细胞外基质硬度对肿瘤进展的影响及治疗策略

背景:细胞外基质是一个复杂的网络结构,不仅为组织构建提供了物理支撑,还在细胞的生存、增殖、分化、死亡等过程中发挥着重要调控作用。细胞外基质生物化学和生物力学性质的异常改变会显著影响肿瘤细胞的增殖、迁移、免疫逃逸及治疗抵抗等行为。硬度是细胞外基质的重要力学特性,基质硬度的异常与肿瘤进展紧密相关。目的:通过梳理近年来关于细胞外基质硬化的机制、高硬度基质对肿瘤进展的影响以及降低基质硬度治疗癌症等方面的最新研究进展,深化对细胞外基质力学特性的理解,提升对肿瘤进展复杂机制的认识,为肿瘤治疗提供新的思路和方向。方法:以“细胞外基质功能,细胞外基质硬度,胶原蛋白沉积交联,细胞外基质僵硬治疗,免疫治疗”为中文检索词,以“extracellular matrix function,extracellular matrix stiffness,collagen deposition cross-linking,extracellular matrix stiffness therapy,immunotherapy”为英文检索词,检索中国知网、PubMed数据库、万方数据库2016年1月至2024年6月发表的相关文献,最终纳入80篇文章进行综述。结果与结论:①细胞外基质中胶原蛋白和弹性蛋白的沉积和过度交联导致基质重塑,进而增加基质硬度,这种硬化激活了cyclin-D1、Rho/ROCK、p-PXN-Rac1-YAP、STAT3/p-STAT3等促癌信号通路,促进了癌细胞的增殖、转移、肿瘤微血管生成及免疫逃逸等恶性行为,加速了肿瘤的进展;②减少基质蛋白的沉积和交联可以降低基质硬度,不仅可以抑制多种促癌信号通路的活化,还能够增强药物在肿瘤部位的渗透和递送,是癌症治疗的新策略;③目前,基于基质降解以降低肿瘤硬度的药物正在研发中,少数药物已进入临床试验阶段,有望为肿瘤治疗提供新的有力武器。

基于光谱CT的细胞外容积分数与结直肠癌临床病理特征的相关性

目的:探讨细胞外容积分数(extracellular volume fraction,ECV)与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)临床病理特征的相关性。方法:回顾性分析97例CRC患者临床病理资料,测量平衡期碘密度图中病灶及同层面主动脉或髂动脉的碘密度,计算ECV。以ECV中位数分高、低水平两组,正态分布的计量、计数资料分别采用t检验和卡方检验,偏态分布的计量资料两组间及多组间比较分别采用Mann-Whitney U检验和Kruskal Wallis H检验,组间差异有统计学意义的变量再进行相关性分析;采用线性回归进行单因素和多因素分析。利用受试者工作特征曲线分析ECV预测独立影响因素的效能。结果:ECV中位数为32.0%,高ECV组46例、低ECV组51例。两组间肿瘤大体分型、有无脉管癌栓和神经侵犯、T分期及TNM分期差异具有统计学意义(P<0.05),其中ECV与脉管癌栓和神经侵犯均呈正相关(r=0.330/0.415,P<0.001),与T分期呈弱正相关(r=0.260,P<0.05),大体分型仅隆起型与溃疡型ECV差异有统计学意义。两组CEA、CA199、肿瘤位置、肿瘤长径、分化程度、N分期、Ki-67表达率差异无统计学意义(P>0.05)。单因素分析显示肿瘤长径、分化程度、TNM分期、脉管癌栓和神经侵犯是影响ECV的相关因素(P<0.05);多因素分析显示脉管癌栓和神经侵犯是ECV的独立影响因素(P<0.05)。ECV预测脉管癌栓和神经侵犯的ROC曲线下面积分别为0.70、0.76。结论:ECV是CRC术前评估的重要指标,对有无脉管癌栓和神经侵犯有良好的预测效能。

