新精神活性物质药理作用研究进展

新精神活性物质是近几年开始流行的新型滥用物质,比起传统毒品来说其种类更丰富、化学结构更复杂。新精神活性物质按照药理学作用可分为七大类,除了效果未知的类别,其余的兴奋剂类、合成大麻素受体激动剂类、经典致幻剂类、合成阿片类、身心分离剂类和镇静催眠类都可通过与特异性受体结合从而发挥作用。该文对新精神活性物质的药理作用及其机制进行综述,以期为新精神活性物质的研究提供参考。

激活CB_(2)受体对MPP+诱导BV2小胶质细胞iNOS和Arg-1表达的影响

目的探讨激活大麻素Ⅱ型受体(CB_(2)受体)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理的BV2小胶质细胞M1/M2表型转化的影响。方法培养BV2小胶质细胞,将其分为对照组、MPP+组、JWH133(CB_(2)受体激动剂)+MPP+组、AM630(CB_(2)受体抑制剂)+MPP+组、JWH133+AM630+MPP+组。应用免疫印迹法检测各组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的表达。结果与对照组相比,MPP+组BV2小胶质细胞iNOS蛋白表达明显上升(F=9.825,q=6.346,P<0.01);JWH133预处理抑制MPP+诱导的iNOS蛋白的上调(q=5.714,P<0.01),此抑制作用可被AM630逆转(q=4.154,P<0.05)。与MPP+组相比,JWH133预处理显著上调Arg-1蛋白表达水平(F=5.800,q=5.520,P<0.01),此作用可被AM630所阻断(q=4.155,P<0.05)。结论激活CB 2受体可抑制MPP+处理的BV2小胶质细胞M1极化,并且促进BV2小胶质细胞从M1型转化为M2型。

吲哚类大麻素受体选择性激动剂共同特征药效团模型的研究

大麻素受体与疼痛、炎症、骨质疏松等多种疾病紧密相关,是极具潜力的药物靶点。本研究分别选取吲哚类CB2选择性激动剂和CB1选择性激动剂为研究对象,采用Discovery studio 2019软件分别构建两种激动剂共同特征药效团模型,首次对这两种药效团模型进行比较分析。随后通过测试集和ROC曲线两种验证方法对CB2选择性激动剂药效团模型的可靠性进行验证和筛选,得到一个最佳模型,该模型可用于天然化合物数据库的筛选,为发现新型CB2选择性激动剂提供理论基础。

内生大麻素受体激动剂抑制异动症大鼠纹状体单胺类神经递质的释放

目的观察内生大麻素受体激动剂WIN 55,212-2对帕金森病左旋多巴相关异动症模型大鼠纹状体内单胺类神经递质释放的影响。方法采用脑内微透析和高效液相色谱在线递质测量法观察WIN 55,212-2腹腔内注射对异动症模型大鼠左旋多巴相关异动症状和纹状体内单胺类神经递质释放的影响。结果与溶剂注射相比,WIN 55,212-2注射显著抑制异动症模型大鼠左旋多巴皮下注射后的异动样症状(F1 263=44.071,P<0.001),同时明显减少纹状体内多巴胺的释放(F1 263=5.091,P<0.05)。结论纹状体内生大麻素受体可能通过抑制性的调节单胺类神经递质的释放来影响异动症模型大鼠的异动样症状。

大麻素受体1对肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响

目的:探讨大麻素受体1(CB1受体)对肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响。方法:32只雄性SD大鼠给予高脂鼠饲料喂养8周,制作肥胖大鼠模型。以给予普通鼠饲料喂养的6只大鼠作为正常组。将肥胖大鼠随机分为4组,S(模型组)、AW、W、A组,每组大鼠8只。正常组、模型组腹腔内注射等量生理盐水,W、A、AW组分别腹腔内注射CB1受体激动剂WIN55212-2、CB1受体抑制剂AM251、AM251+WIN55212-2;1次/d。2周后,测定大鼠血胰岛素、胰岛素原、C-肽水平,计算胰岛素原/C-肽、胰岛素原/胰岛素;进行高葡萄糖钳夹实验,计算相关参数,包括第1、2时相胰岛素分泌量(1PH和2PH)、胰岛素最大分泌量(MIS)及稳态葡萄糖输注率(GIR60-90)。结果:注药2周后,与正常组比较,模型组血胰岛素、胰岛素原、C-肽、胰岛素原/C-肽、胰岛素原/胰岛素及2PH、MIS水平升高,1PH及GIR60-90水平下降(P<0.05)。W组上述指标变化方向与模型组相同,但变化幅度大于模型组(P<0.05);A组上述指标变化方向与模型组相反,各指标水平与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05);AW组上述指标水平与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CB1受体激动可加重肥胖大鼠胰岛素抵抗,抑制CB1受体可逆转此效应。

