成骨生长肽促进大鼠骨量增加的作用

探讨成骨生长肽（ＯＧＰ）对骨量增加的作用。方法采用低钙饲料饲养成为骨质疏松模型的５０只ＳＤ大鼠，随机分为５组，每组１０只，分别皮下隔日注射，Ａ组（低剂量ＯＧＰ）、Ｂ组（高剂量ＯＧＰ）、Ｃ组（人降钙素）、Ｄ组（鲑鱼降钙素）和Ｅ组（生理盐水）对照，共１２周。测定血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、骨钙素（ＢＧＰ）、骨密度（ＢＭＤ），扫描电镜和透射电镜观察。结果ＯＧＰ治疗组碱性磷酸酶、骨钙素和骨密度明显增高（Ｐ＜０．０１），扫描电镜观察到Ａ、Ｂ组骨小梁粗大、完整、间隙小，表面光滑，对照组骨小梁变细、断裂，空隙大。透射电镜观察到Ａ、Ｂ组成骨相骨细胞较多，Ｅ组退变相骨细胞较多。结论ＯＧＰ能刺激成骨细胞的活性，能提高骨量。

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物对去卵巢大鼠骨生物力学性能的影响

目的探讨成骨生长肽羧基端片段(OGP10-14)及其衍生物G38I和G38K对去卵巢(OVX)骨质疏松大鼠股骨和腰椎生物力学性能的影响。方法56只3月龄SD雌性大鼠分为7组,1～6组行OVX手术,术后1～3组分别给予观察药物OGP(10-14)、G38I和G38K,4、5组分别给予利塞磷酸钠及阿伦磷酸钠作为治疗对照,6组术后给予安慰剂,7组为假手术组。术后第60天处死,分离股骨行三点弯曲实验,腰椎行压缩实验,检测并分析各组生物力学有关指标。结果OVX术后大鼠腰椎强度极限及最大应变分别下降为假手术组的80%和65%,变化较股骨明显,说明骨质疏松症早期,以松质骨为主的部位受累更加显著。OGP(10-14)及其衍生物治疗后,G38I,G38K组股骨弹性弯曲应力较OVX组显著升高,最大弯曲应力、弹性模量也有升高趋势,但差异无显著性。腰椎强度极限OGP(10-14)组升高达OVX组的1.28倍(P<0.01),与二磷酸盐治疗组近似,弹性模量OGP(10-14)组为OVX组的1.35倍。结论OGP(10-14)及其衍生物治疗后,在一定程度上提高了骨质疏松大鼠骨组织抗冲击、抗压缩的能力,改善了骨生物力学性能。

重组人成骨生长肽治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验观察

目的探讨重组人成骨生长肽(recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide,rhOGP)对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,经rhOGP治疗12周后,测定骨密度(BMD)、血清中的酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)。结果rhOGP治疗组碱性磷酸酶(233.77±42.07)U/L、骨钙素(1.95±0.15)μg/L和骨密度明显高于骨质疏松模型组(156.23±23.38)U/L、(1.33±0.24)μg/L(P<0.01),而酸性磷酸酶(19.27±4.24)U/L,明显低于骨质疏松模型组(29.98±3.08)U/L(P<0.05)。结论rhOGP能刺激成骨细胞的活性,增加骨密度,提高骨量,对去卵巢大鼠所引起的骨质疏松有效,有可能成为治疗骨质疏松症的有效药物。

SCT-OGP的融合表达与活性的初步研究

根据天然鲑鱼降钙素(Salmoncalcitonin,SCT)和骨生长肽(OsteogenicGrowthPeptide,OGP)的序列,人工合成了6个DNA片段,进行退火、连接和转化后,获得含有SCT与OGP融合基因的pPIC9-SCT-OGP表达载体,经测序后将此重组质粒电击转化毕赤酵母GS115,通过培养、筛选以及SDS-PAGE鉴定,在毕赤酵母中获得了SCT-OGP融合蛋白的可溶性表达,经分子筛纯化后在5kD左右可见单一条带。将此条带进行了N端氨基酸组分分析,证实此目的蛋白为SCT-OGP融合蛋白。MTT法显示SCT-OGP融合蛋白在体外可以促进成骨细胞和成纤维细胞增殖,以小鼠为模型的试验显示SCT-OGP融合蛋白在体内可以提高碱性磷酸酶活性和降低血钙,表明该融合蛋白具有抑制破骨细胞的活性和刺激成骨细胞增殖的活性,从而提示该融合蛋白具有治疗骨质疏松症的药用潜力。

成骨生长肽免疫检测方法的研究

目的:建立一种快速而准确的检测血清成骨生长肽浓度的方法。方法:制备具有较高效价的成骨生长肽抗体,通过竞争性酶联免疫吸附法及其改进方法建立检测成骨生长肽浓度的标准曲线。结果:亲和纯化的抗体比盐析抗体的标准曲线更好,改进的竞争性酶联免疫吸附法方法比普通的竞争性酶联免疫吸附法方法的检测灵敏度高一个数量级,可满足临床检测血清成骨生长肽浓度灵敏度的要求。结论:改进的竞争性酶联免疫吸附法可以为临床研究提供可靠而灵敏地检测血清成骨生长肽含量的方法。