缺氧诱导的胃癌细胞外泌体通过促进中性粒细胞胞外诱捕网的形成对胃癌细胞增殖能力的影响

目的探究缺氧条件下胃癌细胞外泌体(exosome,exo)诱导的中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对胃癌细胞生长的影响。方法提取正常和缺氧培养条件下SGC-7901和HGC细胞分泌的外泌体(记为N-SGC-7901 exo、N-HGC exo、H-SGC-7901 exo和H-HGC exo),中性粒细胞分为磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution,PBS)组、N-SGC-7901组、N-HGC组、H-SGC-7901组、H-HGC组、N-SGC-7901 exo组、N-HGC exo组、H-SGC-7901 exo组、H-HGC exo组,Sytox Green染色检测各组细胞NETs的形成。SGC-7901细胞分为PBS/培养液(culture medium,CM)组、N-SGC-7901 exo/CM组、H-SGC-7901 exo/CM组、H-SGC-7901 exo/CM+DNAse组,HGC细胞分为PBS/CM组、N-HGC exo/CM组、H-HGC exo/CM组和H-HGC exo+DNAse/CM组。CCK8检测SGC-7901和HGC细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。结果相比于PBS组,N-SGC-7901组、H-SGC-7901组、N-HGC组、H-SGC组中性粒细胞NETs增加,且H-SGC-7901组高于N-SGC-7901组,H-SGC组高于N-HGC组。相比于PBS组,N-SGC-7901 exo组、H-SGC-7901 exo组、N-HGC exo组、H-SGC exo组中性粒细胞NETs增加,且H-SGC-7901 exo组高于N-SGC-7901 exo组,H-SGC exo组高于N-HGC exo组。相比于PBS/CM组,N-SGC-7901 exo/CM组和H-SGC-7901 exo/CM组SGC-7901细胞增殖和克隆形成能力显著增加(P<0.01),并且H-SGC-7901 exo/CM组高于N-SGC-7901 exo/CM组(P<0.001),而H-SGC-7901 exo/CM+DNase组增殖和克隆形成能力显著低于H-SGC-7901 exo/CM组。相比于PBS/CM组,N-HGC exo/CM组和H-HGC exo/CM组HGC细胞增殖和克隆形成能力显著增加(P<0.01),并且H-HGC exo/CM组高于N-HGC exo/CM组(P<0.001),H-HGC exo/CM+DNase组增殖和克隆形成能力显著低于H-HGC exo/CM组。结论缺氧条件下胃癌细胞外泌体通过促进NETs形成而促进胃癌细胞的生长。

PAD4介导中性粒细胞胞外诱捕网促甲状腺癌细胞增殖、侵袭的机制研究

目的探究肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在甲状腺癌细胞增殖、侵袭和细胞周期中的作用机制以及临床相关性研究。方法收集60例甲状腺癌患者和60例健康受试者的外周血,ELISA检测血清中PAD4和组蛋白H3瓜氨酸化(H3cit)水平,并分析甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平与疾病进展的相关性。提取甲状腺癌患者和健康受试者外周血中性粒细胞,qRT-PCR检测PAD4 mRNA表达水平,离子霉素刺激和绿菁染色检测NETs形成水平。将NETs、GSK484与人甲状腺癌细胞株CAL-62共孵育,分为Control组、NETs组和NETs+GSK484组。采用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞增殖和侵袭水平以及细胞周期进展。结果与健康受试者相比,甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),且PAD4和H3cit水平呈正相关(P<0.05)。甲状腺癌患者的PAD4和H3cit水平均与TNM分期有关(P<0.05)。与健康受试者相比,甲状腺癌患者外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达及NETs形成水平升高(P<0.05)。与Control组相比,NETs组细胞增殖、侵袭水平升高(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05)。GSK484可抑制NETs形成。与NETs组相比,NETs+GSK484组细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G1期细胞比例升高(P<0.05)。结论PAD4介导的NETs通过激活细胞周期进展,促进甲状腺癌细胞增殖和侵袭,加速甲状腺癌疾病进展。

