定量光导荧光技术评价CPP-ACP联合多乐氟对釉质抗酸性影响的实验研究

目的利用定量光导荧光技术,研究酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(CPP-ACP)联合多乐氟对釉质抗酸性的影响及作用。方法收集在右江民族医学院附属医院口腔科就诊正畸减数前磨牙32颗,随机分为4组,分别为去离子水组、CPP-ACP组、多乐氟组及联合组,每组8颗牙,术前使用定量光导荧光系统检测各组基线处的荧光损失量(△F)、脱矿面积(Area)、病变体积(△Q)值,去离子水组未作特殊处理,CPP-ACP组、多乐氟组、CPP-ACP联合多乐氟组实验分别进行CPP-ACP涂布、多乐氟涂布、CPP-ACP联合多乐氟涂布,将所有标本放入脱矿液中72 h,72 h后停止实验,定量光导荧光系统拍摄每组标本的荧光图像,对数据进行统计学分析。结果①脱矿前QLF值:4组各QLF变量基线值间差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性;②QLF荧光图片结果:4个不同处理组表现病损区荧光强度的损失,但病损的严重程度不一,其中联合组颊侧面形成的病损面积最少,荧光损失最轻;③脱矿后QLF值:与去离子水组比较,CPP-ACP组、多乐氟组以及联合组的早期龋病损较轻,其中联合组△F、Area、△Q最少。各组脱矿后△F、Area、△Q差异比较具有统计学意义(P<0.05);组间两两比较,各组组间△F、Area、△Q差异均具有统计学意义(P<0.05);④扫描电镜结果:原样标本釉质表面平整,无釉柱晶体溶解及孔隙结构;去离子水组呈典型酸蚀样外观;CPP-ACP组、多乐氟组、联合组釉质表面地貌均有一定程度的破坏,联合组破坏最轻。结论QLF可以作为一种对釉质早期龋矿物质含量动态变化进行定量的诊断方法;CPP-ACP、多乐氟均能抑制釉质脱矿,其中两者联合使用时抗酸效果最佳,多乐氟次之,CPP-ACP抗酸作用最弱。

酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的分级、表征及持钙特性

利用酪蛋白磷酸肽螯合钙离子的特性,以钙离子浓度为尺度,分级制取不同钙螯合能力的CPPs,同时提高其纯度。以酪蛋白的胰蛋白酶酶解产物为原料,通过逐级增加Ca^(2+)添加量,在终浓度为55%(v/v)的乙醇溶液中分级沉淀出三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分(CPP1-Ca、CPP2-Ca和CPP3-Ca),并利用PBS脱钙得到三个级分相应的酪蛋白磷酸肽(CPP1、CPP2和CPP3)。以传统钙乙醇沉淀法得到的肽钙螯合物(CPP-Ca)为对照,分析并对比三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分的理化性质以及持钙特性。结果表明,三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分中,CPP3-Ca含有最高的纯度和钙螯合量,分别为89.42%和69.59 mg/g,明显高于未分级CPP-Ca的83.77%和55.05 mg/g。氨基酸组成及N/P(摩尔比)分析发现CPP3-Ca含有更高磷酸丝氨酸基团,进而能够结合更多的Ca^(2+)。不同酪蛋白磷酸肽级分持钙能力分析结果显示CPP3能够更好地延迟和阻止磷酸钙沉淀的形成,具有更高的持钙能力。同时CPP3-Ca在模拟肠道环境中具有更高的钙溶解度,表明分级后的酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的体外生物利用度提高。

固定化碱性蛋白酶生产CPP的研究

以ＧＭ２０１大孔树脂和壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，对碱性蛋白酶２７０９的固定化条件、固定化酶的性质以及利用固定化酶制备ＣＰＰ进行研究，考察了交联剂的浓度、载体与酶的比例、温度以及ｐＨ等对碱性蛋白酶固定化的影响。确定了固定化最佳条件为以ＧＭ２０１为载体的固定化酶活力回收１９％以上；而以壳聚糖为载体的固定化酶活力回收达到了６６％以上，其最适温度为４５℃，最适ｐＨ８．０，最适底物浓度为４０％，利用固定化酶水解酪蛋白４０ｍｉｎ所制备ＣＣＰ的产率达到了７．５４％。