WIN55,212-2对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨大麻素（CB）受体激动剂WIN55，212-2对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法：采用大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）致局灶性脑缺血模型。将50只雄性SD大鼠随机分为5组：对照组（Con组）于MCAO前30min腹腔注射生理盐水0．3ml；WIN55，212-2组（WIN1～3组）于MCAO前30min腹腔注射WIN55，212-20．3，1和3mg／kg；DMSO组于MCAO前30min腹腔注射二甲基亚砜（DMSO）0．3ml。观察MCAO120 min再灌注24h后神经功能评分（NFS）和脑梗死容积百分比。结果：与DMSO组和Con组比较，WIN55，212-2组大鼠NFS明显升高（P〈0．05），脑梗死容积百分比明显减小（P〈0．05）。结论：CB受体激动剂WIN55，212-2对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，并具有一定的剂量相关性。

JWH133对MPP^(+)诱导SH-SY5Y细胞铁水平和DMT1表达影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2R)激活对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用机制。方法培养SH-SY5Y细胞,根据药物处理不同将其分为对照组、MPP+组、CB2R激动剂JWH133+MPP+组、CB2R抑制剂AM630+JWH133+MPP+组。应用激光扫描共聚焦显微镜分析技术检测SH-SY5Y细胞铁水平变化,应用免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞二价金属离子转运蛋白1(DMT1)的表达。结果与对照组相比,MPP+组细胞荧光强度明显降低,差异有显著性(F=26.620,q=10.410,P<0.05);用JWH133预处理后,JWH133+MPP+组细胞荧光淬灭程度低于MPP+组,差异有显著性(q=4.868,P<0.05);而且应用AM630可以逆转JWH133的这种作用,AM630+JWH133+MPP+组和JWH133+MPP+组荧光强度相比差异具有显著性(q=5.619,P<0.05)。与对照组相比,MPP+组细胞的DMT1蛋白表达量显著升高(F=9.493,q=4.109,P<0.05);JWH133+MPP+组细胞DMT1蛋白表达量下降,与MPP+组相比差异具有显著性(q=4.771,P<0.05);而AM630可阻断JWH133的作用,AM630+JWH133+MPP+组细胞DMT1蛋白表达量较JWH133+MPP+组显著升高(q=6.240,P<0.05)。结论激活CB2R可以抑制MPP+对DMT1蛋白表达的诱导从而调节SH-SY5Y细胞铁水平降低。

大麻碱受体激动剂WIN55212-2与依西美坦协同抗肿瘤作用的发现

目的发现与大麻碱受体激动剂甲磺酸西地那非(WIN55212-2)具有协同抗肿瘤活性的药物,为提高肿瘤患者生活质量提供潜在的药物联合策略。方法采用肿瘤细胞增殖和活力检测的高通量测试方法,在3个大麻碱受体1(CB1R)高表达组织的肿瘤细胞系HepG2、DU145和HCT-8,筛查CB1R受体激动剂WIN55212-2分别与25种抗肿瘤药物联合使用时的抗肿瘤活性,对于初步显示有协同的药物联合再通过集落形成实验、3D肿瘤球增殖抑制试验进行确证。在此基础上,采用流式细胞仪检测协同有效的药物联合对细胞凋亡和周期分布的影响。结果发现3种药物在与WIN55212-2组合使用时显示有一定的协同抗肿瘤活性,其中依美西坦(exemestane)与WIN55212-2联合协同效果最佳,并在集落形成和3D肿瘤球增殖抑制试验中表现出浓度依赖性的协同抗肿瘤活性(联合指数CI<1)。与exemestane单用相比,exemestane与WIN55212-2联用显著增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01),并引起HepG2细胞发生G2/M期阻滞。结论本研究首次发现将exemestane与WIN55212-2联用在HepG2细胞上具有协同抗肿瘤活性,这可能与其促进细胞凋亡和诱导细胞周期阻滞有关。