基于CT细胞外体积分数预测Ⅲ期结肠癌预后风险的研究

目的探讨基于多期对比增强CT的细胞外体积分数(extracellular volume fraction,ECV)对Ⅲ期结肠癌预后风险的预测价值。方法回顾性收集2016年12月至2018年10月于吉林大学中日联谊医院确诊为Ⅲ期结肠癌并行根治性切除手术的55例患者的基本资料,所有患者术前均进行了多期增强CT扫描,通过测量平扫、延迟期增强CT图像上结肠癌病灶及同层面大动脉的CT值来计算ECV分数。根据时间依赖性ROC曲线获得的最佳截断值,将患者分为高/低ECV组。通过COX回归分析评估ECV分数与Ⅲ期结肠癌术后复发转移间的关系,用Kaplan-Meier曲线比较高/低ECV组无病生存率(disease-free survival,DFS)的差异。此外在组织学切片上(H&E染色)测量病理ECV分数,评估基于CT的ECV分数与病理ECV分数间的相关性。结果低ECV组与高ECV组患者的基线临床病理特征无显著差异,低ECV组3年DFS率(80%)显著高于高ECV组(50%)(P=0.008),Cox回归分析表明ECV分数是Ⅲ期结肠癌的独立预后风险因素(HR,4.749;95%CI:1.654~13.638;P=0.004)。并且基于CT的ECV分数与病理ECV分数间具有显著相关性(P=0.001,r=0.73)。结论术前基于多期增强CT的ECV分数可以作为预测Ⅲ期结肠癌预后生存的影像学指标。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子、基质金属蛋白酶-9和赖氨酸去甲基化酶6B在浸润性乳腺癌组织中的表达及其病理诊断价值

目的探讨浸润性乳腺癌组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和赖氨酸去甲基化酶6B(KDM6B)蛋白的表达及其与临床病理特征的关系,并分析3种蛋白的相关性及其在浸润性乳腺癌病理诊断中的价值。方法选择2014年1月至2017年12月河南中医药大学第五临床医学院/郑州人民医院病理科保存的124例浸润性乳腺癌患者的手术切除活检标本为研究对象,另选取同期保存的低级别导管内癌组织标本20例、高级别导管内癌组织标本27例、距离浸润性乳腺癌>1 cm处癌旁组织标本22例作为对照组。采用免疫组织化学法检测乳腺癌旁组织、低级别导管内癌、高级别导管内癌及浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的表达。分析EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的相对表达量与浸润性乳腺癌临床病理特征的关系;采用Spearman法分析浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9、KDM6B蛋白的相关性,受试者操作特征(ROC)曲线评估EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白对浸润性乳腺癌的诊断价值。结果高级别导管内癌和浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于乳腺癌旁组织和低级别导管内癌组织(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于癌旁组织和低级别导管内癌组织(P<0.05);浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于高级别导管内癌组织(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于高级别导管内癌组织(P<0.05);癌旁组织与低级别导管内癌组织中EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。EMMPRIN、KDM6B蛋白相对表达量与浸润性乳腺癌患者的年龄、肿瘤部位和肿瘤直径无关(P>0.05),MMP-9蛋白相对表达量与浸润性乳腺癌患者的年龄和肿瘤部位无关(P>0.05)。EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的相对表达量与浸润性乳腺癌的世界卫生组织(WHO)分级、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),MMP-9蛋白的相对表达量与浸润性乳腺癌的肿瘤直径有关(P<0.05)。浸润性乳腺癌WHO分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中,EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量依次升高,KDM6B蛋白的相对表达量依次降低(P<0.05);浸润性乳腺癌淋巴结有转移组EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于无淋巴结转移组(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于无淋巴结转移组(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期组EMMPRIN、MMP-9蛋白的相对表达量显著高于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05),KDM6B蛋白的相对表达量显著低于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05)。在浸润性乳腺癌肿瘤直径≤2 cm、2~5 cm、>5 cm组中MMP-9蛋白的相对表达量依次升高(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,浸润性乳腺癌组织中EMMPRIN与MMP-9蛋白的表达呈显著正相关(r=0.990,P=0.000),EMMPRIN与KDM6B蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.606,P=0.000),MMP-9与KDM6B蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.612,P=0.000)。ROC曲线分析显示,EMMPRIN蛋白诊断浸润性乳腺癌的曲线下面积(AUC)为0.875[95%置信区间(CI):0.823~0.926,P<0.05],最佳界值为10.043,敏感度为79.0%,特异度为76.8%;MMP-9蛋白诊断浸润性乳腺癌的AUC为0.863(95%CI:0.808~0.917,P<0.05),最佳界值为10.070,敏感度为74.2%,特异度为76.8%;KDM6B蛋白诊断浸润性乳腺癌的AUC为0.267(95%CI:0.196~0.338,P<0.05),最佳界值为11.003,敏感度为71.0%,特异度为98.6%。结论EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白与浸润性乳腺癌的发生发展有关,检测EMMPRIN、MMP-9和KDM6B蛋白的表达有助于浸润性乳腺癌的病理诊断及其浸润转移的临床判断。

