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Genome characterization of the Caprine arthritis-encephalitis virus in China:A retrospective genomic analysis of the earliest Chinese isolates
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作者 WANG Deng-feng YANG Xue-yun +6 位作者 WEI Yu-rong LI Jian-jun BOLATI Hongduzi MENG Xiao-xiao TUERXUN Gunuer NUERDAN Nuerbaiheti WU Jian-yong 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第3期872-880,共9页
Caprine arthritis-encephalitis virus(CAEV) is an under-studied virus infecting caprines and ovines worldwide. Over the last four decades, CAEV has spread in China, obtaining genomic data on CAEV strains circulating in... Caprine arthritis-encephalitis virus(CAEV) is an under-studied virus infecting caprines and ovines worldwide. Over the last four decades, CAEV has spread in China, obtaining genomic data on CAEV strains circulating in China is of importance for developing diagnostic methods and eradicating associated diseases. However, there is limited information on the genome, including characterizations, and the probable origin. This work aimed to characterize Chinese CAEV genomes and population structures. Five CAEV strains isolated from infected dairy goats between 1989and 1994 in Gansu, Guizhou, Shaanxi, Shandong and Sichuan provinces were cloned and sequenced. The Chinese CAEV had a 58–93% genome similarities to strains outside of China, and they belonged to subgenotype B1. The highest similarity levels(98.3–99.3%) were with two other Chinese strains, and they shared a 91.8–92.3% similarity with the strain Clements(GenBank accession no. NC_001463.1) from outside of China. The Chinese CAEV strains isolated from different provinces over five years were still highly homologous and contained unique ancestral population components,indicating that these Chinese strains had a common origin that differed from other known strains. Our results provide genomic data on circulating Chinese CAEV strains and will be useful for future epidemiological investigations and CAEV eradication programs. 展开更多
关键词 caprine arthritis-encephalitis virus GENOTYPE phylogenetic analysis population structure SIMILARITY dairy goat
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Ovine Progressive Pneumonia Virus Is Transmitted More Effectively via Aerosol Nebulization than Oral Administration
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作者 Lynn M. Herrmann-Hoesing Stephen N. White +9 位作者 Liam E. Broughton-Neiswanger Wendell C. Johnson Susan M. Noh David A. Schneider Hong Li Naomi S. Taus James Reynolds Thomas Truscott Rohana P. Dassanayake Donald P. Knowles 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2012年第3期113-119,共7页