成骨生长肽衍生物抗去卵巢大鼠骨质疏松作用的实验研究

目的通过建立去卵巢大鼠骨质疏松模型来研究成骨生长肽衍生物对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用。方法选取3月龄未交配雌性健康SD大鼠48只,按体重随机分为6组,其中5组行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松模型,1组行假手术,给药组分别给予一定剂量的ALEN、OPG、OPG1、OPG2。给药12周后,测定骨密度,血清中的钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素。结果模型组与假手术组比较,骨密度明显降低(P<0.05);各给药组及模型组与S组比较,骨密度降低(P<0.05),OGP1组与OGP2组比较,骨密度增加(P<0.05);模型组与假手术组比较,碱性磷酸酶活性明显升高(P<0.05);治疗组与模型组比较,碱性磷酸酶活性明显降低(P<0.05);与假手术组比较,其他各组骨钙素活性高(P<0.05);其他治疗组分别与阿伦磷酸钠治疗组比较,血清钙浓度升高(P<0.05);各治疗组分别与模型组比较,血清磷浓度增高(P<0.05)。结论成骨生长肽及其衍生物对去卵巢大鼠骨质疏松具有治疗作用,其中OGPA1对抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用较好。

成骨生长肽羧基端5肽衍生物G48A和阿仑膦酸钠的序贯治疗对去卵巢大鼠的影响

目的探讨成骨生长肽羧基端5肽衍生物G48A与阿仑膦酸钠（A len）的序贯治疗对去卵巢（OVX）大鼠离体骨密度和生物力学的影响。方法将3月龄雌性SD大鼠75只随机分7组,除假手术组（S组）外均行OVX术,1周后G48A1、G48A2、G48A3组分别以5-5-5 d、10-10-5 d、14-14-7 d为周期交替给予G48A-（A len）-间歇进行预防治疗;NADFR组每日联合予G48A和A len;ALEN组每日予A len;余OVX组和S组每日予安慰剂。术后13周处死,分离左股骨及1~4腰椎行骨密度（BMD）检测,右股骨行三点弯曲实验,第5腰椎行腰椎压缩实验。结果与S组比较,OVX组体质量增加,BMD明显降低,腰椎最大载荷、比例极限、强度极限和弹性模量以及股骨的弯曲能量明显减低;经过G48A1、2、3组及NADFR组预防性治疗,各项指标绝大多数有改善趋势,其中腰椎和股骨BMD、腰椎弹性载荷以及股骨的弯曲弹性模量和弯曲刚性系数均较OVX组有显著提高。结论G48A与阿仑膦酸钠的序贯治疗可以改善去卵巢大鼠的骨丢失,增加骨密度,提高骨力学性能。

外源性NGF对转基因CGRP干细胞移植治疗骨质疏松大鼠的影响

目的研究外源性神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对转基因降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)骨髓干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植治疗骨质疏松大鼠的影响。方法构建CGRP基因表达载体,转染制备转基因CGRP-MSCs靶细胞;60只雌性SD大鼠骨质疏松模型随机均分为空白对照组(A组)、单纯MSCs移植治疗组(B组)、CGRP-MSCs移植治疗组(C组)、CGRP-MSCs+NGF移植组(D组)。在治疗1w、2w、3w后,实时定量荧光PCR和Western blot检测3个时间段每组大鼠股骨骨组织中CGRP基因和蛋白的相对表达水平,评价各组疗效。结果与A组比较,3个时间点,C组和D组中CGRP表达水平均显著上调(P<0.01);治疗1w后,C组和D组上调水平差异明显(P<0.01),D组低于C组;治疗2w后,C组和D组之间仍保持显著差异(P<0.05),D组仍低于C组;治疗3w后,C组和D组上调水平差异明显缩小,二者差异无统计学意义(P>0.05)。CGRP基因和蛋白相对表达水平在各组检测结果差异一致,同上。结论在转基因CGRP-MSCs移植治疗骨质疏松大鼠中联合应用外源性NGF,无累计效应,并可能抑制大鼠股骨骨组织中CGRP的表达,表明外源NGF于转基因CGRP-MSCs移植治疗骨质疏松症中可能并无促进作用,至少在CGRP表达层面无促进作用,而单纯的转基因CGRP-MSCs移植治疗骨质疏松大鼠疗效优于联合应用外源性NGF治疗方案。

