心肌局部肾素-血管紧张素系统在烧伤早期心肌损害中的作用

目的：探讨心肌局部肾素血管紧张素系统在烧伤早期心肌损害中的作用。方法：大鼠随机分为对照组（８只，不予烧伤）、烧伤组（４０只，致３０％Ⅲ度烧伤）和治疗组（４０只，Ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ灌胃３日致３０％Ⅲ度烧伤）。测定烧伤前（对照组）及烧伤后１、３、６、１２、２４小时心肌组织血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性，血管紧张素Ⅱ（ＡＴⅡ）含量和血清心肌肌球蛋白轻链Ⅰ（ＣＭＬＣ１）含量的变化。结果：烧伤组心肌组织ＡＣＥ活性及ＡＴⅡ含量明显升高，血清ＣＭＬＣ１含量大幅度增加，其中以烧伤后１２小时升高最明显，伤后２４小时尚未恢复至对照组水平。治疗组预防性给予ＡＣＥ抑制剂Ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ，可显著降低烧伤后心肌组织ＡＣＥ活性，减少ＡＴⅡ产生，降低血中ＣＭＬＣ１含量，血清ＣＭＬＣ１含量变化与心肌组织ＡＴⅡ含量变化密切相关。结论：严重烧伤早期心肌局部肾素血管紧张素系统迅速被激活，ＡＴⅡ释放增加，其可能参与烧伤早期心肌缺血缺氧性损害，ＡＣＥ抑制剂对烧伤早期心肌具有明显保护作用。

鹿茸多肽介导心肌干细胞分化对终末心肌分化基因ANP和MLC-2v表达的影响

目的:探讨鹿茸多肽介导心肌干细胞(CSC)分化对终末心肌分化基因心房钠尿肽(ANP)和心肌肌凝蛋白轻链2(MLC-2v)表达的影响,阐明其修复受损心肌的作用机制。方法:选取出生2d的雄性Wistar大鼠,提取CSC,免疫荧光鉴定CSC表面标志物c-Kit,流式细胞术鉴定CSC纯度。以培养皿为实验单位,分为空白对照组(加等量缓冲液)、5-氮胞苷组(终浓度3μmol·L-1)、鹿茸多肽组(终浓度800mg·L-1)和联合组(3μmol·L-1 5-氮胞苷+800mg·L-1鹿茸多肽),于37℃、5%CO2培养箱中培养48h。ELISA法检测各组细胞上清液中ANP和MLC-2v表达水平,RT-PCR法检测各组细胞中ANP和MLC-2v mRNA表达水平。结果:获得纯度>95%的CSC。ELISA法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组细胞上清中ANP和MLC-2v表达水平明显升高(P<0.05);联合组ANP和MLC-2v表达水平高于5-氮胞苷组和鹿茸多肽组,但差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组ANP和MLC-2vmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:鹿茸多肽可以通过增强心肌分化基因ANP和MLC-2v表达介导CSC分化为心肌细胞,且在一定程度上减轻5-氮胞苷所致的细胞毒性。

心肌梗死患者抗肌球蛋白轻链抗体检测的临床意义

目的 :观察急性心肌梗死 (AMI)患者血清中是否存在抗心肌肌球蛋白轻链抗体 ,探讨该抗体与AMI患者心功能和预后的关系。方法 :6 7例AMI患者分别于发病第 1周末和 6个月进行免疫印迹法检测血清中的抗肌球蛋白轻链抗体和超声心动图检查 ,根据抗体结果分为抗体阳性组和阴性组 ,比较两组的心功能指标和预后。结果 :6 7例AMI患者血清抗肌球蛋白轻链抗体阳性有 17例 ,阳性率为 2 5 .4% ,30例健康对照均为阴性 ;抗体阳性组和阴性组的梗死部位和范围相似 ,但抗体阳性组Killip分级心功能明显差于抗体阴性组 (P <0 .0 5 ) ,而室壁运动减弱、室壁瘤形成和死亡率均明显高于阴性组 (P <0 .0 5 )。结论 :急性心肌梗死患者血清中可检测到抗肌球蛋白轻链的自身抗体 ,自身免疫反应可能参与心肌损伤和心室重构 ,影响心肌梗死患者的心功能和预后。

异丙基肾上腺素对大鼠心肌肌球蛋白磷酸化系统影响的研究

本研究给予不同剂量的异丙基肾上腺素(ISP),造成大鼠不同程度的心肌损伤,动态观察心肌匀浆中肌球蛋的白轻链激酶(MLCK)和肌动球蛋白ATP酶的活性变化。结果表明,低剂量ISP导致MLCK和ATP酶活性下降,心肌组织病理切片基本正常。高剂量注射ISP、MLCK和ATP酶活性显著下降,与正常对照组和低剂量组相比,差异显著(P<0.01)。在病理形态学上,大鼠心肌组织有多处较大的坏死灶。提示,在未发生明显的病理性变化前,心肌细胞内就已发生了一系列的代谢紊乱,如酶活性下降。当心肌组织出现病理形态学改变时,细胞内酶活性的显著下降,表明由可逆性损害发展到不可逆的心肌坏死。

