,检测多种中药提取物对Ca N-NFAT信号通路影响;采用CCK8法检测中药提取物的非特异性细胞毒性。实验发现：多种中药提取物在1 mg/m L浓度时对PMA/A23187刺激的K562细胞内Ca N-NFAT通路具有抑制作用,并且没有显著的细胞毒作用;其中部分中药提取物在0.25~1 mg/m L剂量范围内对Ca N-NFAT通路具有剂量依赖性的抑制作用,结果提示这些中药提取物中可能含有能够有效抑制Ca N-NFAT信号通路的活性成分。

槲皮苷:一种抑制钙调蛋白磷酸酶(CN)的新型免疫抑制剂

目的以钙调蛋白磷酸酶(CN)为靶酶,从中草药中寻找高效、低毒的免疫抑制剂。方法以CN为靶点,筛选并分离能够抑制其活性的天然化合物。在细胞和动物水平评价该化合物的免疫抑制效果及毒副作用,并通过荧光猝灭、分子对接、免疫印迹、双荧光素酶报告基因、实时定量PCR等实验探究天然化合物与CN的作用机理及可能的免疫抑制作用机制。结果槲皮苷在体外和细胞内均能抑制CN的活性,并且能够有效抑制小鼠脾细胞的增殖,缓解小鼠迟发超敏反应。毒理研究结果显示,槲皮苷对实验小鼠无急性毒性,且毒副作用很小。荧光猝灭实验和分子对接分析表明,槲皮苷可能与CN上的两个位点相结合,并通过CN-NFAT通路参与调节免疫反应。结论通过筛选获得了新型CN抑制剂槲皮苷。槲皮苷具有成为新型低毒免疫抑制剂的潜在可能。