降钙素基因相关肽对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞增殖及分化的影响

目的观察降钙素相关基因肽（CGRP）对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化能力的影响，探讨其促进骨质疏松性骨折愈合的细胞/分子作用机制。方法3个月龄SD大鼠，行双侧卵巢切除术，术后常规喂养，术后6个月用显微CT（Micro-CT）行骨密度检测，确定骨质疏松模型建立成功；处死骨质疏松大鼠，采用全血贴壁法分离BMSCs，用流式细胞仪进行鉴定；以培养基中加入不同浓度（10－7～10－10 mol/L）的CGRP建立实验组，用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖能力；碱性磷酸酶（ALP）活性检测及茜素红染色法观察CGRP对骨质疏松大鼠BMSCs成骨分化及细胞外基质矿化能力的影响；采用反转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测ALP、Ⅰ型胶原蛋白（COLL-1）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨粘连蛋白（Osteonectin）、Run家族转录因子（RunX2）等成骨相关细胞基因mRNA的表达；使用Western blot分析来检测RunX2及Osteonectin的蛋白含量。 结果成功分离培养出骨质疏松大鼠BMSCs；CCK-8法测定细胞增殖能力，CGRP各浓度组较对照组均增加，且呈剂量依赖关系，7 d时对照组吸光度（A）值为0.580 4±0.015 0，CGRP组中10－7 mol/L为0.804 1±0.029 9（P＝0.000），10－8 mol/L为0.788 6±0.028 0（P＝0.000），10－9 mol/L为0.743 6±0.028 8（P＝0.001），10－10 mol/L为0.693 3±0.029 2（P＝0.004），差异有统计学意义；ALP活性测定结果显示，各CGRP组较对照组ALP活性均增高，14 d时对照组为4.633±0.423，CGRP组中10－7 mol/L为44.047±2.446（P＝0.000），10－8 mol/L为42.030±2.626（P＝0.000），10－9 mol/L为39.333±0.527（P＝0.000），10－10 mol/L为24.647±1.135（P＝0.000）[单位：10－3 μmol/（min·mg）]，差异有统计学意义；钙结节染色均呈阳性，而对照组无显色；基因检测结果提示，各CGRP组的基因表达较对照组升高，7 d时ALP空白组为0.999 5±0.205 0，10－7 mol/L为2.578 4±0.210 1（P＝0.001），10－10 mol/L为2.351 2±0.201 2（P＝0.001）；BMP-2空白组为0.979 5±0.200 1，10－7 mol/L为3.427 9±0.255 2（P＝0.000），10－10 mol/L为2.914 9±0.202 3（P＝0.000）；COLL-I空白组为1.029 5±0.202 2，10－7 mol/L为2.518 7±0.240 0（P＝0.001），10－10 mol/L为2.347 8±0.201 4（P＝0.001）；RunX2空白组为0.993 2±0.213 2，10－7 mol/L为2.498 9±0.262 0（P＝0.002），10－10 mol/L为2.219 8±0.250 3（P＝0.003）；Osteonectin空白组为1.019 5±0.200 1，10－7 mol/L为1.972 8±0.212 3（P＝0.005），10－10 mol/L为1.864 2±0.250 1（P＝0.010），差异有统计学意义；蛋白检测结果提示各CGRP组的RunX2及Osteonectin蛋白表达较对照组均升高。结论适当浓度（10－7～10－10 mol/L）的CGRP可以促进骨质疏松大鼠BMSCs的增殖，呈浓度依赖性，同时可提高其成骨分化能力，CGRP可能在治疗骨质疏松骨折的骨修复中发挥重要作用。

双靶向治疗骨代谢病的理想候选药奥金肽

许多骨代谢病,如骨质疏松(OP)的病理过程是受破骨细胞(OC)过度活跃及成骨细胞(OB)增殖下降两个环节共同调控的。目前临床上治疗OP的主流药物(除PTH片段肽外)均为以OC为靶点的骨吸收抑制剂。文中概述了成骨生长肽(OGP)的功能、结构改造先导物奥金肽对实验性大鼠骨质疏松的治疗作用;比较了奥金肽与PTH片段肽在化学特征、药理活性、不良反应及制备成本等方面的特点。对骨吸收抑制剂与骨形成促进剂联合应用的前景进行了讨论。

骨生长肽羧基端5肽衍生物H13D联合阿仑膦酸钠对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响

目的:探讨骨生长肽羧基端5肽衍生物H13D联合阿仑膦酸钠(Alen)对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、H13D(10nmol/100g)组、Alen(10μg/100g)组及其联用组,每组8只,皮下注射相应药物,12周后检测各组大鼠腰椎骨(L1～L4)和股骨的骨密度(BMD)、血清生化指标[Ca、P、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)]、骨形态学变化。结果:各组大鼠血清中Ca、P水平比较均无明显变化。与假手术组比较,其余各组大鼠ALP、BGP水平均升高,仅模型组和联用组有统计学差异(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,其余各组大鼠ALP、BGP水平均降低,仅H13D组和Alen组有统计学差异(P<0.05);骨密度和骨形态学比较表明,联用组优于假手术组(P<0.05),假手术组优于Alen组(P<0.05),Alen组优于H13D组,H13D组优于模型组(P<0.05)。结论:H13D联合Alen治疗可明显增加去卵巢模型大鼠骨密度,改善骨微结构,具有明显的协同作用。