香石竹ACC氧化酶基因的克隆与植物表达载体构建

根据已发表的ACO核苷酸序列 ,设计一对引物 ,以香石竹品种‘American’基因组DNA为模板 ,扩增出香石竹ACC氧化酶基因 ,将其连接到pMD18加T质粒载体上 ,通过中间载体pBluescriptSK ,构建了ACO基因正向和反向插入的植物表达载体 ,并将其导入了农杆菌。酶切检测表明该片段已插入表达载体 ,序列测定结果显示所克隆基因片段含 3个外显子 ,2个内含子 ,其中

香石竹品种的RAPD标记

用随机扩增多态DNA (RAPD)技术 ,选用 4个随机引物 ,对 87个大花型香石竹品种总DNA进行随机扩增。 4个引物均得到了稳定的RAPD图谱。扩增出的片段分子量在 5 0 0～ 4 30 0bp之间 ,每个随机引物扩增出的条带数在 8～ 12条之间 ,共扩增出 2 113个条带 ,平均每个引物扩增的DNA条带数为 9 5条。根据DNA谱带计算品种间遗传距离 ,对 87个品种进行了聚类分析 ,分为 10个组群 ,组群间差异较大 。

溴代十六烷基吡啶对香石竹切花的保鲜效应

研究切花瓶插液中加入0.3g·L-1季铵盐化合物溴代十六烷基吡啶(CPB)后,瓶插液中微生物密度和切花茎杆基部病原菌分离频率下降,切花后期的水分平衡和鲜重能较好地维持,花冠直径增大,观赏寿命延长。

表油菜素内酯对香石竹切花抗衰老的作用

[目的]探究外源表油菜素内酯对香石竹切花抗衰老的影响。[方法]以香石竹切花为材料,用含不同浓度BR的Hoagland营养液进行瓶插试验,培养9d后测定花瓣电导率以及MDA含量、可溶性糖含量和可溶性蛋白质含量。[结果]含1.0mg/LBR的营养液能很好地维持香石竹切花膜结构的稳定性,电导率降低11.64%,也可在一定程度上减少MDA累积,减缓可溶性糖降解,使瓶插寿命延长5d。[结论]该研究为BR在香石竹等切花保鲜中的应用提供理论依据。

不同结构的外源ACO基因导入香石竹对瓶插寿命的影响

以香石竹叶片为外植体 ,利用根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法 ,将香石竹ACC氧化酶 (ACO)基因核DNA的正义 (sense)、反义 (antisense)、正义重复 (sensedirectrepeat)和反义重复 (antisensedirectrepeat)等 4种T DNA结构导入香石竹‘Master’品种。经Southern杂交检测证明目的基因已整合到香石竹基因组 ,共获得 14个转化株系。在 2 5℃条件下比较瓶插寿命 ,对照植株花朵瓶插寿命为 5 8d ,多数转化株系花朵瓶插寿命达 11d ,最长者可达 12 8d。大多数转基因株系切花衰老过程中乙烯释放量显著减少 ,部分转基因株系切花衰老过程中几乎检测不到乙烯 ,而对照有明显的峰值。通过对本研究转化ACO基因核DNA与前人转化ACO基因cDNA延长瓶插寿命比较以及对不同T DNA结构的转化抑制内源基因表达的程度进行比较后 ,初步判断用核DNA转化后对内源基因的抑制效果与cDNA相当甚至更明显 ,反义基因可以比正义基因更有效地抑制内源的同源基因的表达 。

1-MCP对香石竹切花保鲜作用初探

香石竹切花用不同浓度的 1 -MCP处理 ,依据瓶插寿命和外观品质得知以浓度为 B处理 0 .3× 1 0 - 8的 1 -MCP处理效果最佳。观测于此浓度 1 -MCP处理液中瓶插的香石竹切花的有关外观形态品质和生理生化指标 ,结果表明 :与对照相比 ,1 -MCP处理能提高香石竹切花观赏值 ,减少香石竹的萎蔫程度 ,在促进开放速度、蕾径增大、花朵大小方面均优于其他处理和对照。此外 1 -MCP处理还具有保持香石竹延迟叶片质膜相对透性增加 ,对叶片叶绿素。

影响香石竹组培苗玻璃化现象的若干因素

用茎尖培养的方法或通过无菌播种 ,再利用带叶茎段进行快速繁殖均获成功 ,但同时茎尖培养过程也出现了较为严重的玻璃化现象 ,为此通过调整培养条件寻找克服玻璃化的方法 ,结果发现 ,适当降低细胞分裂素的用量 。

