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年轻干细胞抗原-1阳性骨髓干细胞调控年老小鼠心脏成纤维细胞凋亡的分子机制
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作者 吕饶 于佳迪 +5 位作者 李柳蓁 湛楚蓝 赵立越 李月亮 董珺 黎佼 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第17期2369-2374,共6页
目的探讨Sca-1骨髓干细胞对小鼠心脏成纤维细胞(CFC)凋亡的影响,阐明年轻Sca-1骨髓干细胞调控心脏成纤维细胞凋亡的潜在分子机制及其优势。方法比较年轻与年老心脏成纤维细胞在缺氧条件下,细胞凋亡及细胞存活率。将Sca-1骨髓干细胞与年... 目的探讨Sca-1骨髓干细胞对小鼠心脏成纤维细胞(CFC)凋亡的影响,阐明年轻Sca-1骨髓干细胞调控心脏成纤维细胞凋亡的潜在分子机制及其优势。方法比较年轻与年老心脏成纤维细胞在缺氧条件下,细胞凋亡及细胞存活率。将Sca-1骨髓干细胞与年老心脏成纤维细胞共培养。通过TUNEL染色、q RT-PCR、Western Blot、CCK8试剂盒分别检测年轻或年老Sca-1骨髓干细胞对年老心脏成纤维细胞凋亡及存活的影响。通过qRT-PCR、ELISA检测年轻与年老小鼠Sca-1骨髓干细胞旁分泌生长因子并鉴定其功能。结果随年龄增加,年老小鼠心脏成纤维细胞凋亡增加,细胞存活减少。与年老细胞相比,年轻Sca-1骨髓干细胞可明显减少年老心脏成纤维细胞凋亡,增加细胞存活。机制研究发现,与年老细胞相比,年轻Sca-1骨髓干细胞可旁分泌更多的生长和分化因子5(GDF5)(P<0.05)。中和GDF5后,使年轻Sca-1骨髓干细胞失去对年老成纤维细胞凋亡及存活的调控作用。结论年轻Sca-1骨髓干细胞可通过旁分泌GDF5减少年老心脏成纤维细胞凋亡。 展开更多
关键词 干细胞 心脏成纤维细胞 凋亡 细胞存活 生长因子 年轻干细胞抗原-1
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心康冲剂含药血清调控GAS5-miR21对心肌成纤维细胞增殖的影响
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作者 刘蓉芳 郭冰 +2 位作者 余意 李园 王敏 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第9期102-109,共8页
目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制。方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢... 目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制。方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢病毒、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)沉默慢病毒后,分别用心康冲剂含药血清干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-qPCR检测GAS5、miR-2l、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)mRNA表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低;mi R-21过表达组和GAS5沉默组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-21过表达组、GAS5沉默组比较,miR-21过表达+心康冲剂组、GAS5沉默+心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 心康冲剂含药血清可抑制沉默GAS5所致miR-21、Akt表达升高,对抗过表达miR-21所致GAS5和PTEN表达降低,抑制CFs增殖周期,促进GAS5发挥“分子海绵”作用,改善血管紧张素Ⅱ诱导的CFs过度增殖。 展开更多
关键词 心肌纤维化 细胞周期 心康冲剂 生长阻滞特异性转录本5 微小RNA-21 心肌成纤维细胞
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大蒜素对高糖环境人心脏成纤维细胞的影响
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作者 陈晓佩 黄虹 +2 位作者 王雅珍 王国付 吴天凤 《心脑血管病防治》 2023年第9期11-14,共4页
目的观察大蒜素对高糖环境人心脏成纤维细胞(HCFs)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法贴壁法培养HCFs,体外建立高糖诱导的HCFs增殖模型,分为对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(25 mmol/L)以及高糖联合不同浓度的大蒜素组(分别为2.5μg/mL、5... 目的观察大蒜素对高糖环境人心脏成纤维细胞(HCFs)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法贴壁法培养HCFs,体外建立高糖诱导的HCFs增殖模型,分为对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(25 mmol/L)以及高糖联合不同浓度的大蒜素组(分别为2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)。应用MTT比色、瑞氏-吉姆萨染色倒置生物显微镜、Hochest 33258染色荧光显微镜、流式细胞分析技术、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性测定、Western blot检测等方法观察大蒜素对HCFs增殖和凋亡的作用。结果与对照组比较,高糖组细胞增殖增加,B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)增加,Bcl-2相关X蛋白(Bax)降低。与高糖组比较,大蒜素各组细胞增殖降低,细胞凋亡率及Casepas-3水平提高,高糖联合10μg/mL大蒜素组及高糖联合20μg/mL大蒜素组Bcl-2减低,Bax增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度大蒜素处理高糖环境HCFs 72 h,可见到细胞增殖受到抑制,细胞数较高糖组有所减少,染色质浓缩、边集、碎裂,凋亡细胞增多。结论大蒜素抑制高糖环境HCFs的增殖,促进其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2、上调Bax、增强Caspase-3蛋白活性有关。 展开更多
