植物乳杆菌DMDL 9010胞外多糖合成蛋白cpsB的生物信息学分析

为了探讨植物乳杆菌DMDL 9010胞外多糖合成蛋白cpsB的结构特性,该文通过生物信息学技术研究了胞外多糖合成蛋白cpsB的理化性质、亲/疏水性、跨膜结构、功能位点、磷酸化位点、信号肽、结构域、保守功能域、序列同源性以及空间结构进行预测与分析。结果表明胞外多糖合成蛋白cpsB相对分子质量约为2920,等电点6.86,含有191个氨基酸;其为疏水蛋白,具有较高的稳定性;经过跨膜结构预测,发现其不存在跨膜结构,为胞内蛋白;胞外多糖合成蛋白cpsB中含有15个磷酸位点;氨基酸序列中不包含信号肽,所编码蛋白均为内分泌型蛋白;保守功能域预测中,基因中仅发现一段PHP结构域,该基因可能参与调节胞外多糖的基因表达。胞外多糖合成蛋白cpsB的二级结构中α-螺旋占51.14%,并不存在β-折叠和β-转角结构,其三级结构比例与二级结构基本相似。该研究对植物乳杆菌DMDL 9010的胞外多糖合成蛋白cpsB功能机制进行深入研究,对利用基因工程技术研究其胞外多糖的生物合成具有重要意义。

绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性及2种候选疫苗的免疫效果评价

旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验等方法初步明确PmD的生物学特性;并通过最佳灭活条件和佐剂筛选、安全性试验、原核表达等方法制备PmD灭活疫苗与PmD-OmpH重组疫苗,采取小鼠攻毒保护试验评价2种疫苗的免疫效力。结果:从绵羊肺脏中分离出1株PmD,药敏试验显示,该菌为7重耐药菌,未检测到耐药基因;毒力基因检测显示,该菌具有12种毒力基因(exbB、exbD、hgbA、tonB、fimA、Oma87、OmpH、Psl、sodA、sodC、tbpA、toxA);致病性较强,对小鼠的最小致死菌量为2.2×105 CFU;灭活疫苗和重组疫苗对相同血清型菌株攻毒的保护率分别为80%和10%;灭活疫苗对血清型A、F和未知菌株攻毒保护率分别为0、20%和0,而重组疫苗的保护率则全为0。本研究发现1株强耐药、强毒力的绵羊源PmD,灭活疫苗对同种血清型菌株的保护性远高于重组疫苗,发病地区羊场可采用同种血清型灭活疫苗进行预防和控制绵羊巴氏杆菌病,对多价疫苗和新型疫苗的研制还有待进一步发掘。

Inhibitory Effects of NO-Fluvastatin on Proliferation of Human Lens Epithelial Cells in vitro by Modulating Cell Cycle Regulatory Proteins

The effects of NO-Fluvastatin on proliferation of human lens epithelial cells （HLECs） and the action mechanism were investigated. Cell proliferation was assessed by MTT assay. Cell cycle was analyzed by flow cytometry. The expression of cell cycle regulatory proteins CyclinE mRNA and P21waf1 mRNA was detected by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）. MTT staining colorimetry showed that HLECs proliferation was markedly inhibited by NO-Fluvastatin and the effect was dependently related to time （24, 48 and 72 h） and dosage （1, 5 and 20 μmol/L）. Flow cytometry revealed that NO-Fluvastatin could significantly block HLECs in the G0/G1 phase, resulting in the increased cells in the G0/G1 phase and decreased in the S phase （P〈0.05）. RT-PCR showed that NO-Fluvastatin could obviously inhibit the CyclinE mRNA expression and induce the P21waf1 mRNA expression as compared with the negative control groups （P〈0.05）. This experiment suggested that NO-Fluvastatin could suppress the proliferation of HLECs by regulating cell cycle regulatory proteins （inhibiting the expression of CyclinE mRNA and inducing the expression of P21waf1 mRNA）, resulting in the arrest of HLECs in the G0/G1 phase, which can offer theory basis for NO-Fluvastatin in treating posterior capsular opacification in clinic practice.

