中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡的机制

目的通过检测内皮细胞Bcl-2和caspase3的表达水平,探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法采用血管内消化法原代培养牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)。实验分为不同浓度的CCVAF组(1.25,2.5,5,10 mg/L)和对照组(等体积的培养基)。采用流式细胞仪检测CCVAF作用24 h后各组BAVEC的Bcl-2表达水平;采用比色法测定caspase3的活性。结果经CCVAF作用后,流式细胞仪测定各组均未见到有阳性峰出现在M1,抗凋亡蛋白Bcl-2表达并没有受到药物的影响。而与对照组相比,capase3活性在1.25mg/L组即出现升高,此后随浓度的增加而升高,呈剂量依赖性(r=0.929,P<0.05)。各浓度组加入capase3活性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)后,capase3活性明显降低,但仍然高于对照组(P<0.05)。结论 CCVAF不影响内皮细胞Bcl-2的表达,而能够上调capase3的活性。其可能不经Bcl-2影响的线粒体所在的凋亡通路调节细胞的凋亡。

清肺化痰颗粒对慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠的保护作用

目的基于NLRP3/capase1通路探讨清肺化痰颗粒对慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠的保护作用。方法将SD大鼠60只随机分组为假手术组、模型组、清肺化痰颗粒(1 g/kg)组、VX-765组(NLRP3炎性小体抑制剂,剂量:50 mg/kg)、清肺化痰颗粒+VX-765组(剂量分别为1 g/kg,50 mg/kg),建立慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠模型,药物处理7 d后,以全身体积描记法检测大鼠肺功能,指标包括呼吸频率(f)、潮气量(VT)、每分通气量(MV)、呼气峰流值(PEF)、吸气阻力(Ri);然后处死大鼠,采用苏木精-伊红(HE)染色检测5组大鼠肺组织病理变化,进行Holfbauer评分;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测5组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)水平,采用实时荧光定量(qRT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测5组大鼠肺组织中NLRP3、caspase-1表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠出现气管黏膜水肿充血、肺泡结构破坏,融合面积扩大、炎性细胞浸润等肺损伤症状,VT、Ri、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、NLRP3及caspase-1表达显著升高(P<0.05),f、MV、PEF显著降低(P<0.05);与模型组比较,清肺化痰颗粒组、VX-765组、清肺化痰颗粒+VX-765组大鼠病理损伤症状减轻,VT、Ri、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、NLRP3及caspase-1表达均降低(P<0.05),f、MV、PEF均升高(P<0.05);与清肺化痰颗粒组及VX-765组比较,清肺化痰颗粒+VX-765组大鼠病理损伤症状进一步减轻,VT、Ri、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、NLRP3及caspase-1表达均降低(P<0.05),f、MV、PEF均升高(P<0.05)。结论清肺化痰颗粒可以保护慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠的肺组织,可能通过下调NLRP3/Capase1通路实现。

重组人程序化细胞死亡5蛋白联合顺铂对前列腺癌细胞生长作用的研究

目的探讨重组人程序化细胞死亡5(rhPDCD5)联合顺铂(DDP)对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法不同浓度rhPDCD5蛋白、DDP及两者联合干预PC3细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Cleaved-capase3、Bcl-xl蛋白的表达水平。结果与对照组相比,rhPDCD5、顺铂单独或联合作用PC3细胞均可抑制细胞增殖,联合用药抑制效果更显著(P<0.05);rhPDCD5组、DDP组、联合用药组PC3细胞的凋亡率分别为(19.62±2.32)%、(22.45±1.57)%、(59.78±3.31)%。rhPDCD5、顺铂联合应用较单独用药可显著增强PC3细胞凋亡(P<0.05);蛋白印迹法检测发现rhPDCD5组、DDP组、联合用药组中Cleaved-capase3表达明显上调,Bcl-xl表达显著下调,联合用药组效果更显著(P<0.05)。结论 rhPDCD5可促进PC3细胞的凋亡,且显著增强顺铂对人前列腺癌PC3的抗癌敏感性。