关键词 大蒜素 高血糖 成纤维细胞 心肌细胞 细胞增殖 凋亡
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EFFECTS OF EPCs OR b-FGF INTRAMYOCARDIAL INFUSION ON CARDIAC FUNCTION AND NEOVASCULARIZATION FOR DILATED CARDIOMYOPATHY RATS
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作者 张昕 魏盟 燕晓宇 《Journal of Shanghai Second Medical University(Foreign Language Edition)》 2008年第2期95-101,共7页
Objective To compare the different effects of endothelia progenitor cells ( EPCs ) or basic fibroblast growth factor (b-FGF) intromyocardial infusion on cardiac function and neovascularization for dilated cardiomy... Objective To compare the different effects of endothelia progenitor cells ( EPCs ) or basic fibroblast growth factor (b-FGF) intromyocardial infusion on cardiac function and neovascularization for dilated cardiomyopathy( DCM) rats. Methods Fifty adult female rats received inguinal subcutaneous injections of isoproterenol (ISO, 250 mg/kg) for induction of DCM. Four weeks later, the model rats were randomly divided into EPCs group, b-FGF group and control group. The 2×106 EPCs ( resolved in 100 μL PBS) , 100 μL b-FGF ( lO0 μg/mL ) and 100 μL PBS were evenly transplanted into the myocardium of EPCs group, b-FGF group and control group, respectively. Three months later, echocardiographic examination and regional myocardial blood flow (RMBF) measurement were performed. EPCs were traced by fluorescence in situ hybridization (FISH). The protein and mRNA expression of b-FGF in each group was measured by ELISA assay and reverse transcription-polymerase chain reaction ( RT-PCR ) . Results Three months after transplantation, sry positive cells were detected only in EPCs group. The cardiac function as well as RMBF was significantly improved in EPCs group compared with b-FGF group or control group. There was higher capillary density in EPCs group. The protein and mRNA expression of b-FGF was stronger than b-FGF group and control group. Conclusion Transplantation of EPCs can improve cardiac function, induce neovascularization and increase RMBF for DCM rats. The treatment with EPCs has better effect than administration of b-FGF alone. 展开更多
关键词 endothelia progenitor cell basic fibroblast growth factor dilated cardiomyopathy neovascularization cardiac function
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高糖环境中雄激素受体对心肌成纤维细胞增殖和脂质合成能力的影响 被引量:1
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作者 温馨 周洋 +4 位作者 林丽婵 刘芷言 宋凯 陶辉 臧洪梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2274-2280,共7页
