一株高效石油降解菌的筛选及降解能力初探

为了有效降解石油开采过程中产生的含油污泥中的石油,达到油泥资源再利用的目的,选育高效石油降解菌,为石油污染生物修复提供菌种资源和技术支持。通过连续富集传代培养,从页岩油泥中分离出一株高效石油降解菌YH1-1,经过形态学、生理生化以及16S rRNA序列分析,鉴定YH1-1为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。该菌在温度30℃、初始培养pH值7.0条件下降解质量浓度50 g/L的油泥,经气相色谱(GC)分析,28 d降解率可达87%,说明该菌可有效降解石油烃。因此,醋酸钙不动杆菌YH1-1在开发研制石油污染生物修复菌剂方面有较好的应用前景。

产脂肪酶菌株Acinetobacter calcoaceticus UN9的诱变选育

本实验菌株醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)M1-7的最佳紫外诱变时间为60,s.利用紫外诱变后涂布到添加不同脂肪酶底物和分解产物的分离培养基,筛选出具有抗性的正突变株.其中柠檬酸钠抗性突变菌株UN9最高酶活力达15.960,U/mL,比出发菌株提高了130.97%,远远高于琥珀酸钠、正丁酸、正己酸、三丁酸甘油酯等抗性突变菌株.经5次传代后,菌株UN9遗传性能稳定,平均酶活力为15.866,U/mL.

Cellular Fatty Acids as Chemical Markers for Differentiation of Acinetobacter baumannii and Acinetobacter calcoaceticus

Objective Gas chromatography （GC） was used to investigate the cellular fatty acid （CFA） composition of 141 Acinetobacter boumannii and 32 A. calcoaceticus isolates from different locations in China and to find chemical markers to differentiate these two closely related bacteria. Methods Whole cell fatty acid methyl esters （FAMEs） were obtained by saponification, methylation, and extraction for GC analysis, followed by a standardized Microbial Identification System （MIS） analysis. Results All A. baumannii and A. calcoaceticus strains contained some major fatty acids, namely, 18：1 co9c, 16：0, Sum In Feature 3, 12：0, 17：1co8c, 3-OH-12：0, 17：0, Sum In Feature 2, 2-OH-12：0, and 18：0 compounds. Although most of the total CFAs are similar between A. baumannii and A. calcoaceticus strains, the ratios of two pairs of CFAs, i.e., Sum In Feature 3/18：1 co9c versus 16：0/18：1 co9c and Sum In Feature 3/18：1 co9c versus unknown 12.484/18：1 co9c fatty acids, could differentiate these two closely related bacteria. A. baumannii could be easily classified into two subgroups by plotting some ratios such as Sum In Feature 3/16：0 versus 17：0 and Sum In Feature 3/2-OH-12：0 versus17：0 fatty acids. Conclusion The ratios of some CFAs could be used as chemical markers to distinguish A. baumannii from A. colcoaceticus.

不动杆菌属Calcoaceticus的耐药机理

作者对临床上分离出的10株A·calcoaceticus研究其耐药型式,并就其中对β—内酰胺酶低敏感性的1株,进一步分离出对β—内酰胺剂耐药的变异株,探讨其耐药机理。方法在临床分离的10株A·calcoaceticus(#4 751～#4 760)中,选择β—内酰胺酶合成少,对β—内酰胺剂敏感性高的#4 760株,分离出对CFX、CPZ、CAZ耐药的变异株,即M4 760F、M4 760P、M4 760A。结果MIC可将临床分离的10株分成2组:敏感株8株,耐药株2株。敏感株的IPM、CFX、CPZ、CAZ、CER的MIC分别为0.20,50,25,1.56,50μg/ml(#4 760),而耐药株上述药物的MIC则分别为0.78,800,800,12.5,】1600μg/ml(#4 751)。β—内酰胺酶活性耐药株为敏感株的100倍。上述全部菌株,无论酶活性高低,均可合成β—