A new method of experimental infection of ovine progressive pneumonia virus (OPPV), aerosol nebulization (Nb), was compared to intravenous (IV) and oral (PO) methods of experimental infection. Seven month old lambs we... A new method of experimental infection of ovine progressive pneumonia virus (OPPV), aerosol nebulization (Nb), was compared to intravenous (IV) and oral (PO) methods of experimental infection. Seven month old lambs were given 3.5 × 107 TCID50 of Dubois OPPV LMH19 isolate using IV, PO, or Nb methods and were monitored for infection using cELISA and OPPV quantitative (q) PCR for 35 weeks. Four out of four sheep in the IV group, six out of six sheep in the Nb group, but only two out of six sheep in the PO group became infected by OPPV;whereas the uninoculated controls (n = 2) and a sentinel control (n = 1) remained uninfected during the course of the study. The time to a cELISA or OPPV qPCR positive result in the Nb group was quicker and statistically different from the time to a cELISA or OPPV qPCR positive result in the PO group (cELISA P value = 0.0021 and OPPV qPCR P value = 0.0007). When the Nb and IV groups were compared, sheep became cELISA and OPPV qPCR positive at similar times (cELISA P value = 0.6 and OPPV qPCR P value = 0.1). In addition, sheep became OPPV qPCR positive prior to cELISA in both the IV and Nb groups (IV P value = 0.027 and Nb P value = 0.007). Aerosol nebulization is a more natural experimental method of transmitting OPPV and may be valuable for testing potential vaccines or specific host genetics. 展开更多
关键词 OVINE PROGRESSIVE PNEUMONIA virus = OPPV Visna/Maedi virus = VMV Small Ruminant Lentivirus = SRLV caprine arthritis-encephalitis virus = CAEV Transmission
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山羊副流感病毒3型的研究进展
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作者 杨胜波 莫玉兵 +3 位作者 徐景峨 李婷 潘永 杨莉 《现代畜牧科技》 2024年第6期97-99,共3页
山羊群中普遍存在山羊副流感病毒3型(CPIV3)病毒的感染,严重危害养羊业的健康发展。该文简要介绍了CPIV3的临床表现、流行病学、病原学、致病性、诊断技术、疫苗研发及防控技术等内容。研究表明,研制出安全有效的疫苗是控制山羊副流感病... 山羊群中普遍存在山羊副流感病毒3型(CPIV3)病毒的感染,严重危害养羊业的健康发展。该文简要介绍了CPIV3的临床表现、流行病学、病原学、致病性、诊断技术、疫苗研发及防控技术等内容。研究表明,研制出安全有效的疫苗是控制山羊副流感病毒3型的方法,对预防由CPIV3引起的呼吸道疾病具有重要意义。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 呼吸道疾病 诊断技术 研究进展
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IFN-α对山羊副流感病毒3型的抗病毒活性 被引量:3
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作者 孙敏 郝飞 +5 位作者 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 程子龙 刘茂军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期736-743,共8页
旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gI... 旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta(DE3),IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell,MDBK cell)后6种干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)的相对表达水平;同时,利用TCID50及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明,原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL^(-1),Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示,山羊IFN-α孵育MDBK细胞后,可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基因的转录上调。与对照组细胞相比,山羊IFN-α显著下调MDBK细胞中CPIV3的病毒滴度,Western blot结果显示,山羊IFN-α孵育显著下调CPIV3非结构蛋白C的表达水平。山羊IFN-α对CPIV3在MDBK细胞中的增殖具有显著抑制作用。本研究扩展了I型干扰素的研究范围,为CPIV3等反刍动物疫病的防控提供新的思路。 展开更多
关键词 山羊IFN-α 原核表达 ISGs 山羊副流感病毒3型 抗病毒活性
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奶山羊CAEV感染血清抗体的消长规律