目的探究雄激素受体(androgen receptor,AR)对高糖环境下心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和脂质合成能力的影响及可能的分子机制。方法解剖新生乳鼠的心脏进行CFs原代培养,镜下观察CFs生长状态,并通过波形蛋白的免疫荧光... 目的探究雄激素受体(androgen receptor,AR)对高糖环境下心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和脂质合成能力的影响及可能的分子机制。方法解剖新生乳鼠的心脏进行CFs原代培养,镜下观察CFs生长状态,并通过波形蛋白的免疫荧光鉴定细胞属性。细胞贴壁后分为空白对照组、高糖模型组、阴性对照组,过表达AR组,除空白对照组葡萄糖浓度为5.5 mmol·L^(-1)外,其余各组葡萄糖浓度均为33.0 mmol·L^(-1)。培养24 h后通过Western blot和RT-qPCR检测AR、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、PCNA、cyclin D1、α-SMA、collagenⅠ的表达情况。油红O和CCK-8分别检测脂质合成和细胞增殖能力的改变。结果与空白对照组相比,高糖模型组中CFs的脂质合成和增殖能力增强。Western blot和RT-qPCR结果显示AR的蛋白和mRNA的表达降低,而FASN、增殖标志蛋白PCNA、cyclin D1和纤维化标志蛋白α-SMA、collagenⅠ的蛋白和mRNA的表达增加。在过表达AR质粒载体转染高糖模型组CFs后,过表达组CFs中的FASN、PCNA、cyclin D1、α-SMA、collagenⅠ蛋白和mRNA同空载体组相比表达下降。同时,油红O染色和CCK-8结果分别表明过表达AR组的脂质合成和增殖能力相比空载体组减弱。结论高糖环境下心肌成纤维细胞的增殖和脂质合成能力增强,其作用机制可能AR调控脂质合成有关。 展开更多
关键词 脂质合成 心肌纤维化 细胞增殖 心肌成纤维细胞 细胞代谢 雄激素受体
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简易灌注装置同时提取成年小鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞 被引量:2
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作者 师雷 金振晓 +7 位作者 谭延振 张冰 崔君 冯乐乐 宋宇杰 刘英英 张苗 易蔚 《中国体外循环杂志》 2023年第3期172-178,共7页
目的简化Langendorff灌注装置,并且同时提取成年小鼠心肌细胞(AMCM)和心脏成纤维细胞(AMCF)用于实验。方法采用简易灌注装置进行成年小鼠主动脉逆行灌注,同时提取AMCM和AMCF。对其进行形态学观察,并分别通过L-苯肾上腺素(PE)和转化生长... 目的简化Langendorff灌注装置,并且同时提取成年小鼠心肌细胞(AMCM)和心脏成纤维细胞(AMCF)用于实验。方法采用简易灌注装置进行成年小鼠主动脉逆行灌注,同时提取AMCM和AMCF。对其进行形态学观察,并分别通过L-苯肾上腺素(PE)和转化生长因子(TGF)-β1刺激诱导AMCM肥厚和AMCF向肌成纤维细胞分化,以评估其生物学功能。结果复钙后耐钙杆状AMCM占比(62.65±3.12)%,并且可以在体外培养超过1周,与对照组相比,PE刺激后AMCMβ-肌球蛋白重链、心钠肽蛋白表达水平显著升高(P<0.05),杆状AMCM长宽比显著缩小(P<0.05)。AMCF纯度较高,在体外可以传代3~4次,与对照组相比,TGF-β1刺激后AMCF Collagen I、Collagen III、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平显著升高(P<0.05)和荧光强度显著增强(P<0.05)。结论简易灌注装置可以简单、稳定、高效地同时提取满足实验需求、具备生物学功能的AMCM和AMCF。 展开更多
关键词 Langendorff灌注装置 心脏灌注 成年小鼠心肌细胞 成年小鼠心脏成纤维细胞 细胞提取 细胞培养
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低温缺氧/复氧后大鼠心肌成纤维细胞对心肌H9c2细胞间通讯的影响
7
作者 佟睿 高鸿 +5 位作者 安丽 易菁 曹莹 蒙富雪 吴学艳 马艳燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期1086-1091,共6页
目的观察低温缺氧/复氧(hypothermia hypoxia/reoxygen,H/R)后大鼠心肌成纤维细胞(rat cardiac fibroblasts,RCFs)对心肌H9c2细胞间通讯的影响并探讨其可能机制。方法将RCFs细胞与H9c2细胞以2:1数量比Transwell共培养后随机分为6组。其... 目的观察低温缺氧/复氧(hypothermia hypoxia/reoxygen,H/R)后大鼠心肌成纤维细胞(rat cardiac fibroblasts,RCFs)对心肌H9c2细胞间通讯的影响并探讨其可能机制。方法将RCFs细胞与H9c2细胞以2:1数量比Transwell共培养后随机分为6组。其中T+AngⅡ组及H/R⁃T+AngⅡ组加入1.5 nmol/L AngⅡ,T+ARB组及H/R⁃T+ARB组加入1 nmol/L缬沙坦。T组、T+AngⅡ组及T+ARB组进行正常培养,H/R⁃T组、H/R⁃T+AngⅡ及H/R⁃T+ARB组进行H/R处理。检测各组培养液中AngⅡ含量;H9c2细胞Cx43、ERK1/2表达量及磷酸化及细胞间通讯情况。结果与T组相比,H/R⁃T组及T+AngⅡ组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平降低(P<0.05),细胞间通讯减弱(P<0.05);T+ARB组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平增高(P<0.05),细胞间通讯增强(P<0.05)。与H/R⁃T组相比,H/R⁃T+AngⅡ组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平降低(P<0.05),细胞间通讯减弱(P<0.05);H/R⁃T+ARB组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平增加(P<0.05),细胞间通讯增强(P<0.05)。结论H/R处理后,RCFs细胞分泌增多的AngⅡ可能通过抑制H9c2细胞MAPK/ERK通路下调Cx43表达,导致H9c2细胞间通讯减弱。 展开更多
