支气管肺泡灌洗液脱落细胞端粒酶hTERT基因表达的检测

背景与目的:肺癌患者中端粒酶活性常呈阳性,常规检测端粒酶活性的方法易发生假阳性,端粒酶hTERT基因表达水平可反映端粒酶活性高低。本研究采用相对定量PT-PCR法检测肺癌支气管肺泡灌洗液脱落细胞端粒酶hTERT的表达情况,为肺癌的早期诊断、鉴别诊断提供帮助。方法:采用纤维支气管镜收集了20例可疑肺肿瘤患者支气管肺泡灌洗液,对脱落细胞分别送病理检测和RT-PCR相对定量法检测端粒酶hTERT基因表达,并随访术后病理检测情况,同时检测10例非肺癌病人的支气管肺泡灌洗液标本作为对照。结果:20例可疑肺癌经术后病理检测证实有19例为不同类型的肺癌,1例为炎性假瘤。在19例肺癌的支气管肺泡灌洗液中16例检出不同程度的端粒酶hTERT基因表达,细胞病理检测仅发现11例,阳性率分别为84.2%和57.9%,两者有显著性差异(P<0.01)。10例非肺癌病人的支气管肺泡灌洗液中均无端粒酶hTERT基因表达。结论:采用RT-PCR方法检测支气管肺泡灌洗液中端粒酶hTERT基因表达,较细胞病理检测有更高的敏感性,有助于肺癌的早期诊断和鉴别诊断。

肺癌耐药相关基因在肺癌组织和肺癌细胞株中的表达

背景与目的:我们已经通过抑制消减杂交技术发现了一条新的长494bp的肺癌耐药相关基因片段,并克隆了它的全长cDNA序列。本研究旨在研究该肺癌耐药相关基因(lungcancerdrugresistance-relatedgene,LCDRG)在肺癌组织、癌旁组织及5种肺癌细胞株中的表达。方法:应用半定量RT-PCR检测38例肺癌组织、12例癌旁组织和5种肺癌细胞株中该基因的表达。结果:肺癌组织中LCDRGmRNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),但在肺腺癌和鳞癌之间差异无统计学意义。该基因在肺腺癌细胞株SPC-A-1和A549、大细胞肺癌细胞株H460、小细胞肺癌细胞株H446和SH77中的表达依次递减。结论:LCDRG是一条肺癌相关基因,该基因可能与肺癌的发生、发展密切相关。

肺腺癌及鳞癌MDR1-mRNA和MRP-mRNA表达的研究

目的 :观察 30例肺癌组织及癌旁肺组织MDR1 mRNA及MRP mRNA的表达。方法 :RT PCR方法。结果 :MDR1 mRNA在肺癌组织及癌旁肺组织的表达阳性率分别为 40 0 %及 16 6 7% (P =0 0 45 ) ,MDR1 mRNA的表达与细胞分化程度、临床分期及病理类型无关 ;MRP mRNA在肺癌组织及癌旁肺组织的表达分别为43 33%及 2 6 6 7% ,MRP mRNA的表达与细胞分化程度有关 ,低分化者MRP的表达明显高于中高分化者 ,P =0 0 3。腺癌的表达 (6 2 5 % )高于鳞癌 (2 1 43% ) ,P =0 0 5 8。MRP mRNA的表达与临床分期无关 ,P =0 5 11。 30例肺癌组织中MDR1 mRNA与MRP mRNA共同表达者 8例 (2 6 6 7% ) ,两者均无表达者 13例 (43 33% ) ,两者的一致性达 70 % ,仅表达MRP mRNA者 5例 ,仅表达MDR1 mRNA者 4例。结论 :MDR1 mRNA及MRP mRNA在肺癌的耐药中占有重要作用 ,两者在肺癌表达的一致性达 70 %。