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作者 王登峰 古努尔·吐尔逊 +4 位作者 李建军 洪都孜·波拉提 杨学云 孟肖潇 吴建勇 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1555-1560,共6页
【目的】研究山羊感染关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)后血清总抗体的消长规律,为CAEV检疫、净化方案的制订提供参考数据。【方法】采用我国分离的CAEV山东株(试验组)、参考株ATCC VR-905(参考株对照组)和... 【目的】研究山羊感染关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)后血清总抗体的消长规律,为CAEV检疫、净化方案的制订提供参考数据。【方法】采用我国分离的CAEV山东株(试验组)、参考株ATCC VR-905(参考株对照组)和细胞培养基(阴性对照组)经颈静脉注射感染3~5月龄关中奶山羊9只(每组3只),选用OIE推荐的CAEV/MVV总抗体检测试剂盒(IDEXX)定期检测抗体。【结果】阴性对照组始终为阴性,试验组和参考株对照组在感染后第24 d出现抗体转阳个体,试验组在第42 d时全部转阳,参考株对照组在第71 d时全部转阳,且在后续监测期内抗体OD值均处较高水平并。【结论】山羊感染CAEV后能够产生较好的体液免疫应答,前2个月内抗体水平差异较大,抗体刺激起来后将持续处在较高水平。血清中CAEV总抗体水平可作为山羊CAE检疫的判断标准,但必须进行间隔期不少于60 d的2次以上的检疫。 展开更多
关键词 奶山羊 动物感染试验 山羊关节炎-脑炎病毒 抗体消长规律
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绵羊进行性肺炎病毒与山羊关节炎一脑炎病毒的血清学交叉反应的研究 被引量:3
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作者 薛飞 相文华 沈荣显 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期365-369,共5页
本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验(AGIDT)和免疫印迹试验(IBA)对实验感染绵羊进行性肺炎病毒(OPPV)的山羊血清与山羊关节炎—脑炎病毒(CAEV)抗原以及实验感染CAEV的绵羊血清与OPPV抗原的交叉反应进行了研... 本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验(AGIDT)和免疫印迹试验(IBA)对实验感染绵羊进行性肺炎病毒(OPPV)的山羊血清与山羊关节炎—脑炎病毒(CAEV)抗原以及实验感染CAEV的绵羊血清与OPPV抗原的交叉反应进行了研究。4只接种OPPV的山羊中有一只山羊的血清可与CAEV琼扩抗原发生交叉反应,并在免疫印迹试验中可识别CAEV的gp44、p35和p28。2只接种CAEV的绵羊中有一只绵羊的血清可与OPPV琼扩抗原发生交叉反应,并在免疫印迹试验中可识别OPPV的gp44和p28。以上的交叉反应结果表明OPPV与CAEV的抗原之间具有密切的相关性,这对于OPPV通过山羊和CAEV通过绵羊的传代研究是非常重要的,并对将来的免疫预防策略具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 绵羊 进行性肺炎病毒 山羊 CAEV 交叉反应
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的miRNA表达谱变化分析 被引量:4
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作者 李基棕 李文良 +4 位作者 毛立 郝飞 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期896-906,共11页
本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRN... 本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRNA。对靶基因进行GO注释和KEGG富集。结果显示,有37个miRNA显著差异表达(P<0.001),其中18个miRNA在病毒感染中上调,19个miRNA在病毒感染中下调。经RT-qPCR方法验证5个差异表达的候选miRNA,结果与高通量测序分析有很好的一致性。进一步GO功能注释表明:差异表达的miRNA靶基因生物学功能相对集中在免疫调节、细胞生物调控及细胞新陈代谢等生物过程。这些靶基因参与多种细胞的信号通路,包括细胞黏附分子、B细胞受体信号通路、MAPK信号通路、代谢通路、黏合斑、钙离子信号通路和趋化因子信号通路等。本研究为进一步探讨CPIV3致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MIRNA MDBK细胞 高通量测序
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山羊关节炎─脑炎前病毒的PCR检测 被引量:1
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作者 相文华 丁恩雨 +2 位作者 秦运安 吕晓玲 沈荣显 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期375-376,共2页
山羊关节炎─脑炎前病毒的PCR检测相文华,丁恩雨,秦运安,吕晓玲,沈荣显(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001)关键词聚合酶链反应,山羊关节炎—脑炎病毒,整合山羊关节炎—脑炎(CaprineArthrit... 山羊关节炎─脑炎前病毒的PCR检测相文华,丁恩雨,秦运安,吕晓玲,沈荣显(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001)关键词聚合酶链反应,山羊关节炎—脑炎病毒,整合山羊关节炎—脑炎(CaprineArthritis-Encephalitis,C... 展开更多
关键词 山羊 聚合酶链反应 山羊关节炎脑炎 病毒
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山羊关节炎-脑炎病毒P28蛋白的表达与间接ELISA方法的建立 被引量:1
