不同水分条件对海南龙血树幼苗表型可塑性及生态适应性的影响

通过盆栽试验探讨濒危植物海南龙血树幼苗对水分响应的表型可塑性,分析其生态适应性。结果表明,海南龙血树幼苗对水分的响应主要在形态指标和生物量方面,除了比叶面积、叶片长宽比和株高外,其他指标均达到显著水平(P<0.05);生物量分配主要与根部性状相关,幼苗叶绿素和类胡萝卜素含量在各处理间无显著差异(P>0.05)。海南龙血树幼苗能够充分利用水分资源,在雨季快速生长,并将更多的生物量分配给根部,有利于度过雨季后严峻的干旱季节。海南龙血树幼苗对水分响应的生存策略具有很强的生态适应性。

柬埔寨白蝶兰,中国兰科一新记录种

报道中国兰科白蝶兰属一新记录种——柬埔寨白蝶兰Pecteilis cambodiana (Gagnep.) Aver.,描述其特征并提供了彩色图片。凭证标本保存于福建农林大学林学院树木标本室(FJFC)。

濒危植物海南龙血树种子萌发及其环境适应性分析

为了解海南龙血树（Dracaena cambodiana）濒危的机制,研究了果皮、温度、水分和光照强度等对其种子萌发的影响,并分析海南龙血树种子萌发的环境适应性.结果表明,果皮对海南龙血树种子萌发有显著抑制作用,去除果皮且用果皮浸泡液浇灌可以显著促进种子的萌发.种子萌发对温度极为敏感,25℃是种子萌发适宜的温度,低于15℃或高于30℃均不能萌发,变温处理对种子萌发具有一定的促进作用.海南龙血树种子萌发需要较高的遮荫度,光照强度对种子萌发有显著影响.种子萌发对基质的水分含量不敏感,在含水量为9.09%-20.00%的河沙基质中,种子的萌发率、萌发速率指数、萌发时滞和萌发指数均无显著差异.因此,海南龙血树种子萌发对果皮、温度、光照强度等微环境的依赖性较强,原有生境破坏导致种子萌发微环境改变可能是海南龙血树居群有性生殖失败,海南龙血树处于濒危状态的主要原因之一.

通气对几种水培观赏植物生长的影响

采用通气泵对营养液通气以提高营养液中溶解氧量,研究通气对水培小天使、芦荟、金琥、山海带4种植物生长的影响。结果表明:通气会改变植物不同范围直径根在根系中所占的比例,进而增大根总长、根表面积,促进植物对养分和水分的吸收。

海南龙血树野生资源分布及其与水热关系的分析

在全面调查海南龙血树（Dracaenacambodiana）野生资源地理分布的基础上，用温度指数、湿度指数等气候指标分析了海南龙血树野生资源地理分布与气候因子间的关系。结果表明，海南龙血树野生资源在中国仅分布于海南岛西南部山区及南部沿海地区，水平分布于108°42’40．9”～110°27’36．8”E，18°14’27”～19°20’28．5’，N，垂直分布范围为0-900m，仅发现10个现存分布点；海南龙血树属于热带雨林、季雨林小乔木状植物，具有强耐旱、喜阳和喜钙等生态习性，其分布区的绝大部分水热因子是其分布的主要限制因子。主成分分析表明，影响海南龙血树地理分布的主要水热指标的排序为热量因子〉降水因子〉湿度因子。根据野生居群的生境特点，我们推测水分和光照强度可能是影响海南龙血树种子萌发率或幼苗成活率的重要因子。

海南龙血树种群生境及自然更新能力调查

对海南岛海南龙血树(Dracaena cambodiana Pierre ex Gagnep)生境、人为破坏情况和自然更新能力进行了调查与分析,探讨了其濒危原因。结果表明,海南龙血树属典型的岩石伴生型植物,主要分布在高温少雨地区,常生长在陡峭且裸露的花岗岩或石灰岩的石缝残积土中,或紧贴石壁生长于砂壤土中,其伴生树种以小乔木或灌木为主;由于无节制采挖和生境破坏,海南龙血树野生资源数量已十分有限。自然条件下海南龙血树的更新方式有种子更新、根蘖更新和桩蘖更新,但现有生境条件下无论何种更新方式均无法有效地实现种群的扩大和更新。可见,原生境破坏和无节制采挖是海南龙血树濒危的外因,"濒危生境"造成种子无法萌发或幼苗生长失败,导致种群无法实现自然更新是内因和主要原因。

海南龙血树离体快速繁殖

以3月龄高约25cm的海南龙血树为基本材料,以茎节纵切块为外植体,在改良MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基中培养1个月后萌芽率为78.6%。萌芽在MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L培养基中连续两次继代培养,2个月后芽增殖倍数为2.9。丛芽及单芽都在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基中进行培养,1个月后丛芽的单芽增殖倍数为4.6,单芽增殖倍数为0.8。萌芽放入MS(改良)+NAA0.2mg/L培养基中进行培养,生根率为100%,移栽成活率为100%。