CPPs阻钙沉淀活性与酪蛋白水解度之间关系的研究

通过对在不同的酶与底物浓度比下所得CPPs的特性进行研究，从而找出了在不同水解度下所得CPPs的阻钙沉淀性能与酪蛋白水解度之间的关系。即当酶与底物的比不同时，所得CPPs的N/P不同；N/P不同，其CPPs阻钙沉淀活性也不同。当N/P高时，CPPs的阻钙沉淀活性较低；N/P低时，CPPs的阻钙沉淀活性高。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)的纯化研究

研究了用大孔强碱性阴离子交换树脂提纯酪蛋白磷酸肽（ CPPs）的方法。结果表明，树脂 GM201对 CPPs的分离提纯效果较好，最佳洗脱纯化工艺条件为：盐酸浓度 0.2mol/L， NaCl浓度 0.3mol/L，温度 45℃。在上述最佳工艺条件下， CPPs回收率可达 77.7％～ 80％，纯度提高到 N:P=4.7:4.9。

酪蛋白磷酸肽（CPP）对大鼠钙吸收利用的影响

酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）是从牛奶中提取出的一种多肽制品，在中性和弱碱性的环境下可提高钙的溶解度和钙溶液的稳定性。将ＣＰＰ按０．５％和０．２％浓度分别加入大鼠基础饲料和低钙饲料中，并设一组含５％脱脂奶粉为阳性对照。每组１０只断乳大鼠，进行四周生长试验和三天代谢试验。结果表明，基础饲料添加０．５％ＣＰＰ组的大鼠钙吸收率和钙储留率比对照组升高６％左右，差别有显著性意义。低钙饲料添加０．２％ＣＰＰ亦使钙吸收率和储留率增加５％～６％，差别有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１）。奶粉的钙吸收率和利用率在各组中最高。ＣＰＰ作为促进钙吸收利用的食品添加剂有进一步研究应用的前景。

生物活性肽─酪蛋白磷酸肽(CPPs)的研究、应用及展望

酪蛋白的基本功能是为生物体提供氨基酸和氨源。但是，人们似乎并没有注意到奶蛋白，尤其是酪蛋白，还是生物活性肽的主要来源。在离体和在体条件下，通过蛋白酶水解酪蛋白均得到一系列生物活性肽。这些活性肽按照其生物学作用有：促进营养吸收的，如：磷酸肽，类吗啡因子；饭后促激素分泌的，如：类吗啡因子；激活免疫活性的，如：免疫活性肽，酪激肽．类吗啡因子；以及神经性内分泌信号传递体，如：酪激肽。酪蛋白磷酸肽（CPPs）是可以促进钙质吸收的生物活性肽。已经发现CPPs不仅可以促进钙质吸收，还可以有效地促进锌、铁等的吸收，也可以防止蛀牙，可以用于牙膏、漱口液等。日本和德国已经把CPPs定为功能性食品。但是，到目前为止．中国在这方面只有很少的研究，所以该综述意在介绍CPPs研究的主要工作，并展望它的研究和应用前景。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)测定方法的研究

酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides简称CPPs)是到目前为止所发现的唯一具促钙吸收作用的短肽。在日本和德国已经由国家列入重点推荐的功能性食品添加剂。由于其生物活性中心为：－SerP－SerP－SerP－Glu－Glu－，所以CPPs实际上是一系列含有磷酸丝氨酸簇的短肽。国外主要用高效毛细管区带电泳(High performance capillary zone electrophoresis,HPCE)和高效液相色谱(HPLC)对CPPs进行定量测定和纯度测定。这些方法所需设备昂贵，对操作人员素质要求高，不能适应不同层次的要求。本项研究对直接定磷法、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)法、聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(IEF)法测定CPPs进行了探讨和比较。结果表明：这三种方法都可以用来对CPPs进行定量测定，但适用于不同情况，定磷法适用于产业测定；SDS－PAGE法适用于CPPs的组分测定，而IEF则适用于较精确的测定。