关键词 低温缺氧/复氧 心肌成纤维细胞 H9C2细胞 缝隙连接蛋白43 细胞间通讯
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GSTO1抑制TGFβ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和活化
8
作者 张彤 谢赛阳 +1 位作者 邓伟 唐其柱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期656-662,共7页
目的:研究谷胱甘肽S-转移酶ω1(GSTO1)在转化生长因子β(TGFβ)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法:分离乳大鼠心脏成纤维细胞并进行体外培养。采用含绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒质粒构建对照(Ad-GFP)或GSTO1过表达(Ad-GST... 目的:研究谷胱甘肽S-转移酶ω1(GSTO1)在转化生长因子β(TGFβ)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法:分离乳大鼠心脏成纤维细胞并进行体外培养。采用含绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒质粒构建对照(Ad-GFP)或GSTO1过表达(Ad-GSTO1)质粒并转染心脏成纤维细胞,再用大鼠TGFβ(rTGFβ)刺激细胞24 h,实验分为4组:Ad-GFP+PBS、Ad-GFP+rTGFβ、Ad-GSTO1+PBS和Ad-GSTO1+rTGFβ。运用qPCR和免疫荧光染色确定转染的有效性;Western blot检测GSTO1蛋白表达;划痕实验和EdU掺入实验评估细胞迁移和增殖;CCK-8实验评估细胞活力;Western blot和细胞免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)和纤连蛋白(FN)的表达水平,并检测心脏成纤维细胞内P38 MAPK和Smad3信号通路相关蛋白水平。结果:与Ad-GFP+rTGFβ组相比,GSTO1过表达抑制TGFβ诱导的心脏成纤维细胞增殖(P<0.05),降低TGFβ刺激后α-SMA、Col I和FN的表达水平(P<0.05),抑制P38 MAPK/Smad3信号通路激活(P<0.05)。结论:GSTO1过表达通过抑制P38 MAPK/Smad3信号通路而阻遏TGFβ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和活化。 展开更多
关键词 心肌纤维化 谷胱甘肽S-转移酶ω1 心脏成纤维细胞 转化生长因子β 细胞增殖
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乳兔心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定
9
作者 顾建军 朱业 +1 位作者 张维 顾翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期571-576,共6页
目的:探讨并建立乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。方法:选取新出生1 d的新西兰白兔,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,差速贴壁法分离和纯化心脏成纤维细胞;使用倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,绘制细胞生长曲线;采用CCK-8法... 目的:探讨并建立乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。方法:选取新出生1 d的新西兰白兔,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,差速贴壁法分离和纯化心脏成纤维细胞;使用倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,绘制细胞生长曲线;采用CCK-8法检测细胞活力;波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞纯度;Western blot法检测异丙肾上腺素刺激心脏成纤维细胞后Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。结果:差速贴壁90 min后在相差显微镜下可见部分成纤维细胞已贴壁生长;3 d后成纤维细胞数量较前增多,形态多样,多为不规则的多边形及扁平形;5 d时成纤维细胞数量显著增多(P<0.05),细胞形态趋于多样性,细胞间完全融合;细胞生长曲线类似“S”形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8实验结果显示在4~5 d细胞活力最强(P<0.05);给予第2代心脏成纤维细胞异丙肾上腺素刺激48 h后,Col I及α-SMA水平显著增加(P<0.05)。结论:本研究建立了乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。 展开更多
关键词 乳兔 原代培养 心脏成纤维细胞 细胞鉴定
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川芎嗪对溶血磷脂酸诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响 被引量:18
10
作者 蔡辉 修春英 +2 位作者 郭郡浩 沈思钰 赵智明 《医学研究生学报》 CAS 2008年第1期31-33,共3页