十溴联苯醚暴露通过胞外囊泡装载miR-221促进三阴性乳腺癌细胞转移

目的:探讨环境污染物十溴联苯醚(BDE-209)暴露促进三阴性乳腺癌(TNBC)恶性进展的机制。方法:将TBNC细胞分为空白对照组和BDE-209暴露组。超速离心法提取胞外囊泡,分别应用扫描电子显微镜和蛋白质印迹法对提取的胞外囊泡进行鉴定,采用纳米颗粒跟踪技术检测胞外囊泡生成量,细胞划痕实验和Transwell小室实验检测与胞外囊泡共培养后TNBC细胞的迁移能力和扩散能力,定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测囊泡中的miR-221表达水平,蛋白质印迹法检测共培养后TNBC细胞中基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达水平。结果:与空白对照组比较,2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209暴露可显著增加胞外囊泡的生成(均P<0.05),其中200.00 ng/mL BDE-209暴露诱导释放的胞外囊泡共培养的细胞迁移率较空白对照组提高86%,穿膜细胞数提高至1.32倍,miR-221表达水平提高至2.71倍,MMP9表达水平提高至1.62倍(均P<0.05)。转染抗miR-221抗体能降低BDE-209暴露诱导生成的胞外囊泡内miR-221表达水平,使BDE-209促进MDA-MB-231细胞迁移的能力被显著抑制。结论:BDE-209暴露可通过增加胞外囊泡的生成及装载miR-221增强TNBC细胞的迁移能力,促进TNBC细胞转移。

芒柄花黄素经ERK信号通路抑制食管癌细胞的免疫逃逸机制

目的探讨芒柄花黄素(Formononetin)通过ERK信号通路对食管癌细胞免疫逃逸的影响机制。方法选取食管癌TE-1细胞系,原代培养,选取P3代单层细胞纳入研究;采用不同浓度(0、50、100、200μg/mL)Formononetin处理细胞24 h;MTT、划痕实验、Transwell实验检测TE-1细胞增殖、迁移、侵袭能力;ELISA检测细胞上清液免疫逃逸相关因子(IL-4、IL-10、TNF-α)水平;Western-blot检测免疫逃逸关键因子B7-H1及ERK信号通路关键蛋白(ERK1/2、c-Fos、c-Jun)浓度表达;食管癌TE-1细胞采用ERK信号通路抑制剂SCH772984处理,检测Control组、Formononetin组、SCH772984组、Formononetin+SCH772984组ERK信号通路关键蛋白(ERK1/2、c-Fos、c-Jun)表达,确定Formononetin对ERK信号通路的靶向调控。结果随着细胞培养时间延长,各组食管癌细胞均体现出增殖的趋势(P<0.05);与Control组相比,Formononetin的干预可明显下调食管癌细胞的增殖能力、迁移能力及侵袭能力(P<0.05);且随着Formononetin干预剂量的提升,食管癌细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力均逐渐降低,呈现计量依赖性(P<0.05)。Formononetin干预可明显下调免疫共刺激因子B7-H1、免疫逃逸相关因子(IL-4、IL-10、TNF-α)水平(P<0.05);且随着Formononetin干预剂量提升,食管癌细胞B7-H1、IL-4、IL-10、TNF-α含量均逐渐降低,呈现计量依赖性(P<0.05);Formononetin干预可明显下调ERK信号通路关键蛋白(ERK1/2、c-Fos、c-Jun)浓度表达(P<0.05);且随着Formononetin干预剂量的提升,食管癌细胞内ERK1/2、c-Fos、c-Jun浓度表达逐渐降低,呈现计量依赖性(P<0.05);与Control组相比,Formononetin、ERK信号通路抑制剂SCH772984的干预可以明显下调ERK信号通路关键蛋白(ERK1/2、c-Fos、c-Jun)浓度表达(P<0.05);二者联合干预后ERK信号通路活性进一步下降,食管癌细胞内ERK1/2、c-Fos、c-Jun浓度表达亦降低(P<0.05)。结论芒柄花黄素通过靶向抑制ERK信号通路活性降低食管癌细胞的免疫逃逸能力,降低肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力,最终抑制肿瘤远处扩散,值得临床进一步研究。

