中华田园犬DEA1.1血型鉴定及血型调查

由于DEA1.1血型是临床上犬最常见和最具免疫原性的血型,因此发达国家很重视DEA1.1血型的调查研究,但鲜有中国本土犬血型调查研究的报道.该研究通过血型鉴定卡法和抗体法调查了236条中华田园犬的血型,发现54.2%中华田园犬的血型为DEA1.1^+(128/236),45.8%的犬血型为DEA1.1^-(108/236).相对于雄性(48.1%),雌性中华田园犬DEA1.1的阳性率较高,达到了67.1%.研究结果表明,由于DEA1.1血型在输血中的重要意义和其在中华田园雄性犬中较低的出现率,建议可将雄性纯种中华田园犬作为紧急献血犬;在给其他犬种输血之前需要进行DEA1.1血型鉴定.

犬血型DEA1.1抗原生化特性的研究

为了研究犬血型DEA1.1抗原生化特性,为犬输血前血型检测提供理论依据,试验采用凝聚胺介质试剂调查356只不同地区及品种犬的DEA1.1血型频率分布,用考马斯亮蓝法检测DEA1.1红细胞膜蛋白并通过免疫沉淀鉴定血型蛋白大小,观察多种酶处理对DEA1.1抗原性的影响,通过ABO血型检测试剂和ABO型微柱凝胶检测卡检测人类红细胞ABO血型与犬DEA1.1血型有无交叉反应。结果表明:不同品种犬的血型频率差异较大,DEA1.1血型为50 ku和200 ku膜蛋白;DEA1.1抗原在无花果酶、木瓜酶、链霉蛋白酶处理后抗原性增强,在菠萝酶、糜蛋白酶和胰蛋白酶处理后抗原性未增强;DEA1.1阴、阳性红细胞与ABO血型试剂均未发生凝集。说明为降低输血反应,最好采用DEA1.1血型频率低的犬种作为供血犬,并建议输血前采用木瓜酶介质交叉配血试验进行血型检测。

犬DEA1.1血型抗原保存的研究

本试验采用甘油化冻存红细胞及醛化固定红细胞的方法探索适合犬DEA1.1血型抗原保存方法,用3%、6%、10%、20%、30%和40%(w/v)浓度的甘油溶液保存犬DEA1.1血型红细胞,分快速冻存、程序降温两组处理,并对甘油化红细胞进行溶血情况、回收率、物理性状、保存期及抗原效价的测定;用0.25%、0.5%戊二醛,1.5%、3%甲醛和0.5%、1%多聚甲醛分别固定犬DEA1.1血型红细胞,检测犬红细胞醛化稳定性,以及醛化红细胞与新鲜红细胞DEA1.1血型抗原效价符合率。结果显示,30%浓度甘油程序降温组去甘油化后红细胞溶血率、细胞破损率最低,回收率最高且物理性状新鲜红细胞相似,抗原性与新鲜红细胞符合率可达93%,保存期可达12个月;用戊二醛醛化固定120 d的红细胞稳定性及犬DEA1.1抗原的敏感性不变,抗原滴度与新鲜红细胞的符合率可达到100%。表明30%浓度甘油的程序降温冻存与0.25%～0.5%戊二醛醛化固定都能较好保存犬DEA1.1抗原性。

犬DEA1.1血型抗体间接ELISA检测方法的建立

为探求减少宠物临床中犬因血型错配发生的输血反应,本试验以DEA1.1阳性红细胞膜作为抗原建立能检测DEA1.1抗体的间接ELISA方法。试验以犬DEA1.1血型为主要研究对象,提取犬红细胞膜,以DEA1.1阳性红细胞膜作为抗原,用醛化技术包被抗原,优化间接ELISA反应条件。结果显示,最佳固定剂为浓度0.0625%和0.125%的戊二醛,最佳抗原包被量为4~8μg/孔,最佳封闭液为5%的脱脂奶粉,最佳温度为37℃,最适反应时间为90 min。与间接抗球蛋白试验相比,优化后的间接ELISA法有更高的灵敏性,本试验建立的间接ELISA方法可以对犬DEA1.1血型抗体进行高通量检测。