目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察... 目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响及川芎嗪的干预作用。结果:随着LPA浓度的升高,MTT比色法A490值呈上升趋势。CF分泌的胶原随着LPA浓度和作用时间的增加呈递增趋势。20μg/m l的川芎嗪作用48 h即能明显抑制LPA(10-6μmol/L)诱导的细胞增殖作用(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成作用,而川芎嗪能对其产生明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。 展开更多
关键词 溶血磷脂酸 川芎嗪 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原合成
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黄连素抗心脏纤维化作用及其机制 被引量:5
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作者 蔡少艾 胡明 +2 位作者 汤晓燕 陈美婷 罗承锋 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第3期337-339,共3页
目的观察黄连素对心脏纤维化的影响,探讨其可能机制。方法体外使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激心脏成纤维细胞,建立心脏纤维化细胞模型。采用不同浓度(10~90μmol/L)黄连素刺激,观察心脏成纤维细胞的活力、胶原Ⅲ和p38 MAPK蛋白表达... 目的观察黄连素对心脏纤维化的影响,探讨其可能机制。方法体外使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激心脏成纤维细胞,建立心脏纤维化细胞模型。采用不同浓度(10~90μmol/L)黄连素刺激,观察心脏成纤维细胞的活力、胶原Ⅲ和p38 MAPK蛋白表达水平。结果低浓度的TGF-β1可增加心脏成纤维细胞的活力,促进胶原Ⅲ的合成。黄连素呈浓度依赖性地抑制心脏成纤维细胞的活力,降低胶原Ⅲ的合成,促进p38MAPK蛋白磷酸化。结论黄连素可抑制心脏成纤维细胞的增殖和胶原Ⅲ的合成,其机制可能是通过磷酸化p38MAPK蛋白起作用。 展开更多
关键词 黄连素 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原Ⅲ P38 MAPK
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环孢霉素A抑制血管升压素诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成(英文) 被引量:4
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作者 尚福军 赵连友 +1 位作者 郑强荪 王捷频 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1044-1049,共6页
目的探讨环孢霉素A(CsA)对血管升压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成作用的影响。方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Daw ley大鼠CFs,无血清培养基培养24 h以上的细胞在AVP刺激的基础上给予不同浓度的CsA。采用MTT法测定... 目的探讨环孢霉素A(CsA)对血管升压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成作用的影响。方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Daw ley大鼠CFs,无血清培养基培养24 h以上的细胞在AVP刺激的基础上给予不同浓度的CsA。采用MTT法测定细胞数目,应用流式细胞仪分析细胞周期,羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清液羟基脯氨酸含量,钙调神经磷酸酶(CaN)活性通过分光光度计测定。结果环孢霉素A可剂量依赖性地抑制AVP诱导的心脏成纤维细胞数目的增加,0.05,0.5及5μmol.L-1CsA对CFs的MTT吸收度值的抑制率分别为12%,24%和29%(均P<0.05);细胞周期分析显示,0.5μmol.L-1CsA可降低AVP诱导的S期百分数和增殖指数(P<0.05);0.5及5μmol.L-1CsA可降低细胞培养上清液羟基脯氨酸含量,抑制率分别为29%和33%,有统计学差异(均P<0.05);CsA可完全阻断AVP诱导CFs细胞内CaN活性,而CsA对基础状态下的CaN活性和细胞存活率无明显影响。结论CsA通过阻断CaN信号通路抑制AVP诱导的CFs增殖和胶原合成,可抑制心肌纤维化进程,为心肌纤维化的防治提供了新的治疗靶点。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 细胞增殖 胶原合成 环孢霉素A 血管升压素
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KLF15基因对心肌纤维化的抑制作用 被引量:4
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作者 余杨 邹书帆 +3 位作者 马杰 蹇朝 唐富琴 陈林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期1448-1453,共6页