基于CT测定的细胞外体积分数对结肠腺癌术前病理分级的预测价值

目的:探讨CT测定的细胞外体积分数(ECV)预测结肠腺癌病理分级可行性。方法:选取经手术病理证实的结肠腺癌患者380例,术前均行腹部多期动态CT增强扫描。结肠癌病灶的ECV通过平扫和平衡期图像在ROI测量计算。根据病理分级将患者分为高级别组100例和低级别组280例,比较2组影像特征及临床特征。ECV与结肠腺癌病理分级的相关性行二元logistic回归分析。采用ROC曲线评价ECV对结肠腺癌病理分级的诊断效能。结果:多因素logistic回归分析显示,ECV是结肠腺癌病理分级的独立预测因子,OR值为1.380(95%CI1.289~1.477)。ROC曲线显示:ECV对结肠腺癌病理分级的诊断效能较好,AUC为0.898(95%CI0.851~0.947),敏感度为90.0%,特异度为91.4%。结论:基于CT测定的ECV有助于预测结肠腺癌的病理分级,且对个体化治疗具有一定意义。

肺癌免疫治疗新靶点:中性粒细胞胞外诱捕网

肺癌是我国居民发病率和死亡率都较高的恶性肿瘤之一,了解其发生和发展的机制以便采取更好的策略进行预防和治疗尤为重要。肿瘤相关微环境在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,肿瘤相关的中性粒细胞代表着肿瘤微环境中的大部分炎性细胞,中性粒细胞能够分泌一种网状结构称为中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trapping networks,NETs),然而,NETs促进肿瘤发生、发展的相关机制尚不清楚,本综述着重讨论了其在肺癌发生、发展中所起的关键作用。

细胞外组蛋白与膀胱癌相关血栓形成的研究进展

膀胱恶性肿瘤的患者都处于高凝状态。然而,肿瘤引起这种高凝状态的机制尚不完全清楚。本文综述了现有的人类和动物研究细胞外组蛋白和癌症相关血栓形成的文献。肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)对组蛋白的瓜氨酸化被认为是导致中性粒细胞释放细胞外组蛋白的关键途径之一。膀胱癌细胞可以通过释放可溶性介质(如白细胞介素8)和激活血小板来促进中性粒细胞释放细胞外组蛋白。外源性DNA酶已被证明可以在体外降解细胞外组蛋白并减少血栓形成。目前临床上还未使用PAD4抑制剂,但动物模型提示了其有效的结果和安全性。动物实验结果表明,一些被批准用于其他适应证的疗法,如白细胞介素1受体阻断剂和Janus蛋白酪氨酸激酶抑制剂,可能减轻细胞外组蛋白在癌症中的形成或其促血栓作用。抑制细胞外组蛋白的形成是否也能减少癌症相关的血栓形成在临床上还未确定。

