水蛭素促尿激酶纤溶作用研究

目的研究水蛭素对尿激酶诱导的纤溶作用的影响,并分析可能的机制。方法采用尿激酶为纤溶激酶,复钙柠檬酸钠抗凝血浆为纤溶酶原来源的体外溶栓模型,通过测定纤溶产物D-D imm er生成量,微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,比较水蛭素与肝素对纤溶的影响。运用土豆羧肽酶抑制剂(CPI)对TAFIa的专一性抑制作用,分析水蛭素与肝素对TAFI活化的影响。结果水蛭素组D-D imm er较肝素组高(P<0.01),水蛭素加CPI组较水蛭素组更高(P<0.01);微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,肝素组有明显的纤溶停止和血栓再形成倾向,水蛭素组则可观察到明显的溶栓现象,水蛭素加CPI组效果最好。结论对尿激酶诱导的纤溶,水蛭素比肝素有更好的间接促纤溶作用,其原因主要是水蛭素能有效抑制再次血凝的发生,减少了尿激酶和纤溶酶原的短暂性耗竭。在这一过程中,水蛭素不能彻底抑制TAFI活化,表明对TAFI活化的抑制可能不是水蛭素促尿激酶纤溶作用的主要原因。

反相高效液相色谱法测定土豆羧肽酶抑制剂

建立土豆羧肽酶抑制剂的反相高效液相色谱测定方法。采用80%乙醇进行样品前处理,上C8柱,以乙腈-水为流动相作梯度洗脱,检测波长280nm。土豆羧肽酶抑制剂在35%～40%的乙腈区间内被洗脱下来,在10～1000mg/L时,其峰面积与浓度呈良好的线性关系,R2=0.9982,加标回收率101.3%。该方法适用于土豆及其它植物粗提液中土豆羧肽酶抑制剂的定量分析及分离纯化过程的监控。

马铃薯中羧肽酶抑制剂的放射免疫分析

从马铃薯中提取、纯化了羧肽酶抑制剂(CPI),免疫家兔后产生CPI抗血清。用氯胺-T法制备125I-CPI,采用双抗体聚乙二醇混合法建立了CPI放射免疫分析方法,批内和批间RSD分别为10.2%和7.4%,检测灵敏度为1.5μg/L,平均回收率104%,ED50为16.4μg/L。

一种快速分离纯化土豆中羧肽酶抑制剂的方法

土豆中含有一种羧肽酶抑制剂(carboxypeptidase inhibitor,CPI),它极有可能成为一种辅助溶栓药物,因此建立一条土豆中CPI的快速分离纯化路线是很有必要的。土豆去皮匀浆后,所得CPI粗提液经离子交换和分子筛层析得到纯品。产品通过放射免疫分析和Lowry法定蛋白,其相对纯度达到89.38%,320 g土豆收获19.92 mg CPI,回收率达到50%左右,提取周期小于3 d,整个工艺路线为CPI的产业化奠定了基础。