JWH133对MPP^+诱导的原代星形胶质细胞COX-2和iNOS表达的影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2受体)激活对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导原代星形胶质细胞炎症反应的影响。方法培养原代星形胶质细胞,生长状态良好时将其分为Control组、MPP+组、JWH133(CB2受体激动剂)+MPP+组、AM630(CB2受体抑制剂)+JWH133+MPP+组。应用免疫印迹法(Western Blot)检测Control组和MPP+组细胞CB2受体蛋白的表达。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组环氧化酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达。结果与Control组相比,MPP+组的CB2受体蛋白表达上升(F=29.78,P<0.01)。与Control组比较,MPP+组COX-2和iNOS基因的表达明显上调(F=22.59、11.27,q=10.13、5.57,P<0.01);JWH133预处理抑制MPP+诱导的COX-2和iNOS基因表达的上调(q=6.26、4.16,P<0.05);此抑制作用可被AM630所阻断(q=5.34、5.67,P<0.01)。结论激活CB2受体可抑制MPP+诱导的原代星形胶质细胞炎症反应。

CB2受体激活对MPP^+致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的研究大麻素Ⅱ型(CB2)受体激活对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP +)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法 根据药物处理的不同将细胞分为正常对照组(C组)、MPP +组(M组)、JWH-133/MPP +组(J+M组)以及JWH-133/AM630/MPP +组(J+A+M组)。用免疫印迹法检测各组细胞CB2受体和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化。结果 与C组相比,M组的CB2受体蛋白表达下降( P <0.01);经JWH-133预处理后,CB2受体蛋白表达高于M组( P <0.01),此作用可被AM630所阻断;与C组相比,M组的TH表达降低( P <0.05),经JWH-133预处理后,TH表达高于M组( P <0.05),AM630预处理可抑制此作用;与C组相比,M组细胞的ΔΨm明显下降( P <0.01),经JWH-133预处理后,细胞ΔΨm下降幅度变小( P <0.01),此作用可被AM630所阻断。结论 CB2受体激活可以抑制MPP +对SH-SY5Y细胞的损伤作用。

大麻素受体2激动剂AM1241抑制大鼠脊髓损伤后纤维瘢痕形成

目的探讨AM1241对大鼠脊髓损伤后纤维瘢痕形成的作用及其机制。方法选取雌性6~8周龄Sprague-Dawley大鼠144只,分为4组:①假手术组(n=24)只移除椎板以暴露硬脊膜,不切开硬脊膜,术后给予生理盐水3 mL/kg;②载体组(n=40)建立大鼠脊髓背侧半切损伤模型,术后给予生理盐水3 mL/kg;③AM1241组(n=40)在载体组基础上给予大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CBR2)激动剂(AM1241,3 mg/kg)治疗;④AM1241+AM630组(n=40)在术后AM1241治疗前30 min给予CBR2拮抗剂(AM630,3 mg/kg)。各组药物均腹腔注射,1次/d,连续14 d。采用免疫荧光染色、Western blot、ELISA等方法评估AM1241对大鼠纤维瘢痕形成的抑制作用,同时采用行为学、电生理检测AM1241对大鼠神经功能的影响。结果与载体组比较,AM1241组大鼠脊髓损伤后,主要纤维瘢痕成分的表达降低,脊髓损伤后,纤维瘢痕面积减少,给予CBR2拮抗剂AM630后逆转了上述现象,差异均有统计学意义(P<0.05)。tubulinβⅢ免疫荧光染色、行为学评估、电生理实验结果显示:AM1241组促进了脊髓神经元细胞的存活,改善了脊髓损伤后的神经功能,包括Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分[载体组(15.38±0.38)vs AM1241组(18.38±0.50)vs AM1241+AM630组(15.50±0.33),P<0.05]、斜板实验角度[载体组(54.25±1.25)°vs AM1241组(64.25±1.05)°vs AM1241+AM630组(54.75±0.49)°,P<0.05]等;ELISA实验结果显示:AM1241组抑制M1型巨噬细胞标记物iNOS、TNF-α、IL-1β的表达(P<0.05),增强M2型巨噬细胞标记物CD206、Arg-1的表达(P<0.05),降低促纤维化因子TGF-β1的表达(P<0.01);而应用CBR2拮抗剂AM630后逆转了上述作用。结论刺激大鼠CBR2能减少脊髓损伤后纤维瘢痕、改善神经功能,这一作用可能是通过影响巨噬细胞极化来实现的。