细胞外基质刚度诱导CCL5合成以提高非小细胞肺癌免疫治疗响应

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞外基质刚度调控趋化因子配体5(C-C motif chemokine ligand 5,CCL5)的机制,揭示CCL5对NSCLC的免疫治疗响应的影响。方法通过TCGA数据库分析NSCLC细胞外基质刚度与CCL5表达的相关性;根据NSCLC细胞外基质刚度设计不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶,获得响应水凝胶基质刚度力学加载的H1299细胞并对其进行转录组测序,利用q-PCR验证高基质刚度对CCL5表达的影响;进一步利用NSCLC患者转录组数据探究CCL5与免疫治疗响应的相关性。结果高细胞外基质刚度可以上调CCL5的表达,并且干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)介导的信号通路可能参与了该过程;CCL5高表达的NSCLC患者,肿瘤组织中细胞毒性T细胞的丰度更高,与抗程序性死亡受体-1(programmed cell death protein 1,PD-1)治疗响应性有关。结论细胞外基质刚度增加可促进CCL5合成,CCL5可通过增加肿瘤组织中细胞毒性T细胞浸润提升NSCLC的免疫治疗响应性。

基于能谱CT多参数术前预测结直肠癌神经侵犯

目的:探讨能谱CT定量参数术前预测结直肠癌(CRC)神经侵犯(PNI)的价值。方法:回顾性分析2021年3月-2023年5月经术后病理证实的123例CRC患者的临床和影像资料。其中,存在PNI者71例,无PNI(nPNI)者52例。术前所有患者行能谱CT全腹三期增强扫描。在各期图像上测量病灶的碘基值(IC)、标准化IC(nIC)与能谱曲线斜率(λH)并计算肿瘤细胞外容积分数(ECV)。比较PNI组与nPNI组之间各项能谱CT参数值的差异。将差异具有统计学意义的参数纳入二元logistic回归分析中,构建联合预测模型,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估各项参数及联合模型对PNI和nPNI的鉴别诊断效能。结果:PNI组病灶在三期增强图像上的IC和λH、以及在静脉期和延迟期图像上的nIC和ECV的测量值均大于nPNI组,差异均具有统计学意义(P<0.05);而动脉期nIC在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。单一参数预测PNI状态的AUC为0.632~0.820;联合模型预测PNI状态的AUC为0.859,敏感度和特异度分别为76.10%和86.50%。结论:能谱CT多参数能够在术前预测CRC-PNI,有望推进能谱CT在术前预测CRC-PNI中的进一步研究和远期临床运用。

细胞外组蛋白H3通过NF-κB调控膀胱癌细胞增殖及凋亡的作用

目的 探讨组蛋白H3通过核因子-κB(NF-κB)调控膀胱癌细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法 收集手术切除的膀胱癌组织及癌旁组织,培养正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1及膀胱癌细胞株BIU-87、J82、RT4、UM-UC-3、T24,检测核蛋白NF-κB、总蛋白生存素(Survivin)的表达水平。T24细胞分组,用不同浓度组蛋白H3(50、100、200 mg/L)、200 mg/L组蛋白H3联合200μmol/L NF-κB抑制剂PDTC处理,检测细胞增殖水平、细胞凋亡率、核蛋白中NF-κB、总蛋白中Survivin、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达水平。结果 膀胱癌组织中NF-κB、Survivin的表达水平高于癌旁组织,BIU-87、J82、RT4、UM-UC-3、T24细胞中NF-κB、Survivin的表达水平高于SV-HUC-1细胞(P<0.05);筛选NF-κB、Survivin表达上调最明显的T24细胞进行后续实验;组蛋白H3以浓度依赖的方式增加T24细胞的增殖水平及NF-κB、Survivin的表达水平,抑制T24细胞的凋亡率及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达水平(P<0.05);200 mg/L组蛋白H3联合200μmol/L NF-κB抑制剂PDTC处理后,T24细胞的增殖水平及NF-κB、Survivin的表达水平低于200 mg/L组蛋白组,凋亡率及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达水平高于200 mg/L组蛋白组(P<0.05)。结论 细胞外组蛋白通过激活膀胱癌细胞中NF-κB/Survivin途径促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。