黑色素瘤抗原基因MAGE-1、MAGE-3和抑癌基因p53在肺癌中表达的研究

目的:分析肺癌组织MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因表达及其相互关系。方法:取肺癌组织标本30例,另取癌周组织作为对照。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因的表达。结果:MAGE-1,MAGE-3在肺癌中有较高表达,MAGE-3的表达高于MAGE-1的表达。p53在肺癌中表达较低,在正常组织中表达较高;MAGE-1在肺腺癌中表达较鳞癌高,MAGE-3在肺鳞癌中表达较高;MAGE-1,MAGE-3的表达可能与肿瘤分化程度无关;p53在小细胞肺癌中的表达有待进一步研究;p53与MAGE在体内表达成负相关。结论:MAGE-1、MAGE-3和p53在肺癌组织与正常组织中有不同的表达,MAGE-1、MAGE-3的表达与病理类型有关,与肿瘤分化无关。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

甲基化在肺癌中的意义

目的探讨基因T-钙黏蛋白(CDH13)在40例癌组织,40例的癌旁组织标本和非肺癌良性肺切除组织标本15例作为对照的表达的临床意义,进一步研究其基因异常甲基化与肺癌的相关性。方法采用特异性甲基化PCR(MSP)检测该基因在肺癌组织中异常甲基化的水平。结果 1.在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为32.5%、7.5%、6.7%,有统计学意义(P<0.05)。2.CDH13基因异常甲基化和CDH13的表达水平呈负相关性(r=-0.520).3.CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化阳性率在肺癌组织中显著高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调。结论在肺癌组织中CDH13基因异常甲基化率明显升高且有临床诊断意义,CDH13基因在癌组织中的异常甲基化水平将有望成为肺癌新的治疗靶点。

蛋白激酶CK2-β在涎腺腺样囊性癌肺转移中的作用

目的 :探讨蛋白激酶CK2 β(PKCK2 β)在涎腺腺样囊性癌 (SACC)肺转移细胞中的表达及其与转移的关系。方法 :利用RT PCR方法进行mRNA表达分析。结果 :在SACC肺转移细胞中 ,随着PKCK2 β被抑制程度的提高 ,nm2 3 H1的表达增加 ,肿瘤转移能力下降。结论 :PKCK2 β的表达与SACC的肺转移呈正相关。

非小细胞肺癌组织中抑癌基因APC表达的研究

目的探讨非小细胞肺癌组织中APC基因mRNA转录水平。方法采用RT-PCR技术,以SybrgreenⅠ为荧光染料,beta-actin基因为内参照,对17例临床确诊的非小细胞肺癌病例的正常肺组织和肿瘤组织的APC基因mRNA进行实时荧光定量检测。计算每份标本Ct(APC)/Ct(beta-actin)比值,比较每份病例正常肺组织和肿瘤组织比值之间的差值(d),配对t检验。结果在17例病例中,APCmRNA在肺癌组织中的表达较正常肺组织明显降低(d=-0.29,P<0.05)。结论肺癌患者正常肺组织和肿瘤组织APC基因转录存在明显差异,肺癌组织APC基因转录水平降低。

^(18)F-FDG PET/CT在非小细胞肺癌三维适形放疗靶区勾画中的作用

【目的】探讨18F-FDG PET/CT在非小细胞肺癌(NSCLC)三维适形放疗靶区勾画中的作用。【方法】对48例经病理学证实的NSCLC患者行18F-FDG PET/CT检查。由两位放疗科医师分别根据采集到的单纯CT和PET/CT融合图像勾画三维适形放疗靶区,利用Topslane治疗计划系统计算勾画靶区范围,分别称为CT-GTV1、PET-GTV1、CT-GTV2、PET-GTV2。比较四者异同。对PET/CT勾画的靶区进行计划设计并实施放疗,疗后进行随访。【结果】3例因发现远处转移而未采取根治性放疗,其余45例均完成放疗。平均CT-GTV1为179.3 cm3,平均CT-GTV2为197.0 cm3,利用配对t检验分析发现二者存在统计学差异(P=0.026)。平均PET-GTV1为161.7 cm3,平均PET-GTV2为162.2 cm3,未见统计学差异(P=0.496)。放疗医师1勾画结果中29例(64.4%)PET-GTV较CT-GTV小,平均减少45.3 cm3,其余16例(35.6%)PET-GTV较CT-GTV大,平均增大30.7 cm3。放疗医师2勾画结果中33例(73.3%)PET-GTV较CT-GTV小,平均减少58.4 cm3,其余12例(26.7%)PET-GTV较CT-GTV大,平均增大28.8 cm3。随访结果:肿瘤局部控制率为71.1%,11例出现了远处转移,8例出现了局部复发。1年生存率为66.6%。3例发生Ⅰ~Ⅱ级放射性肺损伤。【结论】PET/CT减少了由于勾画者不同而引起的靶区差异,使靶区勾画更为容易和准确。精确靶区放疗保证了肿瘤局控率的同时,有效的减少了正常组织受量,有着重要的临床意义。

