Calumenin在成人脑胶质母细胞瘤中的表达及对U87细胞增殖与迁移的作用

目的检测Calumenin在成人脑胶质母细胞瘤中的表达,并研究其对胶质瘤细胞系(U87细胞株)的细胞生物学作用。方法收集成人脑胶质母细胞瘤手术切除标本(肿瘤组)和非脑部疾病死亡的人脑组织标本(对照组),RT-q PCR检测Calumenin mRNA水平,免疫组化染色检测Calumenin表达;利用RNAi技术在U87细胞中特异性沉默Calumenin,观察细胞增殖及迁移变化。结果 Calumenin在人脑胶质母细胞瘤中mRNA表达量明显高于对照组,其免疫组化染色显示Calumenin蛋白阳性;U87细胞敲除Calumenin后,细胞增殖、迁移能力均显著下降。结论 Calumenin在人脑额叶胶质瘤母细胞瘤中确有表达,其对于胶质瘤细胞系的恶性细胞生物学特征发挥了重要作用,为胶质瘤的靶向治疗提供新的分子生物学靶点。

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞内质网应激及Calumenin蛋白和缝隙连接蛋白CX43的作用

目的:研究黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞内质网应激、网腔钙结合蛋白(calumenin)及缝隙连接蛋白43(CX43)作用。方法:原代培养的乳鼠心肌细胞分3组:对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞)、黄芪总黄酮组(正常细胞+黄芪总黄酮)。柯萨奇病毒感染组感染,黄芪总黄酮组感染同时给予黄芪总黄酮20 mg/L。采用免疫组化方法检测培养乳鼠心肌细胞α-SMA蛋白,Western blot技术检测各组心肌细胞Calumenin蛋白及内质网应激伴侣蛋白GRP78,CX43表达。结果:1与对照组相比,柯萨奇病毒感染组心肌细胞GRP78表达增多(P<0.01),calumenin蛋白及CX43表达减少(P<0.01);与柯萨奇病毒感染组比较,黄芪总黄酮组心肌细胞GRP78表达减少(P<0.01),Calumenin蛋白及CX43表达增多(P<0.01)。结论:CVB3可引发心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达增加进而发生内质网应激,并使Calumenin蛋白及CX43表达减少;黄芪总黄酮抑制CVB3感染心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78表达从而减轻内质网应激,同时使Calumenin蛋白及CX43表达增多,该实验结果可能与其抗病毒性心肌炎并发心律失常作用密切相关。

caspase抑制剂z-VAD-fmk对阿霉素损伤乳鼠心肌细胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表达的影响

目的:研究细胞凋亡限速酶caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk对阿霉素损伤心肌细胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表达的影响,探讨心肌细胞网腔钙结合蛋白与内质网应激及心肌细胞凋亡是否存在相互调控关系。方法:原代培养乳鼠心肌细胞实验分为3组:对照组(正常细胞)、阿霉素组(3 mg/L阿霉素+心肌细胞)、ZVAD-fmk组(3 mg/L阿霉素+0.1μmol/L Z-VAD-fmk+心肌细胞),每组细胞设3个复孔,分别处理后置37℃、CO2培养箱中培养24 h阿霉素组、z-VAD-fmk组。采用免疫组化方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白。采用Western blot技术检测各组心肌细胞Calumenin、内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94及caspase-3表达。结果:与对照组相比较,阿霉素组心肌细胞calumenin表达明显减少(P<0.01),GRP78、GRP94及caspase-3表达增加(P<0.01)。与阿霉素组相比较,z-VAD-fmk组心肌细胞calumenin表达增加(P<0.01),而GRP7,GRP94及caspase-3减少(P<0.01)。结论:caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk增加阿霉素损伤心肌细胞calumenin表达进而缓解内质网应激。

Effect of creatine phosphate sodium on miRNA378,miRNA378＊ and calumenin mRNA in adriamycin-injured cardiomyocytes