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作者 刘慧敏 相文华 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期555-558,共4页
为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的CAEV P28蛋白作为检测抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对反应条件的优化建立了CAEV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅... 为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的CAEV P28蛋白作为检测抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对反应条件的优化建立了CAEV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对CAEV血清检测为阳性,对口蹄疫、山羊痘和蓝舌病病毒的阳性血清检测结果均为阴性;敏感性试验表明标准阳性血清1∶3 200倍稀释时,检测结果仍为阳性。该方法的批内和批间重复试验的变异系数分别小于7%和10%。对人工感染山羊血清进行检测,该ELISA方法最早可以在第2周检出抗体,琼脂凝集免疫扩散试验(AGID)最早可以在第4周检出抗体;与AGID试验方法相比,ELISA检出率提高27.2%。结果表明,本研究所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性,为该病的诊断和监测提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 山羊关节炎-脑炎病毒 p28基因 间接ELISA
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三种动物慢病毒形态及形态发生的比较研究
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作者 谷守林 高磊 +2 位作者 蔡红 荣骏弓 李成 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期188-191,共4页
用电镜检查确定了不同感染时间的马传染性贫血病毒 (EIAV)、维斯纳 梅迪病毒 (MVV)和山羊关节炎脑炎病毒 (CAEV)的形态和形态发生。成熟的病毒粒子为电子致密的球形 ,有囊膜 ,直径约 10 0nm ,含有 1个 (有时有 2个或 2个以上 )的核芯... 用电镜检查确定了不同感染时间的马传染性贫血病毒 (EIAV)、维斯纳 梅迪病毒 (MVV)和山羊关节炎脑炎病毒 (CAEV)的形态和形态发生。成熟的病毒粒子为电子致密的球形 ,有囊膜 ,直径约 10 0nm ,含有 1个 (有时有 2个或 2个以上 )的核芯。维斯纳 梅迪病毒和山羊关节炎脑炎病毒的核芯为球形 ,马传染性贫血病毒为杆形或锥形。在大部分病毒里能清晰地看到核芯壳 ,成熟的病毒从感染细胞的胞浆膜上出芽 。 展开更多
关键词 慢病毒 形态 形态发生 比较研究 马传染性贫血病毒 维斯纳-梅迪病毒 山羊关节炎脑炎病毒 动物疾病 反转录病毒
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山羊关节炎-脑炎病毒甘肃株env基因的克隆和序列分析
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作者 曲娟娟 赵立平 +1 位作者 沈荣显 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期478-481,共4页
本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,... 本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。 展开更多
关键词 山羊关节炎-脑炎病毒 ENV基因 克隆 序列分析
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山羊关节炎-脑炎病毒结构蛋白分析及其相应抗体在山羊体内的消长规律
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作者 相文华 吕晓玲 沈荣显 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期154-157,共4页
对山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)结构蛋白进行了分析,主要蛋白有GP125、GP90、GP70、GP45、P28、P16和P14。同时检测了CAEV实验感染山羊后的GP125、GP90和P28抗体在机体内的消长情况。
关键词 山羊 CAE 结构蛋白 消长规律
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实验感染山羊关节炎—脑炎病毒的绵羊抗体应答反应的研究
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作者 薛飞 相文华 沈荣显 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1997年第2期3-5,共3页
本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验和免疫印迹试验对实验感染山羊关节炎—脑炎病毒(CAEV)的绵羊抗体应答反应进行了研究,用两种方法都可在接毒绵羊的血清中检测到CAEV的抗体。琼脂凝胶免疫扩散试验最早可于接毒后的第7周时检测... 本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验和免疫印迹试验对实验感染山羊关节炎—脑炎病毒(CAEV)的绵羊抗体应答反应进行了研究,用两种方法都可在接毒绵羊的血清中检测到CAEV的抗体。琼脂凝胶免疫扩散试验最早可于接毒后的第7周时检测到抗体,免疫印迹试验最早可于接毒后的第6周时检测到抗CAEV的gp125、gp44、p35、p28和p14的抗体,这说明免疫印迹试验更为敏感一些。本实验的结果表明CAEV可在绵羊体内诱生明显的体液免疫应答反应,因此用CAEV通过绵羊体传代的方法可能会得到具有良好的抗原性的CAEV毒株,这对于人工培养CAEV强毒是非常重要的。此外。 展开更多
关键词 山羊 关节炎 脑炎病毒 绵羊 抗体应答反应
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MiR-222对山羊副流感病毒3型复制的影响 被引量:3
