Capto C5刀柄关键尺寸的确定

Capto刀柄在高速加工中心,尤其是车铣复合加工中心中得到广泛的应用。其部分尺寸对刀柄工作性能影响很大,为找出这些关键尺寸,运用有限元法分析了Capto C5刀柄九组尺寸的变化对刀柄径向刚度的影响规律,得到了对Capto刀柄性能影响较大的几组关键尺寸。研究工作为Capto刀柄的制造与测量提供了理论依据。

高速加工用Capto刀柄关键尺寸测量技术研究

为了实现对Capto刀柄关键尺寸的精密测量,在详细分析了ISO标准的基础上,确定了被测参数,设计了Capto刀柄测量系统。根据约束空间自由度的思想确定了定位方案,通过刀柄自重实现轴向定位,通过三个支承钉的合理配置实现径向定位,通过严格控制测量环规腔体的尺寸实现周向定位。利用研制出的测量系统对Capto刀柄进行了等精度测量,测量结果符合标准规定的精度要求。研究表明该测量系统的定位方式是可行的,能够满足对Capto刀柄关键尺寸的测量需求。

Capto工具系统关键参数分析

分析了ISO标准中Capto工具系统关键参数的变化对其性能的影响,计算了Capto刀柄/主轴配合时的最大和最小过盈量,提出了锥部尺寸的检测方法。研究结果表明,Capto刀柄关键参数的变化会直接影响配合过盈量,从而影响刀柄的工作性能。

采用响应曲面法对Capto adhere填料进行工艺优化

为对复合阴离子Capto adhere填料进行纯化工艺优化,在前期单因素试验基础上,CHO细胞表达的IgG1型单克隆抗体细胞培养上清液经亲和层析纯化后,采用中心复合表面设计(CCF)法优化Capto adhere填料纯化工艺。以收率、纯度、HCP清除率为响应变量,考察pH、电导率、载量3个关键因素对纯化工艺的影响,拟合模型并验证。优化后最佳工艺条件为:pH 7.0,电导率16.4 ms/cm,载量300 mg/ml,在此条件下,收率、纯度和HCP清除率分别可达(90.77±0.77)%、(99.55±0.05)%和(88.93±2.14)%。与预测结果偏差均<5%,模型得到验证。试验结果表明本研究Capto adhere填料工艺优化是有效可行的。

利用数控落地镗铣中心和Capto刀座配车铣轴铜套

利用数控落地镗铣加工中心自身及Capto刀座配车自身铣轴铜套,缩短维修周期,降低维修成本。

离子交换凝胶Capto-DEAE替代DEAE-Sepharose纯化乙脑病毒抗原研究

乙脑病毒抗原离子交换层析中,使用新型的凝胶填料Capto-DEAE替代DEAE-Sepharose纯化乙脑病毒抗原的研究。研究结果表明,使用离子交换凝胶填料Capto-DEAE层析不仅产品质量更好,而且生产效率也得到了提高。

五步蛇毒的血管紧张素转换酶抑制剂与卡托普利对大鼠高血压的影响

用来自中国五步蛇毒（ＶｅｎｏｍｏｆＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）的新ＡＣＥＩ（ＡＩ９３）与卡托普利，在麻醉大鼠体内进行抑制ＡｎｇＩ和对抗大鼠２Ｋ—ＩＣ型急性肾性高血压的作用效应比较。结果ＡＩ９３在体外对ＡＣＥ的抑制虽较弱（１１．０μｍｏｌ／Ｌ），但在体内效应却较强。８０μｇ／ｋｇ的ＡＩ９３和卡托普利在大鼠体内抑制ＡｎｇＩ和抗急性肾性高血压已有显著意义。ＡＩ９３在２０～１８０μｇ／ｋｇ的范围内抑制ＡｎｇＩ的量—效对数回归分析呈正比；在相同条件下用同一剂量的卡托普利作比较，它们的作用功能和反应程度却不一致，卡托普利对肾性高血压有更强的效应，且量一效对数回归不呈正比。

新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨

目的探索新型凝胶Capto DEAE离子交换柱层析纯化凝血酶原复合物的工艺条件。方法健康人混血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶进行吸附,经洗涤、洗脱得到洗脱液;将得到的洗脱液超滤脱盐后,再通过Capto DEAE凝胶柱纯化,制备凝血酶原复合物（prothrombin complex concentrates,PCC）。测定PCC中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及抗凝蛋白C的活性并计算收率;采用Bradford法测定PCC蛋白浓度,再根据测定的4种凝血因子和蛋白C的活性,计算有效成分的比活;以此分析所选工艺条件下Capto凝胶对PCC的纯化效果。结果不同实验方案下,所得制品中FⅡ、FⅨ、FⅩ收率和纯度均较高,且该3种凝血因子均衡度较好;但FⅦ收率和纯度均较低;其中A方案下PCC收率和纯度较好,即Capto DEAE凝胶体系平衡液、洗涤液、洗脱液中柠檬酸钠、Na Cl、p H分别为0.020-0.028 mol/L、0.10-0.15 mol/L、6.9-7.2;0.012-0.020 mol/L、0.10-0.15 mol/L、6.9-7.2;0.005-0.012 mol/L、2.4 mol/L、7.2-7.5时,FⅨ收率为（74.40±10.89）%,比活为（3.31±0.31）IU/mg,抗凝蛋白C的收率和比活均较高。结论采用DEAE-Sephadex A-50批式吸附及Capto DEAE柱层析相结合的新方法制备PCC,在所选择条件下,PCC制品的纯度为2.17-3.31 IU/mg,远优于传统工艺制得的产品,此为高品质PCC的制备提供了新的方法。