乳腺癌中线粒体功能障碍与CPT1A/ERK信号转导通路共同调节乳腺癌恶性行为的机制研究

背景与目的:肉碱棕榈酰转移酶1A(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)的高表达与乳腺癌患者预后较差相关,且能促进线粒体对脂肪酸的利用并最大限度地提高三磷酸腺苷(triphosphate,ATP)产量。然而,CPT1A在乳腺癌转移中的作用仍不清楚。本研究旨在探讨乳腺癌中线粒体功能障碍与CPT1A/细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)信号转导通路共同调节乳腺癌恶性行为的机制。方法:分别使用慢病毒系统和shRNA工具在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7中过表达或敲低CPT1A,将细胞分为NC组、CPT1A组和shCPT1A组。采用transwell实验检测细胞侵袭能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α)、ERK1/2和CPT1A蛋白的表达。采用线粒体红染色分析MDAMB-231和MCF7细胞系的线粒体形态,并通过耗氧率分析线粒体呼吸能力。结果:与表达对照载体的细胞相比,CPT1A过表达导致MCF7细胞和MDA-MB-231细胞侵袭能力增强(P<0.05),shCPT1A敲低导致细胞侵袭能力降低(P<0.05)。与NC组相比,CPT1A组MDA-MB-231和MCF7细胞中线粒体分支长度显著变短(P<0.05),ERK1/2、PGC-1α表达显著增加(P<0.05),shCPT1A组MDA-MB-231和MCF7细胞中线粒体分支长度显著变长(P<0.05),ERK1/2、PGC-1α表达显著降低(P<0.05)。此外,与NC组相比,CPT1A组MDA-MB-231细胞基础和最大呼吸能力以及ATP产量显著增加(P<0.05),而shCPT1A组MDA-MB-231细胞基础和最大呼吸能力以及ATP产量显著降低(P<0.05)。结论:CPT1A激活的ERK1/2-PGC-1α信号转导通路在线粒体分裂介导的乳腺癌细胞转移中发挥重要作用。

外泌体与卵巢癌转移及诊治相关性的研究进展

卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)是一种发生在女性盆腔内的恶性肿瘤疾病,临床治疗效果欠佳,且预后较差,死亡率极高.外泌体(Exos omes)作为细胞间信息和遗传物质传递的载体,广泛存在于多种体液中.最新研究表明,外泌体与卵巢癌的发生、发展密切相关,其广泛参与卵巢癌肿瘤微环境的形成、调控癌细胞转移和肿瘤血管生成等过程,并可作为卵巢癌的潜在生物标志物、治疗靶点和药物载体应用于临床.本文就外泌体生物学功能及其在卵巢癌转移和诊疗中的作用进行综述,以期为更深入研究卵巢癌的发病机制和改善其临床治疗效果提供新的理论依据.

细胞外组蛋白调控TLR4/NF-κB途径对膀胱癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的研究细胞外组蛋白调控Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)途径对膀胱癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)和侵袭的影响。方法培养膀胱癌细胞株T24并分为对照组、不同浓度组蛋白H3(50、100、200μg/mL)组、溶剂对照(体积分数0.1%DMSO)组、组蛋白H3(200μg/mL)+溶剂对照(体积分数0.1%DMSO)组、组蛋白H3(200μg/mL)+NF-κB抑制剂Bay11-7082(10μmol/L)组。分组给药24 h后检测细胞侵袭数目及细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、TLR4、磷酸化P65 NF-κB(p-P65 NF-κB)的蛋白表达水平。结果不同浓度组蛋白H3组的细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin、TLR4、p-P65 NF-κB的表达水平高于对照组,E-cadherin的蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)且组蛋白H3浓度越高,细胞侵袭数目及蛋白表达水平的变化越显著;组蛋白H3+Bay11-7082组的细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin、p-P65 NF-κB的表达水平低于组蛋白H3+溶剂对照组,E-cadherin的蛋白表达水平高于组蛋白H3+溶剂对照组(P<0.05)。结论细胞外组蛋白促进膀胱癌细胞EMT及侵袭,这一促进作用与激活TLR4/NF-κB途径有关。