同期放化疗与序贯放化疗治疗诱导化疗无效局限期NSCLC患者的疗效比较

【目的】探讨同期放化疗与序贯放化疗对诱导化疗无效的局限期非小细胞肺癌（NSCLC）患者无进展生存期的影响。【方法】本院收治的108例诱导化疗无效的局限期NSCLC患者随机分为两组，每组54例。A组给予同期放化疗，B组给予序贯放化疗，比较两组患者的不良反应发生率、近期治疗效果、中位生存期以及治疗三个周期后的生活质量评分等参数指标。【结果】①A组疗效远远高于B组（P〈0．05）；②A组患者中位无进展生存时间显著高于B组（P〈0．05）；③A组不良反应发生率显著低于B组（P〈O．05）；④治疗前，两组患者的生活质量评分比较差异无显著性（P〉0．05）；治疗三个周期后，A组患者的生活质量评分显著高于B组（P〈0．05）。【结论】同期放化疗能够显著延长诱导化疗无效的局限期NSCLC患者的生存时间，不良反应较少且显著提高患者生活质量。

序贯化放疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

【目的】探讨吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌3周方案并序贯化放疗的疗效和不良反应。【方法】2000年1月至2005年10月入选经病理和细胞学证实的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者；既往未进行化疗和放疗，临床上有可测量病灶（根据WHO标准），ECOG评分为0分～2分，肝肾功能基本正常。均给予吉西他滨和顺铂的联合化疗并序贯化放疗方案。按照WHO的标准评价疗效和不良反应，并随访生存期。【结果】共入组43例患者，其中39例可评价疗效，其中19例部分缓解（48．72％）、11例病情稳定（28．21％）和9例疾病进展（23．07％）。中位生存期为10．1个月，范围为3．7～21、4个月。主要的不良反应为血液学毒性，表现为白细胞下降、中性粒细胞下降、血小板下降和血红蛋白下降，其次为消化道症状。【结论】吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌3周方案并序贯化放疗是晚期NSCLC的标准一线化疗方案之一，患者可很好耐受。

三维适形放射治疗非小细胞肺癌的等效生物剂量研究

[目的]探讨三维适形放射治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的适宜等效生物剂量.[方法]将100例行三维适形放疗的周围型NSCLC患者随机分为A、B、C三组:A组为等效生物剂量在65～75 Gy之间,平均72Gy;B组为等效生物剂量在76～85 Gy之间,平均80 Gy;C组为等效生物剂量在86～100 Gy之间,平均90Gy.所有患者于放疗结束后应用NP方案化疗4周期.按WHO制定的肿瘤客观疗效评价标准对三组患者疗效进行观察比较;按RTOG和EORTC制定的早晚期放射损伤分级标准对早晚期放射反应进行评价.放疗结束后每3个月随访复查1次至1年.[结果]100例患者均顺利完成治疗.3、6、9、12个月复查有效率(CR+PR)A组分别为86.67%、83.33%、63.33%、56.67%;B组分别为88.57%、88.57%、80.00%、71.43%;C组分别为94.30%、97.14%、97.14%、91.43%.三组患者3、6个月有效率比较差异无显著性.9个月有效率C组与A组比较差异有显著性.12个月有效率C组与A组、B组比较均差异有显著性.早晚期放射反应三组之间比较均无明显差异,严重放射反应罕见.[结论]三维适形放射治疗NSCLC的放射反应较轻,但是放疗剂量过低易导致局部复发率增高.提示三维适形放射治疗NSCLC的适宜等效生物剂量应在90Gy左右.