覆盆子化学成分的分离鉴定及其新型大麻素2型受体激动剂的筛选和抗骨质疏松作用评价

目的 以大麻素2型受体(cannabinoid receptor type 2,CB2R)为靶点,从补肾中药覆盆子中分离、鉴定、筛选得到具有激动CB2R的激动剂,并探讨其抗骨质疏松作用的机制。方法 以激动CB2R活性为导向进行分离并筛选,采用正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、大孔树脂、重结晶和半制备型高效液相色谱对二氯甲烷层和醋酸乙酯层浸膏进行分离,结合化合物理化性质和核磁共振波谱对分离得到的化合物进行结构鉴定。通过双荧光素酶方法筛选出具有可特异性激动CB2R的化合物,并通过测定转染CB2R的人胚胎肾细胞HEK293-CB2内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)积聚水平和CB2R蛋白表达情况来验证筛选的化合物对CB2R的特异性激动活性,最后评价筛选得到的化合物对破骨细胞骨代谢方面的调节作用。结果 以激动CB2R为活性导向进行分离和筛选,共得到24个化合物,分别鉴定为山柰酚(1)、木犀草苷(2)、银椴苷(3)、金丝桃苷(4)、橙皮素(5)、刺芒柄花素(6)、槲皮素(7)、对羟基苯甲酸(8)、迷迭香酸(9)、对羟基苯甲酸乙酯(10)、水杨酸(11)、没食子酸(12)、咖啡酸(13)、原儿茶酸(14)、鞣花酸(15)、香草酸(16)、loliolide(17)、对羟基苯甲酸甲酯(18)、ethyl dioxindole-3-acetate(19)、苦莓苷F1(20)、科罗索酸(21)、委陵菜酸(22)、山楂酸(23)、野鸦椿酸(24)。双荧光素酶筛选体系从24个化合物中筛选得到2个新的CB2R激动剂(化合物5和8)。c AMP和蛋白免疫印迹表明筛选得到化合物5和8对CB2R具有特异性激动活性和较好的亲和力,可显著抑制破骨细胞的活性并影响其骨吸收功能。结论 化合物2、5、6、9、13、14、17、19为首次从中药覆盆子中分离得到。2个新的CB2R激动剂(化合物5和8)能特异性地激动CB2R并增加CB2R蛋白的表达,抑制给药刺激后HEK293-CB2细胞内c AMP的积累;以CB2R依赖性对破骨细胞功能的正常发挥产生影响。

建立大麻素1型受体激动剂的细胞筛选模型

大麻素受体是中枢神经系统表达丰富的G蛋白偶联受体,也是治疗炎症、疼痛及药物滥用潜在的药物靶点。大麻素受体主要包括大麻素1型受体(cannabinoid type 1 receptor, CB1R)、大麻素2型受体(cannabinoid type 2receptor, CB2R)及其他受体。CB1R在调节中枢记忆、认知和运动等方面发挥关键作用,因此筛选具有激动CB1R活性的化合物具有治疗神经系统疾病的潜在价值。本研究使用的载体质粒将CB1R胞内第三环(intracellular loop3, ICL3)基因序列置换为环状绿色荧光蛋白(circular-permutated enhanced green fluorescent protein, cpEGFP)。慢病毒包装后感染HEK 293T细胞,经嘌呤霉素筛选获得高表达CB1R-cpEGFP的稳定细胞株。当激动剂与CB1R结合后,膜受体构象发生改变,膜受体内cpEGFP的发色团去质子化产生绿色荧光,通过检测荧光强度评价激动CB1R的活性物质。本研究利用CB1R激动剂花生四烯酸-2′-氯乙酰胺(arachidonyl-2′-chloroethylamide, ACEA)作为阳性对照评价模型的可靠性。研究发现, ACEA可激活细胞模型受体,表现为荧光强度增加,这种效应能够被CB1R特异性拮抗剂利莫那班(rimonabant)阻断,导致荧光消失。本研究利用荧光探针成功构建CB1R激动剂细胞筛选模型。

大麻素受体激动剂预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨大麻素（CB）受体激动剂WIN55，212-2预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）致局灶性脑缺血模型，将50只雄性SD大鼠随机分为5组：对照组（Con组），行线栓法致大脑中动脉栓塞（MCAO）前24h腹腔注射生理盐水（NS）0．3ml；WIN55，212-2预处理组（WIN1～3），分别于MCAO前24h腹腔注射WIN55，212-20．3，1和3mg／kg；DMSO组，于MCAO前24h腹腔注射二甲基亚砜（DMSO，WIN55，212．2的溶剂）0．3ml。观察MCA0120min再灌注24，48和72h后神经功能评分（NFS）和再灌注72h脑梗死容积百分比。结果WIN55，212-2预处理组大鼠NFS明显高于DMSO组和Con组（P〈0．05），脑梗死容积百分比明显小于DMSO组和Con组（P〈0．05）。WIN2组和WIN3组的脑梗死容积百分比明显小于WIN1组，NFS明显高于WIN1组（P〈0．05），WIN2组和WIN3组的NFS和脑梗死容积百分比差异无统计学意义（P=0．928），但3mg／kgWIN55，212-2可引起大鼠明显嗜睡和倦怠。结论CB受体激动剂WIN55，212—2预处理能诱导脑缺血耐受，对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，并具有一定的剂量相关性。