三项血清指标在非小细胞肺癌患者中的表达及其临床意义

目的分析血清谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、纤维母细胞生长因子受体1(FGFR1)、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及其临床意义。方法我院收治的96例NSCLC患者(NSCLC组)和同期体检健康者60例(对照组),比较两组血清GSTP1、FGFR1、CD147水平以及不同临床病理特征患者上述血清指标水平,分析3项指标对NSCLC的诊断效能。结果NSCLC组血清GSTP1、FGFR1、CD147高于对照组(P<0.05);不同TNM分期、淋巴结转移情况的NSCLC患者血清GSTP1、FGFR1 DNA、CD147水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);3项指标联合诊断NSCLC的AUC、特异度、灵敏度分别为0.908、91.70%、90.00%,均高于单一指标检测(P<0.05)。结论血清GSTP1、FGFR1、CD147在NSCLC患者中显著上调,且能影响疾病的发生、进展及预后,联合检测在NSCLC临床诊疗中发挥重要价值。

靶向CAF策略在PDAC免疫治疗中的应用研究进展

胰腺导管癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)是一种常见的胰腺癌,其发病隐匿、发展迅速、恶性程度高。传统的治疗方法对其效果不佳,这与PDAC具有丰富的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)密不可分,而癌症相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)是ECM中最重要的组成部分。CAF可通过分泌大量效应分子,与肿瘤免疫微环境(tumor microenvironment,TME)内的其他免疫成分相互作用,从而形成免疫抑制性TME,使癌细胞能够逃避免疫系统的监视,进而促进肿瘤生长、侵袭、转移、ECM重塑甚至产生耐药性。本文就靶向CAF在PDAC免疫治疗中的应用研究进展进行综述,重点阐述了通过消耗CAF、抑制CAF分泌效应分子、重编程CAF、限制CAF诱导的ECM重塑等方式,促使TME由免疫抑制状态转变为免疫激活状态的研究策略,期望产生更加有效的治疗效果,从而为PDAC的免疫治疗提供新策略。

不同乳腺癌细胞株胞外囊泡特性和差异miRNA自噬通路靶基因分析

目的 研究不同乳腺癌细胞株EVs特性和所含miRNA的数量和功能差异。方法 采用无血清培养基对正常乳腺上皮细胞HMEC和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7进行培养,通过纳米粒径分析对胞外囊泡颗粒大小和含量分布,利用投射电镜观察胞外囊泡形态,采用Western bolt检测胞外囊泡膜蛋白标记物CD63。通过转录组测序对胞外囊泡中miRNA进行差异分析,利用GO和KEGG分析差异miRNA靶基因。结果 通过多峰粒径分析显示,HMEC与MDA-MB-231、MCF-7胞外囊泡粒径分布、含量有所不同。三株细胞均可检测到具有典型特征胞外囊泡和标记物CD63的表达。HMEC、MCF-7、MDA-MB-231胞外囊泡中共有已知miRNA分别为613、333、698个。以HMEC为对照,进行差异比较分析发现,MCF-7的胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为108个和86个,MDA-MB-231的胞外囊泡中显著上调和下调的miRNA分别为135个和246个。GO和KEGG富集分析发现差异miRNA的靶基因涉及多种生物学功能,尤其细胞自噬。结论 不同乳腺癌细胞株胞外囊泡从直径、数量分布、所含miRNA都与正常乳腺上皮细胞存在差异,不同乳腺癌细胞株之间也存在差异。乳腺癌细胞株胞外囊泡的差异miRNA可能对其自身或作用的靶细胞的自噬水平产生不同影响,其机制有待进一步研究揭示。