检测EML4-ALK融合基因对肺腺癌患者的临床意义

目的探讨检测EML4-ALK融合基因对肺腺癌患者的临床意义。方法收集2012年7至12月手术或活检肺腺癌组织标本37例,所有标本均经病理证实为腺癌,用RT-PCR方法检测EML4-ALK融合基因的表达,设计9种探针检测EML4-ALK融合基因最常见的9种类型,并随访阳性息者的治疗结果。结果37例腺癌标本中,1例检出EML4-ALK融合基因表达阳性,并经测序法证实为1型变异,检出率2.70%。为女性患者,左上肺肿块,T_1N_0N_0,行左肺上叶肺癌根治术,术后给予克唑替尼,随访6个月无复发。结论使用RT-PCR结合测序是一种快速、简便、容易推广的EML4-ALK融合基因检测技术,可以在肺腺癌患者检测中推广使用。

肺癌组织及外周血多药耐药基因相关蛋白的表达及其相关性研究

目的检测多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药蛋白(LRP)在肺癌组织及外周血中的表达及其相关性,探讨其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例患者肺癌组织及外周血的MRP、LRP mRNA的表达水平。结果肺癌组织及外周血,MRP mRNA的阳性表达率分别为74.5%(35/47)和70.2%(33/47),两者之间呈显著相关(r=0.686,P<0.01);LRP mRNA的阳性表达率分别为82.9%(39/47),76.6%(36/47),两者之间亦呈显著相关(r=0.368,P<0.01);肺癌组织MRP mRNA和LRP mRNA的表达表现为正相关(r=0.384,P<0.01)。结论肺癌患者MRP、LRP mRNA的表达密切相关,检测外周血中MRP、LRP mRNA表达能间接反映癌组织对化疗药物的耐受性。

晚期肺鳞癌超分割放疗结合化疗的Ⅰ/Ⅱ期临床研究

目的:探讨晚期非小细胞肺癌超分割放疗结合全身化疗的疗效和适应证;方法:64例晚期非小细胞肺鳞癌患者随机分为超分割放疗结合化疗（A组,n=33）和单纯超分割放疗（B组,n=31）二组治疗。资料分析时依据影响本组生存的危险因子将入组病例回顾性评估为“高危”和“低危”二类,“高危”类33例中,接受了超分割放疗结合化疗者16例（C组）,仅接受单纯超分割放疗者17例（D组）;“低危”类31例中,接受超分割放疗结合化疗者17例（E组）和单纯超分割放疗者14例（F组）。随访资料采用“SPSS7.5”统计学软件分析。结果:A组的13、36和47个月生存率分别为56.25％、26.5和13.26％,中位生存期（18.00±6.19）月,B组的13、36和47个月生存率分别为47.23％、22.14％和11.07％,（中位生存期13.00±2.43月,P=0.4563）;E组的15和47个月生存率分别为43.65％和21.83％,（中位生存期15.00±4.73个月）,F组的15和47个月生存率分别为60.00％和30.00％,中位生存期（47.00±23.83）月,（P=0.2775）:C组的10、24和47个月生存率分别为57.14％、38.10％和0.00％。（中位生存期23.00±14.52月）,显著高于D组的36.10％、7.22％和0.00％,（中位生存期8.00±0.88月）,（P=0.0441）。结论:放疗结合化疗有可能延长“高危”

肺特异性X蛋白细胞角蛋白19mRNA在NSCLC外周血中的表达及其对微转移的诊断价值

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中肺特异性X蛋白(Lunx)mRNA、细胞角蛋白19(CK19)mRNA的表达对NSCLC微转移的诊断价值及临床意义。方法采用荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别对50例NSCLC患者、15例肺良性疾病(BLD)患者和10名健康人外周血中Lunx mRNA和CK19mRNA的表达进行检测分析。结果 Lunx mRNA、CK19mRNA在NSCLC外周血中的阳性表达率分别70%、68%,与其他2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。2种标志物共同阳性表达者有28例,阳性率为56%,2种标志物检测比较,差异无统计学意义。Lunx mRNA、CK19mRNA在NSCLC患者阳性表达率与年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型均无关(P>0.05),而与不同临床分期、组织分化程度及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 Lunx mRNA、CK19mRNA的高表达可能与NSCLC的微转移有关,可作为检测NSCLC微转移的良好指标,联合检测有助于提高检测的准确度。