心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性ELISA吸附分析及其临床初步应用

应用特异抗体建立了人心肌肌球蛋白轻链的双相非竞争性酶联免疫吸附分析。该法灵敏度为0.lng/孔,批内及批间变异系数分别为2.7％～9.2％和3.7％～19.1％,回收率近100％(高剂量组10ng/孔),工作范围0.1～10ng/孔。用该法检测了11例急性心肌梗塞病人入院后2周的血清样品,并调查了20例正常健康人血清样品,结果所有急性心梗病人血清样品在一定时间内心肌肌球蛋白轻链水平增高。大多数病人(9例)初次升高后1～2d达正常水平,以后又升高5～9d。轻链高峰在入院后第2.2±1,2d(第一峰)和7.1±1.9d(第二峰)出现,峰值分别是45.7±33.5ng/ml和62.2±32.9ng/ml,高水平肌球蛋白轻链在病人血中保持11±3.4d。然而,在健康人血清中未见有可测量的轻链存在。

人心肌肌凝蛋白轻链的提纯及其抗体的制备

从人心肌中提纯的肌凝蛋白轻链(myosin-light chain,M-LC),SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉呈三条蛋白带。经DEAE-纤维素柱层析出现三个峰。免疫白兔产生的抗血清,琼脂双扩散鉴定有一条沉淀线;亲和层析,用盐酸胍解离下一个抗体蛋白峰。

人血清CMLC快速放射免疫分析法

从人心肌中提取肌球蛋白轻链(CMLC),在制备CMLC单克隆抗体(McAb)的基础上,建立了快速的CMLC放射免疫分析法.竞争抑制分析证明,与人骨骼肌肌球蛋白轻链无交叉反应.本方法的有效测定范围是2～12ng/mL,批内测定的变异系数为3.1%～3.8%,批间测定的变异系数为4.5%～4.9%,平均回收率为95.8%.

单克隆抗体与抗血清联合应用建立血清CMLC测定方法的研究

单克隆抗体(McAb)和抗血清各有特点。本文提纯人心肌肌球蛋白轻链(CMLC)并制备其单克隆抗体和抗CMLC兔血清(下称抗血清),试建立测定血清CMLC的酶联免疫(ELISA)方法。通过比较,McAb和抗血清联合应用可提高测定方法的灵敏度和特异性;并对各反应试剂的工作浓度进行确定,建立了McAb(1C_(11)-D_7株)为铺底抗体,抗血清为覆盖抗体,碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG为第三抗体的三抗体酶联免疫夹心测定血清CMLC的方法(MP-ELISA)。血清CMLC最小可测浓度为2.5ng/mL。

人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC)的分离及临床应用

从人心肌提取了肌凝蛋白,并检测了其ATP酶活力的稳定性。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法纯化并鉴定了人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),结果表明CMLCI的分子量为27000;CMLCⅡ的分子量为20 000。它们的紫外吸收光谱显示A260>A280,表明其高含苯丙氨酸。制备了兔抗人CMLC抗血清,免疫双扩散的结果表明,纯化后的CMLC与肌凝蛋白有相同的抗原性。用阳性的兔抗人CMLC抗血清为对照作ELISA实验,不仅从免疫学角度进一步证实了人心肌CMLC的特性且为其在临床诊断应用提供了可靠的方法。

抑制肌球蛋白轻链激酶减轻大鼠压力超负荷诱导的心脏肥大

目的:通过抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2),探究其对心脏肥大的影响。方法:原代乳鼠心肌细胞(NRCMs)经血管紧张素II(Ang II)诱导发生心肌细胞肥大,同时给予MLCK抑制剂ML-7处理,分为PBS组、Ang II组和Ang Ⅱ+ML-7组。用RT-qPCR和免疫荧光法检测心肌细胞肥大标志物和心肌细胞表面积。此外,将大鼠随机分为6组:(1)腹主动脉缩窄(AB)0周组;(2)AB 2周组;(3)AB 4周组;(4)假手术组;(5)AB组;(6)AB+ML-7组。前3组分别在手术后0、2和4周取材,后3组在手术4周后通过超声心动图、组织病理学和RT-qPCR检测大鼠心脏结构、心功能、心肌细胞横截面积、心肌纤维化及心脏肥大标志物表达。Western blot用于检测心肌细胞和大鼠心脏组织中MLCK、p-MLC2和MLC2的表达水平。结果:Ang Ⅱ处理可显著上调心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)与β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,增加心肌细胞表面积,上调MLCK表达,增加p-MLC2水平,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。MLCK和p-MLC2在大鼠AB术2周后增加,4周后减少。AB术4周后大鼠心功能降低,心重指数、心肌细胞横截面积、心肌纤维化和心脏肥大标志物表达增加,而抑制MLCK可明显减轻上述改变。抑制MLCK可在心肌细胞和心脏组织中降低p-MLC2水平而不影响MLCK的表达。结论:抑制MLCK和p-MLC2可减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大和压力超负荷诱导的心脏肥大。