犬DEA1.1血型抗体间接Dot-ELISA检测方法建立

为了建立一个更为简单和敏感的方法,以作为不使用试剂红细胞检测犬DEA1.1血型抗体的替代方法,从犬DEA1.1阳性红细胞中分离出细胞膜。将携带DEA1.1阳性抗原的膜置于硝酸纤维素膜上,加入初级抗体和辣根过氧化物酶标记的二级抗体,采用TMB显色试剂盒检测。对照试验采用凝聚胺抗球蛋白试验检测DEA1.1抗体。用DEA1.1阳性和阴性血型抗原检测Dot-ELISA的灵敏度、稳定性和特异性。用158只犬的血清样本检测Dot-ELISA的准确性。结果显示,Dot-ELISA方法比凝聚胺抗球蛋白试验灵敏8倍以上。即使细胞膜反复冻融20次,其抗原稳定性也不受影响,并且可在-20℃时长期稳定保存。在对158只犬血清检测的过程中,该方法展现了与凝聚胺抗球蛋白试验较高的相关性。表明本研究成功建立了犬DEA1.1血型抗体Dot-ELISA检测方法,并且方法稳定、灵敏、无需试剂红细胞,可以作为输血前传统抗体检测的一种有效替代方法。

辽宁省区域碳排放-经济发展-环境保护耦合协调分析

基于三阶段DEA模型测算2004～2015年辽宁省14市的碳排放效率,将碳排放效率分解成技术效率、纯技术效率和规模效率,并将3种效率作为碳排放系统的评价指标,继而构建区域碳排放-经济发展-环境保护（3E系统）耦合协调评价体系。结果显示：辽宁省三大系统耦合协调度处于较低水平,空间上呈＂递进式＂进步规律,表现为沈阳、大连领先;鞍山、抚顺、丹东、锦州、营口、辽阳、盘锦、阜新、铁岭、葫芦岛处于中等水平;本溪、朝阳最低的空间分布规律。最后通过灰色GM（1.1）预测模型得到2016～2020年辽宁省3E系统耦合协调度有所提升。研究发现,将碳排放效率作为碳排放系统的评价指标适用于三元系统耦合协调研究,结果与辽宁省实际情况相符。

犬血型系统研究进展

输血疗法在兽医临床的使用范围和数量不断扩大,已经发展成为一种抢救重症犬和治疗病犬的重要手段。输血疗法可以迅速补充患病犬的循环血量和体液量,维持血压,起到补血、止血、解毒、提高机体耐受力的作用。犬输血疗法在提供生命保障的同时,也会带来危险与伤害,异体输血时,血型不符可能产生输血反应,严重时可以致死患犬。论文主要对犬血型的发现历程和命名、不同血型之间的差异和生化特性以及各种犬血型输血时可能出现的反应进行综述,探讨临床上如何对犬进行安全、有效输血以及当前存在问题,最后对DEA1.1血型频率研究现状以及犬血型检测方法进行介绍。

犬红细胞抗原1.1血型多克隆抗体的制备与鉴定

为了制备犬红细胞抗原1.1(DEA1.1)血型多克隆抗血清,用犬血型快速检测卡分别鉴定DEA1.1阳性犬和DEA1.1阴性犬,用DEA1.1阳性犬完整红细胞免疫DEA1.1阴性犬。多次免疫后采集阴性犬血清,用抗球蛋白血凝试验验证多抗血清的符合率。结果显示,制备的多抗血清与商品化的多抗血清符合率为98%。抗球蛋白试验检测抗体血凝效价为211。试验表明,制备的犬血型DEA1.1多克隆抗体能达到血型鉴定的要求,能满足国内犬临床输血中DEA1.1血型检测的要求。