大自体血回输疗法治疗内囊预警综合征患者的临床效果

目的探讨大自体血回输疗法治疗内囊预警综合征(CWS)患者的临床效果。方法选取我院2010—2019年收治的46例CWS患者作为研究对象,根据入院时间不同将其分为对照组(2010—2015年)和观察组(2016—2019年),各23例。对照组给予传统常规治疗,观察组在对照组基础上加用大自体血回输疗法治疗。比较两组的治疗效果。结果治疗前,两组的S100B蛋白水平无显著差异(P>0.05);治疗14 d后,两组的S100B水平均降低,且观察组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)评分无显著差异(P>0.05);治疗14 d后,两组的NIHSS评分均降低,且观察组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组的预警症状发生率低于对照组,症状发作持续时间短于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组的改良Rankin量表评分(mRS)评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大自体血回输疗法治疗CWS能够有效减少卒中预警症状发生率,改善卒中患者预后,减轻神经功能缺损程度,降低血清S100B蛋白水平,且不会增加不良反应,值得临床应用。

肺炎链球菌疫苗研制进展

肺炎链球菌导致的疾病已成为全球一个重要的公共卫生问题。疫苗开发及使用成为重要的预防策略,目前肺炎球菌疫苗主要有多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗二类。对肺炎链球菌病原学、流行病学、所致疾病、疫苗研发进展及疫苗使用情况进行了综述。

通过CDAP活化多糖制备b型流感嗜血杆菌荚膜多糖-D蛋白疫苗初探

目的用CDAP活化b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖,制备b型流感嗜血杆菌荚膜多糖及D蛋白疫苗。方法采用CDAP法在不同p H值条件下活化Hib荚膜多糖,再通过乙二酰肼(ADH)与D蛋白共价结合,制备Hib荚膜多糖与其D蛋白结合物原液,并对三批结合物原液的各项指标进行检测。获得的结合物原液免疫BALB/c小鼠,应用ELISA法检测血清中的Ig G抗体水平,评价其免疫原性。结果三批结合物原液以上检测指标均符合药典要求,衍生物中ADH含量对结合物的免疫原性有重要影响。结论用CDAP活化工艺制备的Hib荚膜多糖-D蛋白结合物适宜制备结合疫苗,为以D蛋白为载体的Hib结合疫苗的制备及五价联苗的研制奠定实验基础。

大剂量阿托伐他汀钙对内囊预警综合征进展为脑梗死患者血清S100B蛋白及预后的影响

目的观察大剂量阿托伐他汀对内囊预警综合征进展为脑梗死患者血清S100B蛋白水平及预后的影响。方法随机将发病24h内入院的内囊预警综合征进展为脑梗死患者30例分为对照组和阿托伐他汀组(阿托伐他汀80mg/d,连续用药14d)。治疗前后检测血清S100B蛋白水平,应用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)及Barthel指数(BI)记分法对入院后当天及3个月时行神经功能缺损程度进行评分。结果治疗前血清S100B蛋白与当时及3个月时病情严重性显著相关(r=0.721,r=-0.635,P均<0.001;r=0.561,r=-0.623,P均<0.001)。治疗后阿托伐他汀组血清S100B蛋白水平下降,且与对照组相比,差异有显著性(P=0.009)。各组入院时神经功能缺失程度评分与3个月后相比,差异有显著性(P<0.001,P<0.001),但不同组之间相比无明显差异。结论短期应用大剂量阿托伐他汀可以降低内囊预警综合征进展为脑梗死患者血清S100B蛋白水平,但对其3个月的预后无明显改善作用。

猪肺炎支原体及其生物学研究进展

猪肺炎支原体是引起猪支气管肺炎的主要病原 ,严重危害着养猪事业的发展。虽然猪肺炎支原体的结构简单 ,但由于它对营养要求较高 ,故培养难度大 ,也是人们不能对其深入研究的一个主要原因。近年来利用克隆技术 ,对猪肺炎支原体从基因水平上进行了多种研究 ,已经取得了一些可喜成果。文章从它的生物学特性、荚膜结构、膜蛋白研究以及基因水平的研究等方面进行了综合性论述 。

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌是引起全球所有年龄组高发病率和病死率的主要病原菌，其疫苗的研制和使用对肺炎链球菌感染的防治具有重要意义。目前临床投入使用的肺炎链球菌疫苗主要有23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗，两者都具有一定的效力和良好的安全性，但也存在许多局限性。其他肺炎链球菌多价多糖蛋白结合疫苗、蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗等也在研制和开发中。