海南龙血树抗肿瘤新用途研究

目的:筛选海南龙血树的抗肿瘤活性部位。方法:分别用溶剂萃取法和大孔吸附树脂柱层析法对海南龙血树的95%乙醇提取物进行分段处理,利用MTT法测定各提取部位体外抗肿瘤活性。结果:氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对体外肿瘤细胞表现出较强的抑制活性,甲醇洗脱物显示了弱活性,水提取、水洗脱物和50%甲醇-水洗脱物则没有活性。在各提取物中氯仿提取物活性最强。结论:氯仿提取部位是海南龙血树主要的体外抗肿瘤活性部位。

海南龙血树内生真菌A12中的抗菌活性成分研究

目的研究海南龙血树内生真菌A12的活性次生代谢产物。方法采用多种柱色谱技术进行分离纯化,根据波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构,采用滤纸片琼脂扩散法测定化合物抗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的活性。结果分离鉴定了7个化合物,分别为胞嘧啶核苷(1),尿嘧啶核苷(2),对羟基苯乙酸(3),对羟基苯乙醇(4),尿嘧啶(5),desacetylaustin(6)和thiomethisosildenafil(7)。结论活性测试结果表明化合物3和4具有抗金黄色葡萄球菌和MRSA的活性,首次发现化合物7具有抗金黄色葡萄球菌活性。

海南龙血树RAPD-PCR反应体系的优化

采用单因子试验和正交试验设计,对影响海南龙血树RAPD-PCR反应的模板DNA量、Mg2+、dNTP和引物浓度,Taq聚合酶用量等因子进行研究,分析各因子对RAPD-PCR扩增结果的影响,确立了海南龙血树RAPD-PCR反应的最佳条件,即在25μL反应体系中,包含10×buffer2.5μL,2.0mmol/L MgCl2,300μmol/L dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.8μmol/L和DNA模板20ng。以此条件为基础,筛选出适用于海南龙血树RAPD-PCR分析的18条有效引物,为采用RAPD技术分析海南龙血树种群遗传变异水平和遗传结构打下了基础。

海南龙血树组织培养过程中血竭形成的诱导

以海南龙血树组培苗为材料,研究组织培养过程中不同植物激素和浓度、不同龙血树组织、不同光照条件对血竭形成诱导的影响。结果表明:植物细胞分裂素(6-Benzylamino purine,6-BA)可以诱导龙血树组培苗产生血竭,其诱导的效果与6-BA的浓度无关,而与光照条件有关,并且在一定的范围内其诱导效率与光照强度成正相关;血竭的形成与组培苗的木栓化程度有关,木栓化程度越高,越容易诱导血竭的形成。

海南龙血树基因组DNA提取方法比较

为选择一种简单、快速、有效的海南龙血树总DNA的提取方法,分别采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法和改良CTAB法提取海南龙血树嫩叶片的总DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和ISSR对所提取的总DNA进行检测。结果表明,改良CTAB法提取的DNAA260/A280在1.7～1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好。以该方法提取的总DNA为模板进行ISSR扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究是有效提取海南龙血树基因组的方法。

海南龙血树查尔酮合酶基因(DcCHS)的克隆及表达分析

利用RT-PCR和RACE技术对海南龙血树查尔酮合酶基因进行克隆,得到1条1 456 bp的cDNA序列,命名为DcCHS。DcCHS含有1 173 bp的阅读框架、99 bp的5′非编码区和184 bp的3′非编码区,编码390个氨基酸。DcCHS与其他植物的CHS氨基酸序列同源性高达84%以上,具有高度保守的CHS_like结构域、活性位点以及信号序列。推测DcCHS的分子量为42.7 ku,等电点pI为6.14,稳定性极差,具有15个磷酸化位点,无跨膜结构,无信号肽,亚细胞定位在细胞质的可能性较大,并预测了蛋白质的二级、三级结构。组织特异性分析结果表明,DcCHS在花中的表达远远高于根、茎、叶和果实。

龙血树血竭生物合成相关基因分离与分析

龙血树是热带、亚热带地区所特有的珍稀植物,是著名民间药物"血竭"的重要原料。该药在我国中药材市场中占有重要的地位。目前血竭的生产是从多年生的龙血树上取其带脂茎杆提炼而成,该法需要大量的原材料,不断的砍伐已使其资源面临枯竭的威胁,现其已被列为国家三级保护的濒危植物。如何有效地开发和利用龙血树这一宝贵的资源,使其得到可持续和高效的利用是目前研究的一个重要方向。本研究以经诱导物诱导处理刚产生血竭和未经诱导物处理的海南龙血树(Dracaena cambodiana Pierre ex Gagnep)组培苗为材料,利用抑制消减杂交(supression subtractive hybridization,SSH)技术构建了龙血树血竭生物合成相关基因的差减cDNA文库,采用PCR方法筛选差减文库获得431个重组子。随机挑取200个克隆经Reverse Northern Blot筛选剔除假阳性后,共获得59个差异较明显的阳性克隆,测序后得51条差异片段,通过BLASTn和BLASTx进行比较分析,结果表明:分离到与信号转导相关的cDNA片段5个,转录翻译相关蛋白cDNA片段5个,物质能量代谢酶类cDNA片段12个,另外有23个克隆在GenBank中均未发现显著相关的同源序列,推测它们可能是功能未知的新基因或是靠近3'-末端的基因片段,因保守性较低,难以通过同源比较推测其功能。