酪蛋白磷酸肽(CPP)理化特性的研究

研究了CPP的溶解性、起泡性及乳化性。CPP在pH2.0～10.0范围内,溶解性除在pH4.0约为90％外,其它均高于90％,且随pH增加而增大。与酪蛋白相比,CPP具有更好的起泡性和泡沫稳定性。CPP对热及Ca^(2+)具有较好的稳定性。CPP乳化力较酪蛋白下降约20％,乳化性下降2.89％,乳化稳定性下降1.45倍。

利用2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPPs的研究

酪蛋白磷酸肽简称CPPs(Casein phosphopeptides)，是一种具有多种生物活性的多肽。国外已经对其制备方法进行了大量研究，但是目前用于工业化生产的主要还是用胰蛋白酶水解酪蛋白或β-酪蛋白来获得。但是胰蛋白酶价格比较昂贵，用其进行工业化生产必定增加成本。本项研究改用价格十分廉价的2709碱性蛋白酶水解酪蛋白得到了和胰蛋白酶水解酪蛋白同样的产品，实验结果表明利用2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPPs可以大大降低成本。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)制备条件研究

研究了以牛奶酪蛋白为原料制备 CPPs的工艺过程及条件 .以氮、磷含量为指标 ,通过正交试验 ,确定了在胰蛋白酶作用下制备 CPPs的最佳条件为 :最适温度 40℃ ,水解时间 80 min,底物浓度15 % ,底物与酶之比为 10 0∶

生物活性肽-酪蛋白磷酸肽(CPP)的研制

摸索了 2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备 CPP的最佳工艺条件：底物浓度 10％、用酶量 1500μ /g反应温度 45℃、 pH10.5、反应时间 150min。采用选择沉淀法分离 CPP，在 pH4.5添加 1.1％ CaCl 2（ w/v）和 50％（ v/v）乙醇，室温沉淀 4h，得到 CPP产品的 N/P、得率分别为 6.39％和 13.94％。

CPP-ACP与氟促进脱矿釉质再矿化的显微放射定量分析

目的:研究不同浓度酪蛋白磷酸多肽-非结晶型磷酸钙(CPP-ACP)及其与氟(F)联合应用对牙釉质表层下脱矿再矿化的影响,为正畸后的釉质脱矿提供一种治疗途径。方法:取正畸拔除的前磨牙70颗,乳酸凝胶法制备人工早期釉质表层下脱矿后,按随机数字表法分为7组:5.0%CPP-ACP、1.0%CPP-ACP、0.1%CPP-ACP、5.0%CPP-ACFP、磷酸钙饱和溶液、饱和溶液+F及去离子水组。对各组进行显微放射照相并测量脱矿深度与脱矿量。结果:除去离子水组外,各组再矿化后较再矿化前脱矿深度和脱矿量均显著降低(P<0.05);5.0%CPP-ACFP组显著低于其他各组(P<0.05,P<0.01),5.0%CPP-ACP组与1.0%和0.1%CPP-ACP组比较脱矿深度和脱矿量显著降低(P<0.05,P<0.01),0.1%CPP-ACP组与磷酸钙饱和溶液、饱和溶液+F组比较差异无显著性(P>0.05),但均低于去离子水组(P<0.05,P<0.01)。结论:CPP-ACP溶液可于体外使脱矿牙釉质发生再矿化,且矿化作用可被氟加强;再矿化作用与CPP稳定的钙磷浓度呈剂量-效应关系。

食品加工条件及主要成分对CPPs延缓磷酸钙沉淀能力的影响

对食品加工条件(温度、pH值)、食品中的主要组分(葡萄糖、蔗糖、淀粉、蛋白质)、及VC和苯甲酸钠等对CPP在pH8时延缓磷酸钙沉淀形成能力的影响进行了研究。其结果为:加热温度在100℃以下时,对CPP活性无影响,在pH8～9时CPP仍能延缓磷酸钙沉淀的形成;应用CPP时在蛋白质含量高、淀粉含量低的条件下较好。