鸡大肠杆菌荚膜多糖──蛋白质抗原免疫原性的研究

用碳化二亚胺作为交联剂将荚膜多糖与载体蛋白质交联后加入蜂胶佐剂制成疫苗免疫鸡只。７周龄同源菌株攻毒结果表明，荚膜多糖－破伤风类毒素苗组鸡有很好的保护效果且试验重复性好；在免疫后３个月的同源攻毒保护指数也达１３／２０以上。但对异源菌株的攻毒没有明显保护效果。该研究采用微量法间接血凝试验检测了免疫鸡抗体水平。

大剂量阿托伐他汀钙对内囊预警综合征进展为脑梗死患者血清S100B蛋白及预后的影响

目的研究血清S100B蛋白及血脂水平与内囊预警综合征病情严重性及预后的关系,探讨阿托伐他汀对内囊预警综合征进展为脑梗死患者血清S100B蛋白水平及预后的影响。方法随机将发病24h内入院的内囊预警综合征进展为脑梗死患者30例分为对照组和阿托伐他汀组(阿托伐他汀80mg/d,连续用药14d)。治疗前后检测血清S100B蛋白、血脂、血清谷草转氨酶(AST)及血清肌酸激酶(CK)水平,应用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)及Barthel指数(BI)记分法对入院后当天及3个月时行神经功能缺损程度评分。结果治疗前血清S100B蛋白与当时及3个月时病情严重性显著相关(r=0.721,r=-0.635,P均<0.001;r=0.561,r=-0.623,P均<0.001),血脂水平则无相关性。治疗后阿托伐他汀组血清S100B蛋白水平下降,且与对照组相比,差异有统计学意义(P=0.009)。各组入院时神经功能缺失程度评分与3个月后相比,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001),但不同组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后各组AST及CK水平无明显变化。结论内囊预警综合征进展为脑梗死患者血清S100B蛋白水平与病情的严重程度及预后相关。短期应用大剂量阿托伐他汀可以降低内囊预警综合征进展为脑梗死,安全性好,但对内囊预警综合征进展为脑梗死后3个月的预后无明显改善作用。阿托伐他汀对内囊预警综合征进展为脑梗死患者的疗效需进一步研究。

6型肺炎链球菌荚膜多糖-外膜蛋白A结合物的表征及免疫原性

目的:表征肺炎链球菌荚膜多糖-外膜蛋白A结合物,并研究其免疫原性。方法:采用凝胶色谱及电泳分析鉴定肺炎链球菌荚膜多糖-外膜蛋白A结合物,ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平及交叉反应。结果:结合物相对相对分子质量大于游离多糖或外膜蛋白A,结合物中荚膜多糖和外膜蛋白A的质量比为3.89∶1,结合物诱生的特异性IgG,IgG1和IgG2 a抗体滴度均增强,并且与3种血清型肺炎链球菌具有不同程度的交叉反应。结论:证实多糖和蛋白的有效交联,所制备的多糖-蛋白结合物具有良好的免疫原性。

牛源A型多杀性巴氏杆菌pm 0979和pm 0442基因编码蛋白对小鼠的免疫保护性研究

为评价牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)pm0979和pm0442基因编码蛋白的免疫保护效果,本研究以牛源PmCQ2株基因组DNA为模板,经PCR扩增得到pm0979、pm0442全长基因,将其分别克隆到pET-30a、pET-32a载体并转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,分别获得大小约41.8 ku(rPM0979)和21.6 ku(rPM0442)的重组蛋白;将其亲合层析纯化后分别免疫小鼠,以PmCQ2株进行攻毒试验,测定其抗体产生情况和保护效果。结果表明,两种重组蛋白均可以诱导小鼠产生较高水平的抗体;其中rPM0979对小鼠的免疫保护高于rPM0442,保护率可达60%。结果表明,重组蛋白PM0979可作为Pm的一种疫苗候选蛋白,为进一步的疫苗研制奠定了基础。