数控落地镗铣加工中心铣轴铜套现场更换维修

介绍了数控落地镗铣床加工中心铣轴铜套现场更换维修的全过程,包括铜套毛坯准备、冷套装配、最终精加工。机床精度达到要求,用时仅5天,已稳定运行数月。

N－环已基－2－苯并噻唑次磺酰胺的合成

讨论了用过氧化氢作氧化剂合成Ｎ－环已基－２－苯并噻唑次磺酰胺。研究了原料配比、反应时间、反应温度等对收率的影响，给出了最佳合成工艺条件。

甲型肝炎病毒复合层析介质Capto Core 400的纯化效果

目的 探索新型复合层析介质Capto Core 400层析填料纯化甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的效果。方法用Capto Core 400层析介质纯化人胚肺二倍体细胞(2BS株)培养收获的HAV粗纯液,经流速(60、150、300、450 cm/h)、上样缓冲液pH(6.6、7.0、7.4)、上样缓冲液盐离子浓度(0、0.15、0.3、0.45 mol/L)、载量[0.5、1、2、4柱体积(column volume,CV)]筛选最适纯化HAV的条件,并与传统Sepharose 4FF层析介质纯化效果进行比较。结果 初步确定Capto Core 400纯化工艺条件为流速150 cm/h、上样缓冲液pH 7.0~7.4、盐离子浓度0.15 mol/L、上样量2 CV时,纯化效果最好,病毒回收率平均为92.61%,蛋白去除率平均为84.25%。Sepharose 4FF层析介质纯化HAV抗原回收率平均为76.03%,蛋白去除率平均为73.21%,Capto Core 400层析介质纯化效果优于Sepharose 4FF层析介质。结论Capto Core 400复合层析介质纯化HAV回收率较高,操作相对简便,适合纯化HAV。

模块式工具系统的发展概况探究

文中介绍了几种国际市场上常见的模块式工具系统,给出了具体的结构和工作原理,分析了各自具有的特点、优势和适用范围。

复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒

目的采用复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒(rotavirus,RV),去除培养液中的残余细胞宿主蛋白和DNA,提高病毒收率。方法将RV LH9毒种接种Vero细胞,制备RV原液,澄清、超滤后,用Capto core 700纯化:样品LH9、LH9+150 mmol/L Na Cl[以缓冲液A(20 mmol/L PB+150 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化分别标记为A、B组合,样品LH9+300 mmol/L Na Cl[以缓冲液B(20mmol/L PB+300 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为C组合,样品LH9+450 mmol/L Na Cl[以缓冲液C(20 mmol/L PB+450 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为D组合,洗脱,收集流穿峰,检测纯化后病毒的滴度和收率、RV RNA、RV抗原性、残余宿主细胞蛋白(HCP)和DNA;并用初步筛选出的纯化组合纯化3批RV超滤浓缩液,检测各项指标,进行进一步验证。结果用20 mmol/L PB+150 mmol/L Na CL缓冲体系和样品中加入150 mmol/L Na Cl的组合纯化RV,病毒收率在80%以上,病毒核酸完整,其抗原性未发生改变,可去除94%以上的HCP,残余DNA符合《中国药典》三部(2010版)标准。结论 Capto core 700纯化RV收率和残余蛋白去除效率均较高,组合B操作相对简便,工艺时间短,病毒收率高,更适于RV的纯化。

层析介质Capto Core400和Sephacryl S-1000纯化乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒效果的比较

目的比较层析介质Capto Core400和Sephacryl S-1000纯化乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的效果。方法采用两种层析介质纯化相同3批HBc VLPs蛋白粗提液,BCA法检测纯化样品的蛋白浓度,计算蛋白回收率;体积排阻色谱法检测纯度;马尔文粒径仪检测HBc VLPs粒径;透射电子显微镜观察HBc VLPs形态。结果层析介质Sephacryl S-1000和Capto Core400纯化HBc VLPs的蛋白回收率分别为75.5%和70.5%,蛋白纯度分别为87%和99%,粒径大小均为(30±4)nm,均一性良好;与Sephacryl S-1000比较,经Capto Core400纯化的HBc VLPs分布更均匀。结论Capto Core400纯化HBc VLPs的纯度及颗粒分布均匀性更佳,且该层析介质装量小,纯化时间短,更适用于HBc VLPs的规模化生产。