异育银鲫(Carassius auratus gibelio)源醋酸钙不动杆菌表型及分子鉴定

采用常规的培养特征、理化特性及分子生物学的方法,对从濒死异育银鲫(Carassius auratus gibelio)血液中分离到的菌株SY-1进行了致病性、表型生物学、分子生物学及药敏试验的系统研究。结果表明,该菌株在盐度5—30、pH6—8,温度10—42℃的LB液体培养基中均能生长,具有脲酶。该菌株16SrRNA基因序列(Gen Bank登录存取号:JX164201,长度1435bp)与其它不动杆菌属菌的16SrRNA基因同源性相似性在99%—100%之间,构建系统发育树确定该菌株为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。人工回感可导致异育银鲫死亡。药敏试验结果显示:对恩诺沙星、强力霉素、萘啶酸、复方新诺明、氧氟沙星等10种抗生素敏感;对羧苄青霉素、诺氟沙星、大观霉素、卡那霉素、四环素等14种抗生素中度敏感;对氨苄西林、苯唑西林、林可霉素、万古霉素、氟苯尼考等15种抗生素耐药。

醋酸钙不动杆菌PHEA-2对苯酚的降解特性研究

自炼油厂污水中分离的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) PHEA-2具有较强的苯酚降解能力.在温度为30℃和接种量为1%条件下,该菌在24h内完全降解苯酚的浓度为300mg/L；该菌的最适生长和最适降解苯酚温度为30℃;在pH值5~10范围内能保持对苯酚的降解能力.醋酸钙不动杆菌PHEA-2的苯酚降解反应符合Monod动力学模式,其反应的米氏常数Km为275mg/L,最大反应速度Vm为41mg苯酚/(108·h).一定量的葡萄糖(5%)促进PHEA-2菌体的生长,从而提高了整个培养体系降解苯酚的能力.

一株苯酚降解菌的分离和鉴定

:从工业废水中分离到一株高效降解苯酚的菌株PHEA 2 ,它能够在以苯酚为单一碳源和能源的无机培养基上生长 ,其最高苯酚降解率为 394nmol/ (mg·min) .经Biolog细菌自动鉴定仪鉴定 ,该菌株为醋酸钙不动杆菌 (Acinetobactercalcoaceti cus) .采用PCR扩增获得的该菌 16SrDNA片段 ,核苷酸序列分析结果表明 ,该菌株的 16SrDNA的核苷酸序列与醋酸钙不动杆菌同源性为 98% .在细菌系统发育分类学上 ,PHEA 2归属变形细菌γ亚类、不动杆菌属、醋酸钙不动杆菌 .

醋酸钙不动杆菌PHEA-2的16SrDNA测序及其苯酚降解特性研究

从我国东北某炼油厂工业废水中分离到一株高效降解苯酚的菌株PHEA 2。采用PCR技术从该菌总DNA中克隆到 150 0bp的 16SrDNA片段。该片段的核苷酸序列分析结果表明 ,PHEA 2的 16SrDNA核苷酸序列与醋酸钙不动杆菌模式菌株 (Acine tobactercalcoaceticus )的同源性为 98%。在细菌系统发育分类学上 ,PHEA 2归属变形细菌γ亚类中的不动杆菌属 ,醋酸钙不动杆菌。PHEA 2除了能够降解苯酚外 ,还能降解苯甲酸盐和邻苯二酚。