Ⅱ型猪链球菌S_2株在兔中免疫原性的研究

本文对Ⅱ型猪链球菌Ｓ２株进行了研究。作者用Ｓ２制备了３种不同抗原：荚膜多糖，多糖蛋白复合物，灭活菌苗。通过血清学方法证明荚膜多糖（ＣＰＳ），多糖蛋白复合物与Ｓ２株有共同的抗原，免疫兔后，保护指数在１／２至２／２之间。本试验用ＥＬＩＳＡ法检测了３种抗原的免疫反应。免疫荚膜多糖组在第２周就能检测到抗体，并持续到第４周，免疫多糖蛋白复合物组在第４周才有抗体出现，免疫灭活苗组第２周出现较低滴度的抗体，第４周就降到零。从抗体滴度看，ＣＰＳ反应快，多糖蛋白复合物产生抗体迟，灭活苗产生抗体滴度低。本文还比较了３种不同佐剂（铝胶，蜂胶，ＥＭＵＬＳＩＧＥＮＲ）对３种抗原的佐剂活性作用。铝胶能促使兔体对荚膜多糖产生抗体，蜂胶次之，ＥＭＵＬＳＩＧＥＮＲ最差。

副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。

逆转录病毒载体携带报告基因在晶状体上皮细胞中的转染与表达

目的观察目的基因在晶状体上皮细胞的表达情况,以探讨基因疗法用于后发性白内障的可行性。方法用绿色荧光蛋白基因作为报告基因,以逆转录病毒载体携之转染晶状体上皮细胞,观察GFP在晶状体上皮细胞的表达情况。结果基因转染后可见晶状体上皮细胞的GFP表达率在30%～35%。结论逆转录病毒载体可以携带目的基因转染于晶状体上皮细胞,并达到较高的转染率。

猪肺炎支原体致病机理研究进展

猪肺炎支原体是引起猪支气管肺炎的主要病原,严重危害着养猪业的发展。文章从猪肺炎支原体的结构、主要抗原蛋白研究及其在基因水平的研究等方面,对猪肺炎支原体的致病机理作一综述,为该疾病的防治提供理论依据。

猪多杀性巴氏杆菌对HeLa细胞附着能力的研究

本研究通过猪肺疫的活菌疫苗和死菌疫苗多杀性巴氏杆菌菌株(Pasteurella multocida,Pm)对小鼠的毒力试验测定它们的毒力性。结果表明,死菌疫苗Pm的毒力性比活菌疫苗Pm的强,即死亡率分别为10 0 %和0 %。通过两菌株对He L a细胞的附着试验测定它们的附着能力,结果证明强毒菌的附着能力明显地比弱毒菌强(P<0 .0 1) ,平均附着数分别为11.96和2 .4 4 ;从上述菌株细胞荚膜中分别提取荚膜蛋白,用SDS- PAGE分离测定两菌株荚膜蛋白质结构,结果表明39k Da荚膜蛋白是强毒菌的特异性蛋白。以上研究结果证明Pm的毒力与He L a细胞的附着能力是密切相关的,同时暗示本菌39k Da荚膜蛋白可能与它们的毒力和He L

NO-Fluvastain对体外培养的人LECs增生作用的实验研究

目的研究NO-Fluvastain对体外培养的人晶状体上皮细胞(LECs)增生的影响及其作用机制。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞增生;流式细胞仪测定细胞周期;RT-PCR测定细胞周期调控蛋白CyclinE mRNA和P21waf1 mRNA表达。结果MTT检测显示NO-Fluvastain对体外人LECs的增生具有显著抑制作用,并且表现出时间和剂量依赖关系。流式细胞仪检测发现NO-Fluvastain可阻滞人LECs由G0/G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。RT-PCR检测发现NO-Fluvastain可抑制CyclinE mRNA表达,促进P21waf1 mRNA表达。与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NO-Fluvastain通过抑制CyclinE mRNA表达,促进P21waf1 mRNA表达,使人LECs阻滞于G0/G1期,从而抑制人LECs增生。

肺炎链球菌相关毒力因子及其作用的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)是导致黏膜疾病(如中耳炎、肺炎)和系统性疾病(包括败血症和脑膜炎)等严重疾病的主要病原体之一。肺炎链球菌毒力因子分为荚膜多糖、S.pn相关蛋白、细胞壁及细胞壁多糖三大类,其中荚膜多糖为最主要的毒力因子,也是疫苗中最有效的成分。毒力因子在S.pn入侵机体及引发疾病的过程中起着重要的作用。因此,毒力因子及作用的研究,不仅对预防和治疗肺炎链球菌的感染有着重要的意义,并为研发安全、有效的多糖疫苗提供一定的技术支持。现就肺炎链球菌毒力因子及其作用作一综述。