目的探讨心肌成纤维细胞Krüppel样因子15(krüppel-like factor 15,KLF15)在心肌间质纤维化及转归中的作用和分子机制。方法体外培养大鼠心肌成纤维细胞,建立促心肌成纤维细胞肥大模型,构建干涉和过表达KLF15腺病毒载体并转染... 目的探讨心肌成纤维细胞Krüppel样因子15(krüppel-like factor 15,KLF15)在心肌间质纤维化及转归中的作用和分子机制。方法体外培养大鼠心肌成纤维细胞,建立促心肌成纤维细胞肥大模型,构建干涉和过表达KLF15腺病毒载体并转染,分别进行腺病毒组、空病毒组、对照组、阴性干涉组及干涉组细胞玻片染色观察,Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量及KLF15、TGF-β(transforming growth factor-β)、CTGF(connective tissue growth factor)、MRTF-A(myocardin-related transcription factor A)细胞因子蛋白表达水平检测。结果在该细胞模型实验中,腺病毒组KLF15表达水平明显高于其余各组(P<0.05),相应的TGF-β、CTGF、MRTF-A表达水平及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量却最低(P<0.05),心肌细胞肥大、纤维化表现显著减轻,而干涉组上述各检测值变化恰与之相反(P<0.05),有更重的心肌细胞肥大、纤维化表现。结论 KLF15可通过反馈调节TGF-β,抑制CTGF及MRTF-A的作用,减轻心肌间质纤维化及心肌成纤维细胞表型转变,从而改善心功能。 展开更多
关键词 KLF15 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 细胞培养 腺病毒载体 转染
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苦参碱诱导血管紧张素Ⅱ作用的心肌成纤维细胞凋亡 被引量:13
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作者 周成慧 欧阳静萍 +3 位作者 周艳芳 胡迎春 杨海鹭 徐怡 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2004年第4期375-379,T002,共6页
目的 :研究苦参碱 (matrine,Mat)诱导血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )作用的小鼠心肌成纤维细胞 (cardiacfi broblast,CFB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法 :不同浓度苦参碱作用于体外培养AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 ,利用倒置显微镜、PI... 目的 :研究苦参碱 (matrine,Mat)诱导血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )作用的小鼠心肌成纤维细胞 (cardiacfi broblast,CFB)凋亡及相关调控蛋白表达的影响。方法 :不同浓度苦参碱作用于体外培养AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 ,利用倒置显微镜、PI/Hoechst 33342双染结合荧光显微镜技术观察细胞形态 ;流式细胞术检测其凋亡率、细胞周期及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的改变 ;采用WesternBlotting检测Caspase 3蛋白的表达。 结果 :不同浓度Mat处理AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞 2 4h ,可见到染色质浓缩、边集、碎裂 ;凋亡率随浓度的升高而升高 ;细胞周期分析显示G1升高 ,S期下降 ,G2 /M期无明显变化 ;,Bcl 2的表达量减少 ;Bax的表达量增加且呈剂量效应 ;WesternBlotting检测显示Caspase 3活化。结论 :Mat诱导AngⅡ作用的小鼠心肌成纤维细胞凋亡且呈剂量效应 ,其机制可能与降低Bcl 2、升高Bax、增强Caspas 3活性有关。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 苦参碱 心肌成纤维细胞 细胞凋亡 细胞周期 Bcl-2 BAX CASPASE-3
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乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外分离培养方法的优化 被引量:12
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作者 朱晓丽 王丽 +3 位作者 马依彤 杨毅宁 陈邦党 马苗苗 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2015年第1期90-93,共4页
目的优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。方法分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞。光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌... 目的优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。方法分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞。光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌成纤维细胞的基本形态特征的变化,原代心肌细胞行心肌肌钙蛋白免疫荧光鉴定,而心肌成纤维细胞则用第2代行波形蛋白免疫荧光鉴定。结果心肌细胞在2~4 h开始贴壁生长,12~24 h贴壁速率大幅增加,并出现自发性搏动,48~72 h心肌细胞粘合成簇,细胞成活率,纯度均达95%以上;心肌成纤维细胞第2~4代细胞生长良好,纯度高达98%以上。结论此种方法可得到产量大,纯度高,活力好的心肌细胞和心肌成纤维细胞,为心血管疾病的基础与临床研究提供了理想的实验模型。 展开更多
关键词 心肌细胞 心肌成纤维细胞 原代培养