乙酸钙-鲍氏不动杆菌临床分离与耐药性的7年监测

目的了解1998～2004年乙酸钙-鲍氏不动杆菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料.方法回顾分析1998～2004年间所有标本中乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率,菌株在标本和病区的分布以及对14种抗菌药物的耐药率.结果乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率有逐年升高的趋势,从1998年的0.18%增至2004年的1.48%;其在呼吸道标本的分离率最高（70.58%）,其次是尿液（9.42%）、血液（4.63%）;病区分布以重症监护室最高（47.28%）,乙酸钙-鲍氏不动杆菌对14种抗菌药物的耐药率,1998年仅有氨曲南＞50%,而到2004年仅头孢哌酮/舒巴坦的耐药率＜50%,其他13种均＞50%;其耐药率均呈递增的趋势,耐药性增幅列前3位分别为：头孢他啶11.1%～88.9%、亚胺培南0～64.8%、复方新诺明0～64.0%.结论乙酸钙-鲍氏不动杆菌的临床分离率在增加,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,且耐药率呈逐年上升趋势,尤其是对亚胺培南耐药率的快速增长,应引起临床抗感染治疗的高度重视.

一株辛基酚聚氧乙烯醚降解菌的筛选、鉴定及其降解

采用TX-100为唯一碳源的无机盐培养基进行筛选,经过富集、分离和纯化获得了一株能够耐高浓度TX-100且降解性能较好的降解菌,命名为H1.对细菌H1进行形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA(GenBank Accession No.KC505179)序列相似性分析,初步鉴定为醋酸钙不动杆菌属(Acinetobacter calcoaceticus).通过对菌株H1降解TX-100的产物分析,初步推断TX-100的降解模式为末端氧化,先从EO末端氧化,醚键断裂,形成短链的化合物,同时释放出乙醛酸.质粒检测和消除试验表明,控制菌H1降解TX-100的基因位于质粒上.

醋酸钙不动杆菌产生的耐热碱性脂肪酶的研究

从福建省福州市郊区土壤中分离筛选到一株活力强的作用温度高的碱性脂肪酶野生型菌株:醋酸钙不动杆菌 F-1903。该菌产酶培养基组成（%）:大豆粉2.0、玉米浆1.0、糊精1.0、磷酸氢二钾0.5、硝酸钠0.5.产酶最适条件:发酵培养基起始 pH9.0,温度26℃,周期28小时。酶作用最适温度54℃,最适 pH9.2。Ca2+对酶有激活作用,EDTA 有抑制作用。

一株双酚A降解菌的筛选、鉴定及其生长、降解条件

从沈阳北部污水处理厂曝气池活性污泥中驯化、分离及筛选得到一株以双酚A为唯一碳源的高效降解菌株D-17,通过菌体形态、生理生化反应特性及16S r DNA基因测序分析对其进行了鉴定,并研究了该菌株的生长及双酚A降解条件。菌种鉴定结果表明,该菌为乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。实验结果表明:该菌株的生长及降解双酚A的最适条件为溶液pH 7.0,接种量10%,摇床转速150 r/min,降解温度30℃,降解时间5d;当双酚A初始质量浓度为60 mg/L时,双酚A降解率达52.62%;投加蛋白胨后,双酚A降解率提高至57.15%。

乙酸钙不动杆菌对富营养化景观水体的净化作用

利用乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus),在室内采用投菌法对富营养化景观水体进行预处理试验研究。通过不同的投菌量φ=0.05×10-3、0.1×10-3、0.2×10-3,对水体进行处理,结果表明,乙酸钙不动杆菌对富营养化水体中的总氮(TN)、总磷(TP)、CODcr均有一定的去除效果,其中在投菌量为0.1×10-3时处理效果最好。通过进一步的连续投菌净化试验,水体中的TN、TP、CODcr显著降低,处理后,水体中叶绿素a的质量浓度为19.1mg·m-3,去除率为83.7%,藻类基本得到控制。由此可见,乙酸钙不动杆菌能够有效性地去除水体中的有机物、氮、磷,因此具有净化富营养化水体的作用。