肌球蛋白轻链激酶在血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚中的作用及机制

目的探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导心肌肥大中的作用及机制。方法原代培养的乳鼠心肌细胞分成3组:对照组、AngⅡ组和AngⅡ+MLCK抑制剂(ML-7)组(AngⅡ+ML-7组)。免疫荧光染色计算心肌细胞横截面积;定量反转录聚合酶链反应(quan-titative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测心肌肥大标志物[心房利尿钠肽(atrial di-uretic natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)]mRNA含量;Western blotting检测心肌细胞MLCK、肌球蛋白调节性轻链(regulatory myosin lightchain,MLC2)、磷酸化MLC2(P-MLC2)以及凋亡标志物(Bax、Bcl-2与caspase-3)蛋白表达。结果与对照组组相比,AngⅡ组心肌细胞横截面积、肥大标志物m RNA表达、促凋亡因子Bax以及caspase-3蛋白表达显著增加,且抗凋亡的Bcl-2表达含量降低,并伴随MLCK、P-MLC2蛋白表达降低。给予MLCK抑制剂ML-7处理后,与AngⅡ组相比,心肌肥大、凋亡指标均进一步增加,而MLCK、P-MLC2蛋白表达含量显著下调(总MLC2表达无明显变化)。结论抑制MLCK可能加剧Ang Ⅱ诱导的心肌肥厚及凋亡,其机制与抑制MLCK/MLC2通路密切相关。

猪心肌球蛋白及其轻、重链亚基的纯化和鉴定

采用一种改进的方法，从１００ｇ猪心室肌中提取心肌肌球蛋白３７０ｍｇ，并进一步分离和纯化其亚基成分，分别得到肌球蛋白轻链２４ｍｇ和重链２１０ｍｇ，核酸含量＜１％，不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它杂蛋白；ＳＤＳＰＡＧＥ显示，猪心肌球蛋白重链为２００～２２０ＫＤ一条带，肌球蛋白轻链则为２７ｋｄ、２１．４ｋｄ、１９ｋｄ三条带；纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋激活ＡＴＰ酶活性为０．２４μｍｏｌＰｉ／（ｍｇ·ｍｉｎ），但其分离后的亚基则无此活性。

肌球蛋白轻链激酶3基因在心脏疾病中的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(MYLK)3基因是MYLK家族中的一员,主要在心肌组织中表达,其蛋白产物心脏特异性MYLK在心脏发育、心脏收缩和肌节组织的形成中起重要作用,当其表达降低或缺失时,可影响心肌形成及发育,导致先天性心脏病、心脏肥大、扩张型心脏病等多种心脏疾病。MYLK3基因的发现使临床从基因水平进一步了解心脏疾病,其可能为心脏疾病的诊断及治疗提供新的理论依据及治疗靶点。本文就MYLK3基因的结构、功能及其在心脏疾病中的研究进展作一综述。

人心肌肌球蛋白轻链的提取、纯化和电泳分析

用一种简便有效的方法，从１３０ｇ成人心室肌中先提职心肌肌球蛋白纯品３１８ｍｇ，再从中进一步分离和纯化得到肌球蛋白轻链１８ｍｇ。纯化肌球蛋白轻链的核酸含量＜０．０１％，基本不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，人肌球蛋白轻链１和轻链２的分子量为２４ｋＤ和２０ｋＤ。纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性为０．４６μｍｏｌＰｉ／ｍｇ／ｍｉｎ，其分离后的轻链亚基则无此活性。本文对人和猪的心室肌肌球蛋白轻链的电泳行为进行了分析。

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性心肌损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。

心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

目的探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase,cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。方法纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点。制作野生型cMLCK(WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感染原代心肌细胞,并用随机数法随机分为6组:对照组、AngⅡ组、WT-cMLCK组、WT-cMLCK+AngⅡ组、ΔNT-cMLCK组、ΔNT-cMLCK+AngⅡ组,每组3个样本。RT-PCR检测心衰因子表达;Western blotting检测cMLCK及底物的表达;免疫荧光检测细胞表面积。结果WT-cMLCK在体外体系能对其底物MLC2v进行磷酸化;而ΔNT-cMLCK对MLC2v的磷酸化作用消失;使用AngⅡ处理后,可见细胞面积增大[(1787.0±142.6)μm^(2)vs.(2458.0±211.3)μm^(2),P<0.001],ANP、β-MHC表达上调(均P<0.05);cMLCK及p-MLC2v表达上调(均P<0.05);过表达WT-cMLCK可逆转心肌肥大[(2527.0±116.4)μm^(2)vs.(1775.0±88.5)μm^(2),P<0.001];敲除N端可使cMLCK的保护作用丧失[(1775.0±88.5)μm^(2)vs.(2613.0±118.4)μm^(2),P<0.001]。结论过表达cMLCK可改善AngⅡ诱导的心肌肥大,该作用依赖于其N端。