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牛磺酸对心肌成纤维细胞细胞周期的影响及其机制的研究 被引量:6
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作者 王艳春 李红 杨世杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1471-1475,共5页
目的研究牛磺酸(taurine,Tau)对血管紧张素Ⅱ(an-giotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblast,CFb)增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,建立心肌纤维化模型,采用四甲基偶氮唑... 目的研究牛磺酸(taurine,Tau)对血管紧张素Ⅱ(an-giotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblast,CFb)增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,建立心肌纤维化模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测胶原含量;流式细胞仪检测细胞周期及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27的变化;免疫细胞化学法测定细胞周期调控蛋白D(cyclin D)及p27蛋白的含量。结果Tau(40、80、160mmol.L-1)可明显抑制AngⅡ诱导的CFb增殖与胶原合成,同AngⅡ组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01),且呈现剂量依赖性。流式细胞仪检测表明Tau在80、160mmol.L-1可促进p27的蛋白表达;细胞G0/G1期百分率随Tau浓度增加而增加,S期细胞百分率随Tau浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。免疫细胞化学染色结合图像分析系统的分析结果也表明Tau可增加p27的蛋白表达,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论牛磺酸通过促进p27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,而抑制CFb增殖和胶原含量的增加。 展开更多
关键词 牛磺酸 心肌成纤维细胞 细胞周期调节蛋白 P^27
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低氧对心脏成纤维细胞增殖细胞核抗原表达与表型的影响 被引量:4
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作者 于军 朱妙章 +4 位作者 裴建明 陈宝莹 吕顺艳 董明清 魏启明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1311-1315,T002,共6页
目的 :观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养乳鼠CFs ,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 (MTT)比色法检测细胞的增殖情况 ,采用免疫组织... 目的 :观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与表型的影响。方法 :分离、纯化、培养乳鼠CFs ,随机分为 3组 :对照组、中度低氧组和重度低氧组 ,以四唑盐 (MTT)比色法检测细胞的增殖情况 ,采用免疫组织化学的方法检测PCNA的表达情况 ,电镜观察细胞的超微结构 ,并采用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内α -actin的表达情况。结果 :中度低氧组MTT的 4 90nm吸光度值 (A490nm)较对照组增加 (18 4±2 5 0 ) % (P <0 0 5 ) ,而重度低氧组A4 90nm值较对照组降低 (15 8± 2 5 0 ) % (P <0 0 5 )。免疫组化结果显示 :对照组CFs的PCNA有一定的基础表达 ,核内阳性反应颗粒较少 ,染色强度为 (92 2± 9 1) %AU ,中度低氧组CFs的PCNA染色强阳性 ,可见密集的阳性反应颗粒 ,染色强度为 (12 8 0± 11 4 ) %AU(P <0 0 5vs对照组 ) ,重度低氧组CFs核内无明显的阳性反应颗粒 ,染色强度为 (89 9± 8 4 ) %AU。透射电镜下 ,正常组CFs呈梭形 ,胞浆内有丰富的粗面内质网和高尔基复合体 ,线粒体和微丝的含量较少 ,无基膜存在 ,呈典型的成纤维细胞表型。中度低氧刺激 72h ,CFs粗面内质网明显减少 ,胞浆内出现大量的微丝 ,以质膜下分布最多 ,呈现肌成纤维细胞表型。重度低氧组CFs内仅有少量的? 展开更多
关键词 缺氧 心脏成纤维细胞 增殖细胞核抗原 表型 肌动蛋白类
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鸢尾苷元对血管紧张素Ⅱ作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响 被引量:10
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作者 陈雪斌 汪凤兰 张冠茂 《西北药学杂志》 CAS 2020年第1期62-66,共5页