临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌耐药性分析

目的:研究无锡市第四人民医院和无锡市第三人民医院临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的耐药情况及其临床分布特点。方法:收集并分离临床来源的35株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌,观察并记录临床分布,并用琼脂二倍稀释法测定抗菌药物对醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的MIC值。结果:临床分离的35株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌ICU感染居多,占42.86%,老年男性居多,主要来源于痰,占88.57%。醋酸钙鲍曼复合不动杆菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、呋喃妥因的耐药率均为100%;对氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢米诺、头孢匹胺、氨曲南和庆大霉素的耐药率>90%;对替卡西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲(口恶)唑的耐药率≥80%;对哌拉西捌/他唑巴坦、头孢他啶、阿米卡星、妥布霉素、加替沙星的耐药率>50%;对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率相对较低,分别为23.53%、11.43%、11.43%。结论:醋酸钙鲍曼复合不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦较敏感,临床医生应根据药敏结果和患者自身情况合理用药。

医院获得性肺炎患者醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的鉴定和耐药基因研究

目的:了解我院医院获得性肺炎患者下呼吸道分离的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌种鉴定方法和耐药性,探讨其耐药机制。方法:收集2009-2014年临床分离的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体共318株,用K-B法进行药敏试验,用gyr B多重PCR法对其进行菌种鉴定,检测碳青霉烯酶及金属β-内酰胺酶耐药基因。结果:318株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体鉴定为鲍曼不动杆菌298株、不动杆菌基因种型3为5株、不动杆菌基因种型13TU 8株。对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦的不敏感率分别为78.0%、89%、92.1%。OXA型碳青霉烯酶基因OXA-51、OXA-23、OXA-24、OXA-58检出率分别为91.2%、65.7%、1.3%、3.8%;金属β-内酰胺酶基因IMP、VIM、GIM-1、SPM-1检出率分别为0.9%、34.6%、6.3%、0.9%;未检测到OXA-48、OXA-143、SIM-1、KPC、NDM-1等基因。结论:gyr B多重PCR法是一种快速、特异性高、可靠的鉴定鲍曼不动杆菌的方法。鲍曼不动杆菌对多种抗生素呈现高度耐药。我院鲍曼不动杆菌耐药性主要与OXA-23、VIM等耐药基因的表达有关。

溴氰菊酯降解菌的分离与鉴定及其降解特性

以长期施用溴氰菊酯农药的茶园土壤作为菌源,以富集驯化培养法从中分离得到一株溴氰菊酯降解菌DXQ018。通过生理生化及16S rDNA分析,将菌株DXQ018鉴定为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。研究了菌株DXQ018在不同条件下对溴氰菊酯的降解特性,结果表明:培养温度、培养基初始pH和底物质量浓度对菌株DXQ018的生长及其对溴氰菊酯的降解率都有影响;当培养温度为37℃、培养基初始pH为7、底物质量浓度为20 mg/L时,菌株DXQ018对溴氰菊酯的最高降解率达到58.27%。

大豆卵磷脂和乐果有机磷降解菌的分离鉴定及酶活性比较

【目的】明确2株有机磷降解菌Yj2和Yj3对大豆卵磷脂和乐果有机磷的降解特性及酶活性。【方法】利用16S r DNA鉴定从大豆土壤中分离得到的Yj2和Yj3菌株,在菌株最佳生长条件下,测定了不同磷源时菌体的酶活性并分级纯化了有机磷降解酶。【结果】Yj2为醋酸钙不动杆菌Acinetobacter sp.,其最佳生长碳源为葡萄糖,氮源为硫酸铵,p H为8;Yj3为芽孢杆菌Bacillus sp.,其最佳生长碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,p H为9。大豆卵磷脂为磷源时,Yj3的菌体生长情况稍优于Yj2。乐果为磷源时,Yj2的菌体生长情况稍优于Yj3;72 h内Yj2酸性和碱性磷酸酶活性整体高于Yj3,而有机磷降解酶活性低于Yj3。硫酸铵沉淀法+阳离子交换层析分别从Yj2和Yj3菌体中成功分离纯化了有机磷降解酶,SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白均为单一条带。Yj2硫酸铵沉淀法+阳离子交换层析的提纯倍数是硫酸铵沉淀的7.77倍,硫酸铵沉淀为粗酶的1.35倍。Yj3硫酸铵沉淀法+阳离子交换层析的提纯倍数是硫酸铵沉淀的5.07倍,硫酸铵沉淀为粗酶的1.53倍。【结论】菌株Acinetobacter sp.Yj2和Bacillus sp.Yj3都具有降解大豆卵磷脂及乐果有机磷的特性,对有机磷降解起主要作用的是酸性磷酸酶、碱性磷酸酶及有机磷降解酶,它们在2株菌株对大豆卵磷脂和乐果降解过程中所起的作用有明显差异。可从Yj2和Yj3菌体分离纯化获得提纯倍数较高的有机磷降解酶蛋白。