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作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2664-2671,共8页
为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因... 为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因,用双荧光素酶报告系统验证其靶基因,RNA干扰技术研究靶基因对CPIV3复制的影响。结果显示,miR-222模拟体能抑制CPIV3复制,转染miR-222组IFN的表达水平较高,且病毒复制效价(10^(2. 5)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))显著低于miRNA阴性对照组(10^(3. 3)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1));双荧光素酶报告系统验证和qPCR检测得出,miR-222可靶向结合IRF2的3'-UTR,并降解IRF2的mRNA和抑制IRF2蛋白表达;敲除IRF2的MDBK细胞感染CPIV3后,病毒复制效价(10^(2. 0)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))低于正常MDBK细胞组(10^(3. 2)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))。本研究表明,miR-222通过靶向降解IRF2 mRNA提高IFN表达水平来抑制CPIV3复制,为基于miR-222研制潜在抗病毒药物提供基础资料。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MIR-222 MDBK细胞 IRF2
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山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:2
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作者 王咪 李文良 +4 位作者 郝飞 毛立 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期150-156,共7页
山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化... 山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达重组N蛋白并鉴定。通过条件优化建立ELISA抗体检测方法,并检测临床样品与HI试验进行比较。本试验成功构建重组质粒,诱导表达的蛋白质(47ku)经SDS-PAGE与Western blot鉴定,证明其正确表达且具有良好的抗原性与特异性。利用纯化的蛋白质作为包被抗原优化间接ELISA反应条件,确定其最佳抗原包被浓度为1μg·mL-1、血清稀释度为1∶200、血清作用时间60min、酶标二抗工作浓度为1∶6 000、二抗反应时间30min、底物显色时间10min。通过对138份临床血清样品检测发现其与HI试验结果符合率达88.41%。本研究建立的间接ELISA检测方法敏感、特异、准确,适用于临床样品的检测与血清流行病学调查。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 N蛋白 原核表达 间接ELISA
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山羊副流感病毒3型通过Caspase途径诱导气管上皮细胞凋亡 被引量:2
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作者 廖政 李基棕 +9 位作者 肖芳 钟纯燕 杨蕾蕾 毛立 李文良 孙敏 主性 嵇辛勤 张纹纹 刘茂军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2061-2069,共9页
旨在揭示山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染气管上皮细胞后是否可诱导细胞发生凋亡,并对细胞凋亡的信号通路进行初步探究。本研究将CPIV3病毒液接种气管上皮细胞,在12、24、36、48、72和96 h收集培养物上清检测病毒增殖滴度;通过形态学观察C... 旨在揭示山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染气管上皮细胞后是否可诱导细胞发生凋亡,并对细胞凋亡的信号通路进行初步探究。本研究将CPIV3病毒液接种气管上皮细胞,在12、24、36、48、72和96 h收集培养物上清检测病毒增殖滴度;通过形态学观察CPIV3诱导气管上皮细胞病变(CPE)情况;采用Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒和Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性检测试剂盒检测凋亡水平及相关指标;荧光定量PCR检测细胞凋亡分子mRNA表达水平;Western blot分析激活型Caspase-3蛋白表达变化情况。结果显示,CPIV3在气管上皮细胞中的增殖呈上升趋势,96 h能达到10 4.50 TCID 50·mL^-1;形态学观察发现,病毒接种后48 h出现细胞收缩变圆、脱落等CPE现象;流式细胞术检测及Caspase活性检测表明,感染组细胞出现细胞凋亡,48 h后细胞凋亡率达19.66%,且Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性随着时间延长逐渐升高;死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径细胞凋亡因子mRNA表达上调。Western blot分析揭示,激活型Caspase-3蛋白在病毒感染过程中被活化。本研究证实CPIV3感染可诱导气管上皮细胞凋亡,且Caspase途径在病毒诱导细胞凋亡的过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 细胞凋亡 气管上皮细胞 CASPASE
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞和BECs后7种ISGs mRNA变化分析 被引量:2