重组β-CPP二聚体真核表达载体的构建及表达产物的结构分析

β- CPP作为一种促进 Ca2 + 等离子吸收和细胞融合的活性短肽有着广泛的应用前景。为深入研究其生物学功能 ,采用基因工程方法得到β- CPP的二聚串联体基因并以此为基础构建真核表达载体 ,对其结构进行分析 ,为进一步表达重组β- CPP二聚体蛋白奠定基础。

酪蛋白磷酸肽(CPP)对铁吸收影响的研究

通过动物试验研究了CPP对铁吸收的影响。试验表明：加入FeSO4和0.1%CPP加FeSO4的饲料对贫血大鼠血红蛋白、红细胞数及血细胞压积的影响比缺铁性饲料喂饲大鼠的血液指标有显著影响（P<0.01或P<0.05），且缺铁性贫血的大鼠血液指标恢复较好，分别达到112.6 g/L、159.1 g/L；7.94×1012/L、8.78×1012/L；40.76%、47.59%，并且CPP和FeSO4同时添加组的效果优于添加FeSO4组的效果。

CPP-ACP抑制乳牙人工釉质龋的显微放射定量研究

目的:观察5%酪蛋白磷酸肽-非结晶型磷酸钙(CPP-ACP)溶液对体外形成的乳牙人工釉质龋的抑制作用。方法:30个拔除的滞留乳下切牙唇面开窗,置于乳酸凝胶中30h形成初期人工龋后随机分为3组,各组从开窗区中央劈开分为2部分,一半作为龋损基线,另一半分别用5%CPP-ACP、2%NaF和去离子水处理36h,再次放入乳酸凝胶中30h。标本磨片拍摄显微放射照片并测定龋损深度及脱矿量。结果:5%CPP-ACP组和2%NaF组形成的人工龋损深度浅,脱矿量变化小,与去离子水组有显著性差异(P<0.01),5%CPP-ACP组和2%NaF组龋损深度及脱矿量处理前后差异无显著性(P>0.05),而去离子水处理组处理前后差异显著(P<0.01)。结论:5%CPP-ACP对乳牙人工釉质龋损有抑制作用,其作用与2%NaF组相似。

酪蛋白磷酸肽(CPP)对肉仔鸡矿物质代谢的影响

采用2×3二因素随机试验设计,钙水平分别为0.5%和1.0%,酪蛋白磷酸肽(CPP)水平分别为0%、0.1%和0.5%。选用144只1日龄AA肉仔鸡,公母各半,随机分为6组,每组4个重复,每个重复6只鸡,试验期为4周。试验结果表明:①CPP对肉仔鸡日增重、日耗料量和料肉比影响不显著(P>0.05)。②CPP对肉仔鸡血液红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、钙、磷、铁、铜、锌和锰含量的影响不显著(P>0.05)。③CPP能显著提高肉仔鸡胫骨中钙和铁的含量(P<0.01),0.5%CPP显著提高胫骨灰分(P<0.01)以及铜、锌和锰含量(P<0.05),胫骨参数及磷含量差异不显著(P>0.05)。④CPP显著提高肝脏铁、锰(P<0.05)以及锌含量(P<0.01),但肝脏铜浓度差异不显著(P>0.05)。

防龋齿口香糖中糖醇类成分对CPPs延缓磷酸钙沉淀性能的影响

防龋齿口香糖常用糖醇类成分(木糖醇、山梨醇、甘露醇)及热加工条件等对酪蛋白磷酸肽(CPPs)延缓磷酸钙沉淀形成能力的影响进行研究。研究表明温度在100℃以下时,对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力没有太大的影响。当浓度在2%～14%范围内,甘露醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用;山梨醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有减弱作用;而木糖醇在浓度小于6%时对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用,大于6%有减弱作用。

生物活性肽——酪蛋白磷酸肽(CPP)的研制

摸索了 2 70 9碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPP的最佳工艺条件 :底物浓度 1 0 %、用酶量 1 50 0U/g底物、反应温度 45℃、pH1 0 5、反应时间 1 50min。采用选择淀淀法分离CPP ,在pH 4 .5添加 1 1 %CaCl2 (w/v)和50 % (v/v)乙醇 ,室温沉淀 4h,得到CPP产品的N/P、得率分别为 6 39和 1 3 94%。