大麻素2型受体激动剂JWH133调节小鼠胰腺腺泡细胞钙信号及治疗急性胰腺炎的机制

目的观察JWH133对乙酰胆碱(ACh)引起的Ca^2+振荡的影响,探讨其作用机制及靶点。方法酶解法分离小鼠胰腺腺泡细胞,利用膜片钳全细胞记录,通过细胞外给药方式,在分离的胰腺腺泡细胞上观察10μmol/L JWH133对10 nmol/L ACh引起Ca^2+振荡的影响,检测JWH133的药理学作用。记录10μmol/L JWH133对10 mmol/L左旋精氨酸(L-Arg)引起的Ca^2+振荡增强作用的影响。通过L-Arg诱发小鼠急性胰腺炎模型,观察并测量胰腺组织结构,细胞形态及出血坏死情况。结果JWH133作用的靶点为细胞表面的大麻素2型受体(CB2R)。10μmol/L的JWH133能将10 nmol/L ACh引起Ca^2+振荡的标准化净电流减少到(26.0±4.2)%(P<0.01,n=9)。在CB2R敲除(CB2R-KO)小鼠,与给药前比较,施加10μmol/L的JWH133后,ACh引起Ca^2+振荡的净电流(标准化后)为(97.0±6.7)%(P>0.05,n=9)。应用10μmol/L的JWH133则可将10 mmol/L L-Arg引起增强的Ca^2+振荡的标准化静电流减少至(106.0±16.7)%(P<0.01,n=10)。此外,病理切片显示JWH133预处理的胰腺组织在水肿、炎症和坏死水平均有所改善,病理学评分差异有统计学意义(P<0.05,n=5)。结论JWH133是通过特异性抑制细胞外的CB2R来抑制细胞内Ca2+信号。JWH133对L-Arg诱发的小鼠急性胰腺炎模型的病理有改善作用。

大麻类物质体内代谢毒理及检测研究进展

大麻是国际管制的麻醉药品,因其价廉且摄取方便而长期在世界范围内被广泛使用。近年来,作为大麻的替代品,各种新型合成大麻素以"香料"的形式不断涌现并被非法使用。摄入大麻类物质后,使用者的短期记忆、感觉敏感性以及运动神经协调性等都会受到损伤,因此,生物检材中大麻类物质的检测及结果评判十分重要。本文主要围绕大麻及合成大麻素等大麻类物质的药理毒理特点、体内代谢、原体及代谢产物的检测方法等方面的研究进行综述。

大麻素CB2受体激动剂AM1241对肝星状细胞影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2)激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)影响及其机制。方法将HSC-T6细胞随机分为对照组、氧化应激组及20、80μmol/L AM1241干预组;对照组正常培养,氧化应激组用含100 m U/L葡萄糖氧化酶(GO)完全培养液培养2 h;AM1241干预组分别加入20、80μmol/L的AM1241干预3 h后,再加入100 m U/L GO干预2 h;细胞免疫化学染色法检测HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;酶联免疫法检测HSC-T6细胞培养液上清中I型胶原(Col I);硫代巴比妥酸法检测丙二醛含量;氮蓝四唑法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western blot检测HSC-T6细胞核转录相关因子(Nrf2)总蛋白与核蛋白含量。结果与对照组比较,氧化应激组HSC-T6细胞胞浆中α-SMA、Col I表达量均增多(P<0.05);与氧化应激组比较,AM1241干预组HSC-T6细胞胞浆中α-SM A、Col I表达量均减少(P<0.05);与对照组比较,氧化应激组HSC-T6细胞中丙二醛含量上升,SOD活性下降(P<0.05);与氧化应激组比较,AM1241干预组HSC-T6细胞丙二醛含量下降,SOD活性上升(P<0.05);对照组、氧化应激组及20、80μmol/L AM1241干预组HSC-T6细胞中Nrf2总蛋白表达量分别为(0.62±0.021)、(0.60±0.015)、(0.59±0.020)、(0.61±0.032),各组差异无统计学意义(P>0.05);与氧化应激组比较,AM1241干预组Nrf2核蛋白表达量均增加(P<0.05)。结论大麻素CB2受体激动剂AM1241可抑制氧化应激作用下HSC-T6细胞活化,其机制可能与AM1241促进HSC-T6细胞中Nrf2发生核内转移,增加抗氧化作用有关。