N-月桂酰乙醇胺对香石竹开放和衰老进程中花瓣微粒体膜组分和功能的调节

【目的】探讨N-月桂酰乙醇胺[N-lauroylethanolamine,NAE(12:0)]延缓香石竹切花衰老的作用机理。【方法】以5μmol·L^(-1)NAE(12﹕0)对香石竹切花(Dianthus caryophyllusL.)‘Red Barbara’进行瓶插处理,研究瓶插试验进程中NAE(12﹕0)对花瓣微粒体膜组分和功能的影响。【结果】香石竹切花开放和衰老进程伴随着花瓣微粒体膜磷脂含量、膜脂流动性、膜脂脂肪酸不饱和指数以及膜结合酶比活力的下降,外源NAE(12﹕0)处理能在切花盛开后期至初萎发生前明显滞缓香石竹花瓣微粒体膜上述指标的下降速率,同时降低作为膜衰老可靠指标的电导率的上升幅度。【结论】NAE(12:0)延缓香石竹切花衰老的作用机理与NAE(12﹕0)对花瓣微粒体膜磷脂降解以及膜脂脂肪酸组分的调节有关,由此延缓了花瓣微粒体膜脂流动性的下降速率,降低了膜渗漏的上升幅度,并维持了膜结合酶较高的比活力,从而推迟了切花初萎的发生。

香石竹ACC氧化酶重复基因植物表达载体的构建及转基因植株的获得

香石竹ACC氧化酶基因从核NDA中克隆之后,将其首先构建成正义及反义的单拷贝植物表达载体,在此基础上又同向插入一个ACO基因片段,从而获得ACO的正义重复基因和反义重复基因植物表达载体,所得载体已通过酶切分析和PCR鉴定。将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,并转化香石竹品种Master、爱卡迪幼叶,经PCR检测和Southern杂交鉴定,获得了8株转化植珠。

糖浓度对香石竹保鲜的影响

本实验对不同糖浓度的保鲜液影响香石竹切花在保鲜期间的寿命、花径、品质等方面进行了研究。结果表明不同的糖浓度对切花的寿命、花径、品质的影响都有着显著的差异 ;6 .0 %的糖浓度有利于延长切花的插瓶寿命 ,并能增大花朵直径以及提高切花观赏品质。本文主要从不同糖浓度影响下的切花平均寿命 ,以及其平均直径这两个方面作图进行比较 ,筛选出插瓶液的适宜糖浓度为 6 .0 %。

康乃馨ACC氧化酶cDNA的克隆及其序列分析

以康乃馨(DianthuscaryophyllusL.)花瓣为材料,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacidoxidase,ACO)基因的序列设计并合成一对引物,通过RT-PCR方法获得一约1.2kb特异片段,把该片段连接到PGEM-Teasyvector上进行测序,其全长共1156bp,编码区915bp,共编码304个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与国外SavinKw报道的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符。推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的。

NAA、BA和KT对麝香石竹不定芽形成的影响

1mg/L NAA、3mg/LBA 或3mg/LKT 都能有效地诱导麝香石竹不定芽的形成,尤以 BA 诱导的不定芽分化频率最高;生长素和细胞分裂素配合,则能进一步提高分化频率。BA 在高频率诱导不定芽形成的同时,对所形成的不定芽伸长生长、鲜干重增长、干重百分率提高及其叶绿素水平增加均有明显的促进作用,而 NAA 和 KT 则不然。此外,当不定芽形成多时,所产生的不定芽可溶性糖含量降低,碳水化合物利用加快。本文对 NAA、BA 和 KT 的合理使用及其作用规律的研究具有重要参考价值。

通过转重复结构的ACC氧化酶基因延长香石竹的瓶插期

以香石竹叶片为外植体,用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法,在选择分化培养基中培养后,将香石竹重复结构的ACC氧化酶(ACO)基因核DNA导入香石竹‘Mabel’品种,经Southern杂交检测,证明外源基因已整合到香石竹基因组,共获得3株转化植株。转基因植株在隔离条件下栽培时正常开花,转基因T257株系切花衰老过程中乙烯释放量较对照低95％,没有乙烯跃变峰出现,在25℃条件下比较瓶插期,有2个转化株系瓶插期显著延长,最长比对照长了5 d以上。

保鲜剂对香石竹切花的生理效应

由蔗糖、８－羟基喹啉、硝酸银和青鲜素等组成的保鲜剂处理香石竹切花，经处理其花朵开度增大、鲜重增加，膜透性降低，能延缓ＳＯＤ和ＣＡＴ活性的下降，提高还原糖含量，使切花的瓶插寿命延长．