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作者 肖芳 嵇辛勤 +5 位作者 李基棕 廖政 毛立 李文良 孙敏 刘茂军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1147-1153,共7页
为探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和气管上皮细胞(BECs)后的抗病毒免疫应答,本研究针对7种干扰素刺激基因(ISGs):IFI6、ISG15、OAS1Y、OAS1Z、Mx1、Mx2及RSAD2的基因序列设计特异性引物,经优化建立了检测7种ISGs的SYBR Gree... 为探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和气管上皮细胞(BECs)后的抗病毒免疫应答,本研究针对7种干扰素刺激基因(ISGs):IFI6、ISG15、OAS1Y、OAS1Z、Mx1、Mx2及RSAD2的基因序列设计特异性引物,经优化建立了检测7种ISGs的SYBR Green I荧光定量PCR方法。利用所建立的方法检测CPIV3JS2013株感染MDBK细胞和BECs 24 h、48 h和72 h后7种ISGs的m RNA转录水平。结果显示,在MDBK细胞中,CPIV3感染时间越长,7种ISGs的转录水平上调倍数越高,其中ISG15、Mx1、Mx2和RSAD2的m RNA转录水平上调量持续高于IFI6、OAS1Y和OAS1Z;而在BECs中,CPIV3感染后虽然IFI6、ISG15、OAS1Y、OAS1Z、Mx1、Mx2和RSAD2 m RNA转录水平均出现上调,但ISG15、Mx2和RSAD2的m RNA转录水平上调量高于IFI6、OAS1Y、OAS1Z和Mx1。结果表明,CPIV3 JS2013株可以刺激MDBK细胞和BECs中这7种ISGs的大量转录,本研究为进一步探究其抗病毒功能提供了实验依据。 展开更多
关键词 干扰素刺激基因 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 山羊副流感病毒3型 建立及应用
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的转录组分析 被引量:1
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作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期364-372,共9页
本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组... 本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组与对照组进行高通量测序,并用测序评估、基因注释等生物信息学方法进行分析。结果显示,差异表达基因共261个,其中表达上调140个,表达下调121个,经RT-qPCR方法验证8个差异表达的干扰素信号通路相关基因,结果与高通量测序一致。进一步GO分类结果显示,差异表达基因主要涉及细胞生物学进程、构成细胞的组分以及实现的分子功能三个方面,KEGG分析显示这些基因参与代谢、生物系统、细胞进程、基因信息进程和环境信息进程。本研究为深入探究CPIV3的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MDBK细胞 高通量测序 转录组
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某育肥羊场呼吸道疾病的诊断与病原学鉴定 被引量:2
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作者 恽佳蕾 何苗峰 +6 位作者 王少辉 毛立 杨蕾蕾 张纹纹 孙敏 刘茂军 李文良 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第1期94-99,共6页
为明确江苏某羊场外购育肥羊突发呼吸道疾病的病因,本研究结合临床症状、剖检病变观察、病原学检测与分离鉴定等方法对病因进行分析。结果表明:该病是由肠道外致病性大肠杆菌、山羊副流感病毒3型及绵羊肺炎支原体混合感染所致。分离所得... 为明确江苏某羊场外购育肥羊突发呼吸道疾病的病因,本研究结合临床症状、剖检病变观察、病原学检测与分离鉴定等方法对病因进行分析。结果表明:该病是由肠道外致病性大肠杆菌、山羊副流感病毒3型及绵羊肺炎支原体混合感染所致。分离所得的2株大肠杆菌对多黏菌素B、强力霉素敏感,对其他12种常见抗生素均不敏感,检测到其携带有iss、fyuA、iroN、cvaC、fimH、iutA、kpsMTⅡ这7种毒力基因,分别属于系统进化群B1群与B2群。通过MDBK细胞成功分离获得1株山羊副流感病毒3型毒株,其M基因片段与流行毒株同源性最高达99.7%。该结果将有助于科学认识和防控山羊呼吸道疾病。 展开更多
关键词 肠道外致病性大肠杆菌 山羊副流感病毒3型 绵羊肺炎支原体 混合感染 分离鉴定
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小反刍动物慢病毒通用PCR检测方法的建立与初步评价 被引量:3
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作者 杨义琴 吴建勇 +4 位作者 古努尔.吐尔逊 李建军 杨学云 贾斌 王登峰 《草食家畜》 2018年第2期13-19,共7页
为建立通用的小反刍动物慢病毒(山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒)病原学检测技术方法,本研究对Gen Bank公布的31株小反刍动物慢病毒前病毒基因组序列进行比对,筛选出vif基因上约150 bp的序列作为诊断标记物并设计简并引物;通过全... 为建立通用的小反刍动物慢病毒(山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒)病原学检测技术方法,本研究对Gen Bank公布的31株小反刍动物慢病毒前病毒基因组序列进行比对,筛选出vif基因上约150 bp的序列作为诊断标记物并设计简并引物;通过全基因合成方法获得该序列作为PCR反应的阳性对照模板,以此建立了小反刍动物慢病毒PCR检测方法,研究结果初步证实其可用于山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒野毒株RNA和前病毒DNA的检测,说明该方法有望用于我国小反刍动物慢病毒病的检测与流行病学调查。 展开更多
关键词 小反刍动物慢病毒 梅迪-维斯纳病毒 山羊关节炎-脑炎病毒 聚合酶链式反应 检测方法
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