HIV衣壳蛋白P24与TRIM22在HEK293T细胞中的表达及共定位

目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)衣壳蛋白P24与三基序蛋白22(TRIM22)在HEK293T细胞中的共定位情况。方法以慢病毒载体p LP1为模板,通过PCR法扩增p24编码序列,克隆至p DsRed-Monomer-N1真核表达载体。经菌落PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定。将p DsRed-Monomer-N1-p24与p EGFP-N3-TRIM22载体共同转染HEK293T细胞,用荧光显微镜观察p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP的表达及共定位情况。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建p DsRedMonomer-N1-p24真核表达载体。通过荧光显微镜检测发现,p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP在HEK293T细胞中存在共定位关系。结论 HIV衣壳蛋白P24与TRIM22存在共定位。

TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位研究

目的观察外源性三基序蛋白22(TRIM22)与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位情况。方法分别将pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体转染U-251细胞,通过激光共聚焦显微镜观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1的表达和分布情况。通过激光共聚焦xyz轴扫描,经ImageJ 1.50i软件进行3D结构重建,观察p24-Dsred1在U-251细胞中的分布特点。将pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体在U-251细胞中共表达,观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1是否存在共定位关系。结果单独转染pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP和p24-DsRed1在U-251细胞的胞体或突起中均有较高水平的表达;且3D结构重建显示外源性p24-DsRed1可迁移至U-251细胞的足突。在U-251细胞共转染pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP与p24-DsRed1存在共定位关系,并能以出胞形式脱离细胞。结论 TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中存在共定位关系。

HIV结构蛋白p24与三基序蛋白22胞内定位及出胞研究

比较p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRed-Monomer三种荧光蛋白的表达强弱,观察p24-DsRed1与TRIM22-EGFP结合物在细胞中的分布特点。构建pDsRed1-N1-p24及pDsRed2-N1-p24真核表达载体,转染HEK293T细胞,经荧光显微镜比较三种p24-DsRed荧光偶联蛋白的表达强度。选择荧光强度最强的pDsRed1-N1-p24与pEGFP-N3-TRIM22共转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察两者结合物在细胞中的分布特点。结果显示,经荧光显微镜检测,转染48h后红色荧光蛋白强度由大到小依次为p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRedm。在HEK293T细胞中共转染p24-DsRed1和TRIM22-EGFP,发现两者存在共定位关系,有意思的是两者的结合体能以出胞形式脱离细胞。结果表明,p24-DsRed1荧光蛋白强度显著高于p24-DsRed2和p24-DsRedm,TRIM22-p24结合物能以出芽形式脱离细胞。