磷酸钠对康乃馨切花保鲜效果的影响

以康乃馨(Dianthus caryophyllus L.)为材料,初步研究了不同磷酸钠浓度对康乃馨切花的观赏寿命、花径、鲜重等外观形态指标及水分平衡、花青素含量、过氧化氢酶(CAT)活性等生理指标的影响。结果表明,含有0.2 g/L的磷酸钠保鲜液可有效延长康乃馨切花寿命,促进切花鲜重的增加与花径的增大,有利于保持水分平衡,抑制花青素的降解,保持CAT酶活性。

环保型保鲜液对香石竹切花瓶插的保鲜效应

以蔗糖和8-羟基喹啉为保鲜液基本成分,研究不含银离子的瓶插保鲜液在分别添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、亚精胺(Spermidine,简称Spd)、维生素C和柠檬酸后对香石竹(Dianthus caryophyllus L.)切花的保鲜效果。结果表明,与去离子水对照相比,4种含有不同物质的保鲜液均能不同程度地增加香石竹切花的鲜重和花径,改善体内水分状况,延缓可溶性蛋白质的降解,降低丙二醛含量,延长瓶插寿命,其中以处理Ⅳ(30 g/L蔗糖+200 mg/L 8-羟基喹啉+30 mg/L 6-BA)效果最好,处理Ⅲ(30 g/L蔗糖+200mg/L 8-羟基喹啉+0.1 mmol/L Spd)次之,属于高效环保型保鲜剂。

Co^(2+)对香石竹切花瓶插期间膜脂过氧化作用的影响

以"Yellow sim"香石竹为试验材料,比较了Co2+与硫代硫酸银(STS)对香石竹切花采后主要膜脂过氧化指标的影响。结果表明:Co2+处理与STS处理相比,可有效减缓花瓣含水量和可溶性糖含量的下降,抑制细胞膜透性的上升幅度,延缓SOD活性下降,有效减缓膜脂过氧化的伤害,延长切花瓶插寿命。Co2+处理比STS处理具有更好的保鲜效果,可作为STS的一种安全环保替代剂。

培养基对香石竹试管苗生长及其玻璃化的影响

本文探讨了香石竹组织培养系统和玻璃化问题。结果表明,在pH值5.8～7.0的范围内,香石竹嫩梢均可正常生长,生根的适宜pH值为6.7～7.0。食用蔗糖可代替化学纯蔗糖用作香石竹培养的碳源。香石竹最适的增殖培养基为Ms+0.1mg/l BA+0.1mg/l KT+0.1mg/l NAA。培养基中添加10～15mg/l CCC或0.5～1.0mg/l PP_(333)可导致嫩梢矮化、粗壮,减少玻璃化。通过培养基的筛选,可以将玻璃化率控制在5～10％的范围内。在培养过程中存在着玻璃梢与正常梢的互相转化,茎的异质性是引起转化的最重要因素。

二氯异氰脲酸钠处理对香石竹切花的保鲜效应

就杀菌剂二氯异氰脲酸钠(sodium dichloroisocyanurate,DICA)处理对瓶插香石竹(Dianthus caryphyllus L.)切花的保鲜效应进行了初步探讨。结果表明:与对照(蒸馏水)相比,15.4和77.0mg.L-1DICA处理可使香石竹切花的瓶插寿命分别延长6.0d和6.8d,但后者对观赏品质有不利影响;DICA处理有利于减缓切花茎基部水分导度下降,维持花枝的水分吸收和鲜样质量,尤以15.4mg.L-1DICA处理为佳;细菌计数试验和抑菌圈试验表明DICA处理可有效抑制瓶插液中微生物的生长。

香石竹切花水孔蛋白基因DcPIP2的克隆及特征分析

采用RT-PCR和RACE技术从香石竹(Dianthus caryophyllus L.)叶片中获得质膜内在蛋白(plasma membrane intrinsic protein,PIP)类水孔蛋白(aquaporins,AQP)基因的cDNA全长序列,命名为DcPIP2,GenBank登录号为GU989036。该cDNA全序列长983bp,包含有858bp的完整阅读框(ORF),编码285个氨基酸,分子量约为30.6kD。克隆相应的DcPIP2基因组全长序列得知,该基因长2635bp(GenBank登录号为JF706350),包含由3个外显子和2个内含子组成的编码区序列。同源性分析显示,DcPIP2氨基酸序列与陆地棉(Gossypium hirsutum)PIP2;3(ACB42440)、麻疯树(Jatropha curcas)AQP(ABM54183)和巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)PIP2(ACV66986)氨基酸的同源性分别为89%、88%和87%。利用实时荧光定量PCR技术研究表明,DcPIP2基因在香石竹切花的叶片、茎颈部、花瓣、雌蕊、雄蕊和萼片中均有表达,表达量为雌蕊>花瓣>雄蕊>萼片>茎颈部>叶片。