目的探讨鸢尾苷元对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用差速贴壁法获得纯化的大鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法和原位末端标记法检测鸢尾苷元或磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对An... 目的探讨鸢尾苷元对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用差速贴壁法获得纯化的大鼠心肌成纤维细胞,采用MTT法和原位末端标记法检测鸢尾苷元或磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对AngⅡ作用下心肌成纤维细胞增殖和凋亡的影响,采用RT-PCR检测鸢尾苷元对AngⅡ作用下心肌成纤维细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达的影响,Western blot法检测鸢尾苷元对AngⅡ作用下心肌成纤维细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、T-Akt表达的影响。结果AngⅡ能明显促进心肌成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡;给予50,100和200μmol·L^-1鸢尾苷元后,AngⅡ使心肌成纤维细胞促增殖和抑凋亡作用明显受到抑制,且200μmol·L^-1鸢尾苷元作用最显著。200μmol·L^-1鸢尾苷元能够明显抑制AngⅡ诱导的Bcl-2 mRNA和p-Akt、Bcl-2蛋白的表达;减弱AngⅡ对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的抑制作用,不影响T-Akt蛋白表达。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002作用后,AngⅡ使心肌成纤维细胞的促增殖和抑凋亡作用明显受到抑制;而给予PI3K/Akt信号通路激活剂HY-N1412作用后,AngⅡ对心肌成纤维细胞的促增殖和抑凋亡作用明显得到促进,HY-N1412能明显逆转鸢尾苷元对AngⅡ刺激下的心肌成纤维细胞抑增殖和促凋亡作用。结论鸢尾苷元可通过PI3K/Akt信号通路减弱AngⅡ对心肌成纤维细胞促增殖和抑凋亡作用。 展开更多
关键词 鸢尾苷元 心肌成纤维细胞 细胞增殖 凋亡 磷脂肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路
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成年小鼠心脏成纤维细胞的分离、纯化和原代培养 被引量:13
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作者 李如君 龚开政 张振刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期67-71,共5页
目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴... 目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;CCK-8法测定细胞增殖能力、Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后细胞SMAD家族成员2/3(Smad2/3)蛋白及磷酸化水平。结果差速贴壁后在相差显微镜下可见大量球形贴壁细胞;3 d后细胞逐渐由圆形伸展为长梭形并迅速增殖,分裂象多见;5 d后细胞数量显著增多,完全汇合无空隙;细胞生长曲线近似"S"形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8法显示在第3~5天细胞增殖能力最显著,给予第2代心脏成纤维细胞TGF-β1刺激显示Smad2/3蛋白磷酸化水平明显增加。结论建立了一种快速、经济、有效获取成年小鼠心脏成纤维细胞的方法。 展开更多
关键词 成年小鼠 心脏成纤维细胞 原代培养 细胞鉴定
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大鼠心肌成纤维细胞体外培养的生物学特性及转基因研究 被引量:2
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作者 汪进益 范慧敏 +3 位作者 刘中民 卢蓉 马亮 李杨 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期314-316,F0002,共4页
目的观察大鼠心肌成纤维细胞(CFs)体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子(MyoD)基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs,利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6/V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CF... 目的观察大鼠心肌成纤维细胞(CFs)体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子(MyoD)基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs,利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6/V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CFs,用稻瘟菌素筛选2周,挑选转基因单克隆细胞,传代培养,进行细胞形态观察、生长曲线以及细胞免疫化学鉴定。结果成功建立高纯度大鼠CFs的细胞培养模型,且具有良好的细胞形态、正常的生长增殖等生物学功能。转染细胞的MyoD cDNA基因表达阳性,其下游抗α-肌动蛋白(α-actin)呈阳性表达,胞质呈棕黄色,并且含有与细胞纵轴平行排列的肌丝,细胞核用苏木素复染后呈淡蓝色。在2.0×10^5/mL细胞密度的CFs接受转MyoD基因后,抗α-actin阳性率为(27.04±9.41)%。结论真核表达载体成功介导MyoD cDNA转导入体外培养的大鼠CFs,诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞,CFs可成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 细胞培养 肌肉转录调节因子 转基因 靶细胞
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