海南龙血树基于愈伤组织诱导途径的组培快繁技术体系优化

以海南龙血树侧芽和顶芽为外植体,诱导愈伤组织进而分化成苗,同时利用愈伤组织诱导血竭。研究结果如下:①诱导愈伤组织与分化最适培养基为:1/2 MS+6-BA 2.0 mg/L+NNA 0.1 mg/L+CM 50 mL/L+糖30 g/L+卡拉胶8.6 g/L,诱导的愈伤组织结构致密、结实,分化的芽多,诱导达90﹪以上;②芽继代增殖最适培养基为:改良MS+6-BA 2.0 mg/L+NNA 0.1 mg/L+CM 50 mL/L+糖30 g/L+卡拉胶8.6 g/L,芽的长势好且整齐,增殖系数达5～6;③生根最适培养基为:不经过壮苗阶段直接从小苗进入生根阶段,1/2 MS+NNA 0.4 mg/L+GA 1.0 mg/L+糖30 g/L+卡拉胶8.6 g/L,根多且均匀,生根率达100%;④诱导出血竭后分离、提取龙血竭,经薄层层析和HPLC对照,发现愈伤诱导血竭与天然血竭的14种成分在HPLC峰形相似度较高。这一基于愈伤组织途径的组培技术兼顾了种苗生产和血竭生产的同步进行,为今后提供了高效、快捷、方便的规模化生产开辟了新思路。

海南龙血树WD40转录因子基因DcWD40-1的克隆和表达分析

海南龙血树是国产血竭的主要基源植物,其血竭主要化学成分为类黄酮化合物。为进一步了解DcWD40-1在类黄酮生物合成中的潜在功能和作用机制,该研究根据海南龙血树转录组数据,利用RT-PCR技术在海南龙血树中克隆了一个WD40基因DcWD40-1,该基因全长1550 bp,包含一个1353 bp的开放阅读框,编码450个氨基酸,蛋白质分子量50.77 kD,理论等电点5.71。生物信息学分析显示,DcWD40-1属于WD40蛋白家族成员,具有5个保守的WD40结构域,和其他植物WD40蛋白同源性高,保守性强。利用Genome Walking方法分离了1503 bp的DcWD40-1启动子序列,该区域具有典型真核生物启动子结构特征,并含有多个应答激素和胁迫的响应元件。表达分析显示,血竭诱导剂能够诱导Dc WD40-1的表达,DcWD40-1的变化与血竭形成及类黄酮积累正相关。此外,DcWD40-1也能对茉莉酸甲酯、细胞分裂素、油菜素内酯和UV-B处理做出积极响应。

海南龙血树的核型分析

采用染色体压片技术研究了海南龙血树的染色体数目和核型。结果表明:在饱和对二氯苯和0.002 mol/L8-羟基喹啉预处理中,后者预处理2 h效果最好;海南龙血树染色体数为2n=42,核型类型为"2B"型。核型公式为:2n=2x=42=22 m+20 sm,核型不对称系数为62.67%。海南龙血树主要由中部着丝粒染色体和近中部着丝粒染色体组成,未观察到随体染色体。

小花龙血树植物资源研究现状

综述了小花龙血树资源分布、生物学特性、繁育技术、药理及观赏价值等方面的研究进展,并且提出了一些需要解决的问题。

海南龙血树离体快繁的研究

[目的]加强龙血树组织培养的再生体系,为其迅速繁殖及大规模工厂化育苗提供依据。[方法]以龙血树的幼嫩茎段为外植体,用9种6-BA、NAA不同浓度配比的诱导培养基和NAA不同浓度的生根培养基进行对比试验,研究海南龙血树的组织培养与快速繁殖。[结果]龙血树幼嫩茎段的诱导和生长与6-BA、NAA有关系,两者的配比直接影响茎段的再生频率。6-BA浓度对愈伤组织的形成影响极为显著,NAA的影响不是很明显。MS+0.3 mg/L NAA的生根时间最短,15 d左右生根,根数多,根系良好,移栽成活率高达95%。[结论]龙血树幼嫩茎段的诱导和不定芽增殖的最适培养基为MS+6.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,增殖系数达10以上,最适宜的生根培养基为MS+0.3 mg/L NAA。

海南龙血树的组织培养与快速繁殖

用种子作外植体,建立了海南龙血树(DracaenacambodianaPierreexGagnepain)的组织培养和再生体系。结果表明:海南龙血树种子诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L,诱导率达80%;附加6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L的MS培养基有利于芽的分化和增殖,培养60d左右,每个外植体分化形成的再生小植株数达8～20个;在1/2MS+NAA0.5mg/L的培养基中诱导生根效果最好。