Objective: To investigate the effect of creatine phosphate sodium(sodium phosphocreatine) on miRNA378, miRNA378* and calumenin m RNA in adriamycin-injured suckling mouse myocardium. Methods: The suckling mouse myocardium of primary culture were randomly divided into control group, adriamycin group and treatment group. To identify the suckling mouse myocardium, Smooth muscle actin-α(α-SMA) was monitored by immunohistochemical method. Cardiac function was evaluated by transthoracic echocardiography. The mRNA change of miRNA378, miRNA378* and calumenin m RNA were detected by quantitative real-time PCR. The expression of calumenin and GRP78 were identified by western blot. Results: Mitochondrial damage and vacuolization were found in adriamycin-induced suckling mouse myocardium compared with control group, while creatine phosphate sodium could reduce this phenomenon. Compared with the control group, the mRNA of miRNA378, miRNA378* and calumenin in adriamycin group was reduced, while creatine phosphate sodium could increase this phenomenon. The expression of calumenin and GRP78 were decreased after adriamycin treatment in suckling mouse myocardiums, creatine phosphate sodium increased the expression of calumenin and GRP78. Conclusion: The results of this experiment might be closely related to the effects of that creatine phosphate sodium reduced the pathological mechanism of suckling mouse myocardium with myocarditis caused by adriamycin.

磷酸肌酸钠对慢病毒介导Calumenin蛋白沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激信号通路的作用

目的:探讨磷酸肌酸钠对网腔钙结合蛋白(Calumenin)沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激信号通路作用。方法:培养乳鼠心肌细胞,构建稳定的慢病毒——Calumenin质粒,转染乳鼠培养心肌细胞,实验分为4组:对照组(正常细胞+3mg/L阿霉素)、模型组(慢病毒感染细胞+3mg/L阿霉素)、磷酸肌酸钠1组(正常细胞+阿霉素+磷酸肌酸钠)、磷酸肌酸钠2组(转染细胞+阿霉素+磷酸肌酸钠)。采用Western blotting技术检测各组心肌细胞Calumenin蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、PATF-4PERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达。结果:1与对照组比较,模型组及磷酸肌酸钠2组心肌细胞Calumenin蛋白表达明显减少(P<0.01)。2与对照组相比,模型组内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PPERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达明显增多(P<0.01)。3与模型组相比较,磷酸肌酸钠1组及磷酸肌酸钠2组内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子P-PERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达减少(P<0.01)。结论:阿霉素损伤可能诱发ERS,并通过ERS凋亡信号通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF-4→CHOP/IRE1→CHOP引起心肌细胞凋亡;磷酸肌酸钠可抑制阿霉素损伤所诱导内质网应激介导的心肌细胞凋亡,这一作用机制可能是通过Calumenin蛋白抑制ERS及其凋亡信号通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF-4→CHOP/IRE1→CHOP实现的。

阿霉素损伤心肌细胞miRNA378＊与calumenin、GRP78、bax及bcl-2相关性研究

目的:研究阿霉素损伤心肌细胞miRNA378*与网腔钙结合蛋白(calumenin)、内质网应激伴侣蛋白GRP78、凋亡因子bax及bcl-2相关性。方法:实验分6组:对照组、阿霉素组、miRNA378*过表达对照组、miRNA378*过表达组、miRNA378*沉默对照组、miRNA378*沉默组。原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378*、calumenin、GRP78、bax及bcl-2mRNA表达。结果:1与对照组相比较,阿霉素组心肌细胞calumenin mRNA表达明显减少(P<0.01),GRP78 mRNA表达增加(P<0.01),bax mRNA表达增加(P<0.01),bcl-2mRNA表达明显减少(P<0.01)。2与阿霉素组相比较,miRNA378*过表达组心肌细胞calumenin mRNA表达增加(P<0.01),bcl-2mRNA表达增加(P<0.01),而GRP78mRNA表达减少(P<0.01),bax mRNA表达减少(P<0.01)。与阿霉素组相比较,miRNA378*沉默组GRP78、bax mRNA表达增加(P<0.01),bcl-2mRNA表达减少(P<0.01)。结论:阿霉素损伤可能引起心肌细胞calumenin表达减少进而发生内质网应激;上调miRNA378*表达会增加阿霉素损伤心肌细胞calumenin表达缓解内质网应激,进而抑制心肌细胞凋亡;而沉默miRNA378加重阿霉素损伤心肌细胞内质网应激及促进心肌细胞凋亡。