Delftia tsuruhatensis AD9苯胺双加氧酶基因的过量表达及多功能降解工程菌的构建

Delftia tsuruhatensis AD9和Acinetobacter calcoaceticus PHEA-2分别能利用苯胺和苯酚作为唯一碳源生长,降解的第一个中间产物均为邻苯二酚,随后裂解为参与三羧酸循环的中间产物。通过PCR方法克隆到苯胺高效降解菌AD9的苯胺双加氧酶基因,并构建表达苯胺双加氧酶的广宿主质粒载体pVD,通过三亲接合,导入到AD9和PHEA-2中。对两种重组菌中苯胺双氧酶基因的表达及苯胺降解特性的分析结果表明,增加苯胺双加氧酶基因的拷贝数可以提高野生型AD9的苯胺降解速率,同时该基因的表达使PHEA-2菌获得苯胺降解能力。

山梨糖脱氢酶在乙酸钙不动杆菌中的表达

目的:在乙酸钙不动杆菌Y2004中表达山梨糖脱氢酶。方法:将酮古龙酸菌山梨糖脱氢酶基因sdh以及从pWH1266质粒上扩增的复制原点ori先后酶切连接到pBBR1MCS2质粒上,构建pBBR1MCS2-ori-sdh穿梭质粒;再以pBBR1MCS2-ori-sdh/DH5α为供体菌、乙酸钙不动杆菌Y2004为受体菌、pRK2013/HB101为辅助菌进行三亲本接合转移;从氨苄青霉素和卡那霉素双抗平板上挑取转化子进行培养,通过菌落PCR和提取质粒复转筛选阳性克隆,再通过活性电泳和体外糖酸转化实验检测阳性克隆的山梨糖脱氢酶活性。结果:构建了pBBRMCS2-ori-sdh质粒并转入乙酸钙不动杆菌Y2004中,活性电泳和体外实验证实阳性克隆具有山梨糖脱氢酶活性。结论:实现了山梨糖脱氢酶在乙酸钙不动杆菌Y2004中的表达,为单菌糖酸转化的进一步研究奠定了基础。

醋酸钙不动杆菌的分离鉴定及溶藻特性

淡水微囊藻水华不仅造成水体动植物缺氧死亡,而且释放藻毒素,影响人类和其它动物的健康。利用液体感染技术,从河南省平顶山市白龟山水库分离一株能够溶解铜绿微囊藻PCC 7806的溶藻菌,命名为溶藻菌5,16S r DNA核苷酸序列测序证实该菌株为醋酸钙不动杆菌。它具有一定的溶藻特异性,只溶解PCC 7806,对FACHB-930和斜生栅藻没有影响,能够促进衣藻和红球藻的生长。最佳溶藻体积比为1∶1。溶藻菌5的菌体和无细胞培养物均具有相同的溶藻效果。显微观察藻细胞被溶解的黄化液显示细菌并未附着在藻细胞周围,也无菌胶膜形成。表明溶藻菌5可能通过释放杀藻物质和与藻竞争营养物质两种机制溶解藻细胞。