熟地黄的大麻素2型受体激动剂活性及对骨代谢的调控作用研究

目的 探究熟地黄的大麻素2型受体(cannabinoid receptor 2,CB2R)激动活性及其对骨代谢的调控作用。方法采用双荧光素酶报告基因建立CB2R调节剂筛选体系;分别给予熟地黄提取物或CB2R选择性激动剂HU308或CB2R反向激动剂AM630处理,采用CCK-8法测定成骨细胞和破骨细胞的增殖活性;采用磷酸苯二钠法测定成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)的活性;采用流式细胞仪测定成骨细胞的细胞周期;采用ALP染色观察成骨细胞分化;采用茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成;采用TRAP染色观察破骨细胞数目;采用罗丹明-鬼笔环肽染色镜观察破骨细胞F-肌动蛋白(F-actin)环的结构和形态;采用Western blotting检测CB2R及骨代谢相关蛋白的表达。结果 500μg/mL熟地黄显著升高HEK293-CB2R细胞CB2R表达(P<0.001),抑制forskolin刺激的HEK293-CB2R细胞中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)的产生,并且其对CB2R的激动活性可被AM630逆转(P<0.001)。500μg/mL熟地黄显著促进成骨细胞增殖(P<0.001),升高ALP活性(P<0.001),促进骨矿化结节形成,上调CB2R及骨形成相关蛋白的表达(P<0.05、0.01、0.001),抑制p38的表达(P<0.05);抑制破骨细胞形成分化,降低TRAP活性(P<0.001),抑制F-actin环的形成,下调CB2R、p-p38和骨吸收相关蛋白的表达(P<0.05、0.001);熟地黄对成骨细胞和破骨细胞的作用可被AM630逆转(P<0.05、0.01、0.001)。结论 熟地黄具有特异性的CB2R激动活性,并可通过CB2R调控成骨细胞和破骨细胞的功能。

MJ15对大麻素Ⅰ型受体的阻滞及反相激动作用的研究

目的:观察MJ15对大麻素Ⅰ型(cannabinoid receptorsⅠ,CB1)受体的阻滞及反相激动作用。方法:制备小鼠输精管和豚鼠回肠平滑肌的离体标本,观察CB1受体激动剂WIN55212-2以及阻滞剂利莫那班(SR141716A)和MJ15对其收缩特性的影响。结果:CB1受体激动剂WIN55212-2(10-10～10-6 mol.L-1)可抑制电刺激所引起小鼠输精管的收缩作用,呈现明显的剂量依赖性,而SR141716A和MJ15(10-7 mol.L-1)能阻滞WIN55212-2的抑制作用;CB1受体激动剂WIN55212-2可抑制豚鼠回肠和小鼠输精管平滑肌的收缩,而SR141716A和MJ15能促进豚鼠回肠和小鼠输精管平滑肌的收缩。结论:MJ15是CB1受体的阻滞剂,同时具有反相激动作用。

大麻素Ⅱ型受体激动剂对A375细胞增殖的影响

目的观察大麻素Ⅱ型受体激动剂JWH-133和WIN55,212-2对A375细胞增殖的抑制作用。方法以人恶性黑素瘤A375细胞和人永生化角质形成细胞株HaCat为体外实验模型,RT-PCR检测CB-R2在A375细胞中mRNA水平的表达;不同剂量大麻素Ⅱ型受体激动剂JWH-133和WIN55,212-2处理组。MTT法测定大麻素Ⅱ型受体激动剂JWH-133和WIN55,212-2对A375细胞增殖的影响。结果 1人恶性黑素瘤A375细胞和人永生化角质形成细胞株HaCat在mRNA水平均表达CB-R2;2不同浓度(0.01,0.1,1,10,100μmol/L)大麻素Ⅱ型受体激动剂JWH-133和WIN55,212-2抑制A375细胞增殖,抑制作用48h达高峰;3比较大麻素Ⅱ型受体激动剂JWH-133和WIN55,212-2两种药物对A375细胞增殖的抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论 1A375细胞在mRNA水平表达CB-R2;2JWH-133和WIN55,212-2抑制A375细胞增殖。