Capto Core 700在流感疫苗中去除卵清蛋白的应用

目的用新型复合型填料Capto Core 700层析介质纯化鸡胚流感疫苗,以降低卵清蛋白的残留水平。方法用Capto Core700进一步纯化鸡胚培养的不同亚型的流感病毒纯化后原液及超滤浓缩液,参考《中国药典》三部(2010版)检测纯化前、后样品中总蛋白含量、血凝素含量及卵清蛋白残留量。结果卵清蛋白残留量较纯化前降低约10倍,血凝素和总蛋白含量基本保持不变。结论 Capto Core700新型填料可有效去除鸡胚流感疫苗中的卵清蛋白残留量,从而提高产品质量。

应用复合纯化介质Capto Core700纯化狂犬病疫苗

目的应用复合凝胶Capto Core700作为纯化介质去除狂犬病疫苗中的Vero细胞宿主蛋白和宿主细胞DNA等杂质。方法将Vero细胞接种至微载体,在celligen plus生物反应器中培养,按MOI=0.002接种狂犬病病毒,连续制备10批狂犬病疫苗原液。经过滤及浓缩后加入β-丙内酯,于2~8℃灭活24 h,获得病毒灭活液。上样至装载复合凝胶Capto Core700的纯化柱进行层析纯化,并按《中国药典》三部(2015版)的方法检测宿主细胞蛋白去除率、宿主细胞DNA去除率、狂犬病病毒糖蛋白回收率及总蛋白去除率。同时与传统Sepharose系列凝胶纯化方法进行比较。结果 10批疫苗纯化液的宿主细胞蛋白去除率为58.3%~63.2%,宿主细胞DNA去除率均>90%,糖蛋白回收率范围为52.3%~74.5%,蛋白去除率范围为7.22%~11.76%。与传统Sepharose系列凝胶纯化方法比较,差异较小,且Capto Core700的上样量为3倍柱体积,高于Sepharose凝胶(15%)。结论 Capto Core700凝胶可有效去除狂犬病疫苗中的杂质,缩短了纯化工艺时间。

Capto Core 400和Sepharose 6FF在Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化工艺中的应用比较

目的:分别用新型复合型层析介质Capto Core 400和传统介质Sepharose 6FF纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒(Sabin strain poliovirus,sPV)去除宿主细胞蛋白(hostcell protein,HCP)和DNA,并且比较纯化结果及工艺参数。方法:用Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Vero细胞培养的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV浓缩液。分别检测纯化后sPV的D抗原含量、HCP残留量和DNA残留量,计算D抗原回收率、HCP和DNA去除率,并用t检验分析差异。结果:Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV的D抗原回收率差异均无统计学意义(t值分别为1.09、1.08、1.02,P值均>0.05),但前者的Vero细胞HCP(t值分别为3.15、3.23、3.54)和DNA去除率均高于后者(t值分别为3.41、3.25、3.62),且差异有统计学意义(P值均<0.05)。Capto Core 400与Sepharose 6FF的介质使用体积比值为0.05,上样后纯化时间比值为0.04,工作缓冲液使用量比值为0.25,工艺线性流速比值为10,每升介质上样量比值为20,最大耐压力比值为2。结论:对比Sepharose 6FF,Capto Core 400可以更有效地去除Vero细胞HCP与DNA,各个工艺参数得到了优化,提高了sPV层析纯化的工作效率,并节约了时间和成本。

不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究

目的分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液,并比较分离纯化效果。方法用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液,透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态;分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion,SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA,HCD)含量,计算病毒抗原回收率和杂质去除率;用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性,并用t检验分析两种层析介质纯化效果差异。结果Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态;两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义(P>0.05),但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者,且差异有统计学意义(P<0.05);动物实验表明两种层析介质纯化的病毒样品均具有良好的免疫原性。结论相对于Sepharose 4FF层析介质,Capto Core700在保证病毒抗原蛋白回收率的基础上可以更有效地去除HCP、HCD和总蛋白质等工艺相关杂质。本研究为MDCK细胞生产H5N1型流感病毒疫苗纯化工艺开发提供了参考。

层析法去除A群流脑多糖疫苗粗糖中杂蛋白

目的:建立用层析法去除脑脊髓膜炎球菌A群荚膜多糖样品中的杂蛋白的方法,以替代传统的苯酚抽提。方法:A群流脑多糖粗糖经过新型多模式离子交换填料Capto adhere,使用低盐上样高盐洗脱,洗脱的目的峰再经过Sephardex G-25凝胶过滤脱盐换成水,即为流脑多糖精糖原液。结果:采用上述方法制备的精制多糖样品中杂蛋白占固总的比例低于0.2%,符合WHO现行规程中的杂蛋白比例低于1%的要求,核酸、内毒素等生化指标均符合现行规程,整个层析过程的回收率大于65%。结论:层析法去除A群流脑多糖粗糖中的杂蛋白是有效的,比传统的苯酚抽提的方法更有利于环保,易于操作,易于放大。