网腔钙结合蛋白的研究进展

网腔钙结合蛋白(calumenin)在内质网中具有分子伴侣作用,和心肌细胞内质网钙泵、兰尼碱受体共同调节内质网钙稳态。此外,Calumenin蛋白可以作为一种分泌蛋白,分泌至细胞外调控着血管钙化、血栓形成、细胞迁移和细胞凋亡的病理生理过程。本文对Calumenin蛋白和钙循环、血管钙化、血栓形成、细胞迁移以及细胞凋亡的关系作一综述,为疾病的临床诊治提供新的思路。

黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心肌自噬及心肌重塑的影响

目的:研究黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心肌重塑、网腔钙结合蛋白(calumenin)及自噬影响。方法:36只雄性SD大鼠分为正常对照组(n=12)、缺血性心肌病组(n=12)、黄芪注射液组(n=12),3组大鼠术前行心电图及心脏彩超检查后,正常对照组不做任何处理,而缺血性心肌病组和黄芪注射液组大鼠开胸结扎冠状动脉20 min后,解开结扎线行再灌注后关闭胸腔建立心肌缺血模型,黄芪注射液组术后每次注射黄芪注射液10 g/kg体重,每周注射1次,共注射4次。3组大鼠术后4周行心脏彩超检查后处死大鼠取心脏行HE染色、VG染色,观察心肌病理改变,用Western blot技术检测各组大鼠心肌细胞calumenin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达变化及LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值变化。结果:与缺血性心肌病组比较,黄芪注射液组大鼠心脏彩超及心肌病理得到明显改善;同时,calumenin表达增加LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值表达降低(P<0.01)。结论:黄芪注射液对缺血性心肌病大鼠心室重塑及心肌细胞自噬有明显抑制作用,该作用可能是通过calumenin所介导的。

miRNA378~*表达对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白表达的影响

目的:研究沉默miRNA378~*表达对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞凋亡、内质网应激、网腔钙结合蛋白(calumenin)影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞分为:对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞+柯萨奇B3病毒)、miRNA378~*沉默对照组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378~*空质粒)、miRNA378~*沉默组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378~*沉默质粒),各组细胞分别转染和感染处理后置37℃、CO_2培养箱中培养3 d。检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞凋亡率、网腔钙结合蛋白、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及内质网应激信号通路因子激活转录因子6(ATF6)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。结果:通过检测ɑ-SMA蛋白,证实分离乳鼠细胞为心室肌细胞。TUNEL法检测不同组心室细胞凋亡情况发现,柯萨奇病毒感染组心室肌细胞凋亡明显,与柯萨奇病毒感染组心肌细胞相比较,miRNA378~*沉默组心肌细胞凋亡细胞量明显减少。与柯萨奇病毒感染组比较,Calumenin表达减少(P<0.01),而GRP78、ATF6、CHOP表达增加(P<0.01)。结论:CVB3病毒感染心肌细胞作用与miRNA378~*,引发内质网应激并激活信号通路因子,心肌细胞凋亡增加。

钙腔蛋白(rs2290228)基因多态性与华法林稳定剂量的关系

目的探讨钙腔蛋白(CALU,rs2290228)基因型在中国汉族人群中的分布情况及其基因多态性与瓣膜置换术后华法林稳定剂量的关系。方法采用Snapshot技术检测226例研究对象CALU(rs2290228)位点基因型,研究其基因型及等位基因频率;比较其中176例行瓣膜置换术后抗凝稳态患者基因多态性与华法林稳定剂量的关系。结果 226例中CALU(rs2290228)位点基因型TT、CT和CC分别为2例(0.9%)、88例(38.9%)和136例(60.2%),T和C等位基因的频率分别为20.4%和79.6%;176例服用华法林达稳定状态患者,华法林日维持剂量为TT型(2.75±0.35)mg/d,CT型(3.37±0.81)mg/d,CC型(3.14±0.89)mg/d;3种基因型华法林日维持剂量、凝血酶原时间和抗凝强度预设国际标准化比值组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论中国汉族人群CALU(rs2290228)基因多态性可能不是瓣膜置换术后华法林个体剂量差异的影响因素。