muc-1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨muc-1基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及其与淋巴结转移的相关性和临床意义。方法:应用RT-PCR方法检测36例NSCLC组织和10例正常肺组织中muc-1基因的表达情况。结果:36例NSCLC组织中有19例muc-1基因阳性表达,阳性表达率为52.7%,正常肺组织无muc-1表达。muc-1 mRNA在NSCLC组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、病理分级、TNM分期及肿瘤大小无关(P>0.05),与淋巴结转移有关(χ2=6.733,P<0.05)。有淋巴结转移的NSCLC组织中muc-1基因阳性表达率高(N010%,N158.82%,N288.9%)。结论:muc-1基因阳性表达的NSCLC患者淋巴结转移率高,检测muc-1基因表达对NSCLC患者的预后和术后综合治疗具有指导性作用。

肺鳞癌中FHIT基因缺失的研究

目的：检测位于人染色体３ｐ１４．２区的ＦＨＩＴ基因在肺鳞癌中的缺失率，探讨ＦＨＩＴ基因在国人肺鳞癌中的作用。方法：收集手术切除２１例肺鳞癌及对应正常肺组织标本，应用ＲＴ－ＰＣＲ及ＤＮＡ测序技术检测ＦＨＩＴ基因的缺失情况。结果：２１例正常肺组织中均有ＦＨＩＴ基因的完整表达，１０例（４７．６％）肺鳞癌标本中检测出ＦＨＩＴ基因ｍＲＮＡ转录本的异常表达，经测序证实为由于ＦＨＩＴ基因多个外显子缺失所致。结论：首次在国人中证实，位于３ｐ１４．２的ＦＨＩＴ基因在肺鳞癌中存在较高的缺失率，提示ＦＨＩＴ基因为候选抑癌基因，在肺鳞癌的发生发展中起重要作用。

血浆EGFR水平与接受放疗的非小细胞肺癌患者总生存时间相关性研究

[目的]探讨接受胸部放疗的非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中可溶性表皮生长因子受体（EGFR）水平与患者总生存时间（OS）的相关性。[方法]选择111例局部晚期的NSCLC患者，均接受单纯胸部放疗或者同步放化疗，并于放疗开始前采集外周静脉血，采用ELISA法检测血浆可溶性EGFR水平。治疗完成后定期随访生存状况。[结果]所有患者放疗前血浆可溶性EGFR水平为34．9（17．5～70．2）ng／mL，高于此中位浓度的患者的中位OS为30．0个月，低于此中位浓度的患者的中位OS为10．1个月，EGFR水平高者中位OS显著高于水平低者，差异具有统计学意义（P〈0．01）。多因素分析显示不吸烟／既往吸烟，腺癌，同步放化疗及基线EGFR≥34．9ng／mL是OS延长的独立预后因素（均P〈0．05）。[结论]血浆可溶性EGFR可作为判断接受胸部放疗的局部晚期NSCLC患者预后的一项生物学标记物。

同步放化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗对NSCLC患者的预后及其肿瘤标志物的影响

【目的】探讨同步放化疗联合树突状细胞-细胞因子诱导的自然杀伤(DC-CIK)细胞免疫治疗对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的预后及肿瘤标志物水平的影响。【方法】72例NSCLC患者,随机分为对照组和观察组,每组36例。对照组采用TP方案(紫杉醇+顺铂)联合调强适形放疗(IMRT)治疗,观察组在对照组基础上联合DC-CIK细胞免疫治疗。比较两组疗效及治疗前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+),血清微小RNA-137(miR-137)、微小RNA-29a(miR-29a)和血清肿瘤标志物[糖类抗原125(CA-125)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]水平的变化,比较两组不良反应发生率。【结果】观察组客观缓解率(RR)为94.44%(34/36),高于对照组的77.78%(28/36)(P<0.05)。两组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较治疗前升高(P<0.05),CD8+较治疗前降低(P<0.05);且观察组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均高于对照组(P<0.05),CD8+与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后miR-137、miR-29a和CA-125、CEA、CYFRA21-1水平较治疗前降低(P<0.05),且观察组治疗后各指标水平低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】同步放化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗可提高NSCLC患者疗效,下调miR-137、miR-29a表达,改善患者免疫功能及血清肿瘤标志物水平,且不良反应发生风险低,值得临床推广。