阿霉素损伤心肌细胞miRNA378与网腔钙结合蛋白、内质网应激的关系

目的:研究阿霉素损伤心肌细胞miRNA378与网腔钙结合蛋白(calumenin)、内质网应激相关性。方法:原代培养乳鼠心肌细胞分为6组:对照组、阿霉素组、miRNA378过表达对照组、miRNA378过表达组、miRNA378沉默对照组、miRNA378沉默组,采用免疫组化法检测细胞α-SMA蛋白;慢病毒质粒转染心室肌细胞,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378、calumenin及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达。结果:与阿霉素组相比较,miRNA378过表达组心肌细胞calumenin mRNA表达增加(P<0.01),而GRP78 mRNA表达减少(P<0.01);与阿霉素组相比较,miRNA378沉默组calumenin及GRP78 mRNA表达无统计学差异。结论:阿霉素损伤乳鼠心肌细胞是通过减少calumenin蛋白表达进而引起内质网应激,该作用通过上调miRNA378得到缓解。

黄芪注射液对网腔钙结合蛋白基因沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78,GRP94 mRNA的作用

目的：研究黄芪注射液对网腔钙结合蛋白（calumenin）基因沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78,GRP94 mRNA的作用。方法：实验将体外培养的1~3 d乳鼠心肌细胞分为5组：对照组、模型组（正常细胞＋3 mg/L阿霉素）、calumenin基因沉默模型组（慢病毒感染细胞＋3 mg/L阿霉素）、黄芪组1（正常细胞＋3mg/L阿霉素＋200 g/L黄芪）、黄芪组2（慢病毒感染细胞＋3 mg/L阿霉素＋200 g/L黄芪）。构建慢病毒-calumenin质粒,转染乳鼠培养心肌细胞,采用实时荧光定量分析（real-time PCR）检测各组心肌细胞calumenin及内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94 mRNA表达。结果：1与对照组比较,模型组心肌细胞calumenin mRNA表达减少（P〈0.05）,而calumenin基因沉默模型组及黄芪组2心肌细胞calumenin mRNA表达明显减少（P〈0.01）;与模型组比较,黄芪组1心肌细胞calumenin mRNA表达增加（P〈0.05）;与calumenin基因沉默模型组比较,黄芪组2心肌细胞calumenin mRNA表达明显增加（P〈0.01）。2与对照组相比较,模型组及calumenin基因沉默模型组心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94 mRNA表达明显增多（P〈0.01）;与模型组比较,黄芪组1心肌细胞GRP78、GRP94 mRNA表达明显减少（P〈0.01）;与calumenin基因沉默模型组比较,黄芪组2心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94 mRNA表达明显减少（P〈0.01）。结论：1阿霉素损伤可引起心肌细胞calumenin表达减少。2Calumenin可缓解阿霉素损伤所诱导心肌细胞内质网应激。黄芪注射液可抑制阿霉素损伤所诱导心肌细胞内质网应激,这种作用可能系通过calumenin介导实现的。

网腔钙结合蛋白在心血管疾病中的研究进展

网腔钙结合蛋白(calumenin)是CREC家族中一种低亲和力的钙结合蛋白,在内质网中有分子伴侣作用,并参与调节内质网的钙稳态.网腔钙结合蛋白也可以在细胞外分泌,以影响血管钙化、血栓形成及细胞凋亡等过程.现综述网腔钙结合蛋白在心血管疾病中的研究进展,旨为心血管疾病的临床诊断和治疗提供新的方向.

阿霉素致心肌细胞凋亡时网腔钙结合蛋白的变化

目的:研究阿霉素致心肌细胞凋亡时网腔钙结合蛋白的变化。方法:构建稳定的慢病毒——Calumenin质粒,乳鼠培养心肌细胞随机分2组,分别为对照组(正常细胞+3mg/L阿霉素)、模型组(慢病毒感染细胞+3mg/L阿霉素),采用实时荧光定量分析(real-time PCR)及Western blotting技术检测对照组、模型组心肌细胞Calumenin蛋白表达;采用Western blotting技术检测对照组、模型组心肌细胞促凋亡因子Caspase-3及Chop表达;采用TUNEL技术检测各组心肌细胞凋亡率。结果:1与对照组比较,模型组心肌细胞Calumenin蛋白mRNA及蛋白水平表达明显减少(P<0.01);2与对照组比较,模型组心肌细胞促凋亡因子Caspase-3及Chop表达明显增多(P<0.01);3与对照组比较,模型组心肌细胞凋亡明显增多(P<0.01)。结论:Calumenin蛋白对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用。

氧化应激对乳鼠心肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号传导通路作用的研究

目的:研究氧化应激对原代培养乳鼠心房肌细胞网腔钙结合蛋白(calumenin)、内质网应激及信号传导通路作用,探讨氧化应激与心房肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激及其凋亡信号传导通路相关性。方法:实验分2组:对照组和氧化应激组。原代培养乳鼠心房肌细胞,氧化应激组在培养的原代心房肌细胞中加入终浓度为100μmol/L的H2O2培养2h,检测氧化和抗氧化指标的变化。ELASE法检测2组心房肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)含量。Western bloting检测2组心房肌细胞GRP78、GRP94、chop、IRE1及caspase-3、caspase-9、caspase-12表达。结果:1与对照组比较,氧化应激组心房肌细胞SOD活力下降,GSH含量下降,MDA含量增加(P<0.01)。2与对照组比较,氧化应激组心房肌细胞calumenin表达减少(P<0.01),而GRP78、GRP94、chop、IRE1及caspase-3、caspase-9、caspase-12表达增加(P<0.01)。结论:氧化应激反应能引起心房肌细胞calumenin表达减少,这可能介导心房肌细胞内质网应激反应并激活其凋亡信号传导通路表达,导致心房肌细胞凋亡,参与心房结构重构引发房颤。

钙腔蛋白基因在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的检测钙腔蛋白(CALU)基因在脑胶质瘤中的表达,探讨CALU对脑胶质瘤患者预后的影响,分析CALU共表达基因的相关生物学功能。方法回顾性分析中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)mRNAseq_325数据库中CALU阳性表达的288例脑胶质瘤患者的CALU测序表达量和临床资料,分析不同类型脑胶质瘤患者CALU的表达水平对生存期的影响,采用多因素Cox回归法分析影响患者生存期的相关因素。采用Pearson相关性分析筛选与CALU共表达的相关基因,应用在线富集分析工具分析共表达基因的生物学功能。结果288例患者中,世界卫生组织(WHO)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级患者CALU的表达量分别为4.74±0.68、5.49±1.12及6.17±0.94;异柠檬酸脱氢酶l(IDH1)野生型和突变型的脑胶质瘤中,CALU的表达量分别为6.13±1.17、5.08±0.76;无1p/19q共缺失和有1p/19q共缺失的胶质瘤中,CALU的表达量分别为5.79±0.07、4.71±0.07。上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别间、原发与复发性胶质瘤患者CALU的表达量差异均无统计学意义(均P>0.05)。CALU高表达、低表达患者(各144例)的中位生存期分别为13.0(1~132)个月和82.5(2~149)个月,差异有统计学意义(P<0.01)。在WHOⅡ~Ⅳ级胶质瘤患者中,CALU的高表达量主要与Ⅲ、Ⅳ级患者的生存时间降低有关(均P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,CALU表达量是胶质瘤患者生存期的独立影响因素(RR=2.193,95%CI:1.507~3.192,P<0.01)。CGGA数据库中,与CALU表达呈正相关的基因有325个,这些基因的生物学功能主要为信号传导、细胞黏附及细胞代谢等,主要参与了内质网内的蛋白质处理、黏附作用及癌症通路。结论CALU与脑胶质瘤的恶性程度相关,其可作为高级别胶质瘤患者预后的预测因子,以及潜在的研究和治疗靶点。

丹参多酚酸盐对阿霉素诱导的扩张型心肌病大鼠心功能的影响及机制研究

目的:研究丹参多酚酸盐对阿霉素诱导的扩张型心肌病(DCM)大鼠心功能的作用及机制。方法:30只SD雄性大鼠分为对照组(10例)、阿霉素组(10例)和丹参多酚酸盐组(丹参多酚酸盐+阿霉素)(10例)。实验8周后行高频超声心动图检查,测定各项心功能指标后取心脏,行苏木精染色、masson染色及电镜观察。用TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡,Western blot检测各组大鼠心肌细胞网腔钙结合蛋白(Calumenin)、内质网伴侣蛋白GRP78及凋亡因子chop、Bax、Bcl-2表达水平。结果:与阿霉素组比较,丹参多酚酸盐组大鼠心脏的收缩与舒张功能明显改善(P<0.01);心肌细胞凋亡明显减少(P<0.01);心肌细胞Calumenin表达增多,而GRP78及促凋亡因子chop、Bax表达减少(P<0.01),抑制凋亡因子Bcl-2表达增多(P<0.01)。结论:丹参多酚酸盐可改善DCM大鼠病理改变及心功能,减少DCM大鼠心肌细胞凋亡,上述作用可能通过增加心肌细胞Calumenin表达,缓解内质网应激,减少心肌细胞凋亡来实现。

钙腔蛋白rs339097基因多态性与华法林稳定剂量的关系

目的:探讨钙腔蛋白(CALU)rs339097基因型在中国汉族人群中的分布情况及其基因多态性与瓣膜置换术后华法林稳定剂量的关系。方法:采用Snapshot技术检测226例研究对象CALU rs339097位点基因型,计算其基因型及等位基因频率。对其中176例瓣膜置换术患者,分析CALU rs339097基因多态性与华法林稳定剂量的相关性。结果:226例研究对象中,基因型TT、CT、CC分别为221例(97.8%)、4例(1.8%)和1例(0.4%),T和C等位基因分别为446次(98.7%)和6次(1.3%)。176例瓣膜置换术患者中,CC基因型未检出,TT基因型检出172例,CT基因型检出4例;在达到稳定抗凝状态时,TT基因型和CT基因型华法林日维持剂量[(3.19±0.86)mg/d∶(4.50±0.61)mg/d]差异有统计学意义(P=0.003)。结论:中国汉族人群CALUrs339097基因多态性是瓣膜置换术后华法林个体剂量差异的影响因素。

miRNA378*对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用

目的:探讨上调miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用。方法:实验分4组:对照组(正常细胞)、CVB3感染组(正常细胞+CVB3)、miRNA378*过表达对照组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*空表达质粒)、miRNA378*过表达组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*过表达质粒)。原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,除对照组外,其他各组心肌细胞感染CVB3,采用TUNEL技术检测各组心肌细胞凋亡率;用Western blotting技术检测各组心肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达。结果:与CVB3感染组比较,miRNA378*过表达组心肌细胞凋亡率明显减少,网腔钙结合蛋白表达增加,而GRP78、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达均减少(均P<0.01),PERK表达差异无统计学意义。结论:上调CVB3感染心肌细胞miRNA378*表达可引起心肌细胞凋亡减少,网腔钙结合蛋白表达增多,进而缓解内质网应激,并抑制内质网应激凋亡信号通路因子表达。

黄芪总黄酮通过网腔钙结合蛋白调控线粒体钙循环及内质网应激介导CVB3感染心肌细胞保护作用研究

目的研究黄芪总黄酮对CVB3感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白(calumenin)、GRP78、chop表达、线粒体膜电位(ΔΦm)及线粒体通透性转换孔(MPTP)作用。方法乳鼠心肌细胞分离后分为空白组、模型组和黄芪总黄酮治疗组,每组设计3个复孔。模型组和治疗分别以108PFU/ml CVB3感染细胞。同时治疗组加入20mg·L^-1 TFA处理细胞3天.采用Western blot检测各组心肌细胞calumenin、GRP78、chop表达,采用钙黄绿素(calcein)-AM绿色荧光染色测定各组心肌细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)开放情况,采用Rho123检测各组心肌细胞线粒体膜电位(ΔΦm),采用TUNEL检测各组心肌细胞凋亡。结果与CVB3感染心肌细胞比较,黄芪总黄酮组心肌细胞ΔΦm及MPTP发生明显改变(P<0.01);同时,calumenin表达增加,GRP78、chop表达减少;细胞凋亡减少。结论黄芪总黄酮明显减少CVB3感染心肌细胞凋亡,该作用可能通过增加calumenin表达,改善线粒体钙循环及缓解内质网应激所介导的。