CPPs阻钙沉淀活性与酪蛋白水解度之间关系的研究

通过对在不同的酶与底物浓度比下所得CPPs的特性进行研究，从而找出了在不同水解度下所得CPPs的阻钙沉淀性能与酪蛋白水解度之间的关系。即当酶与底物的比不同时，所得CPPs的N/P不同；N/P不同，其CPPs阻钙沉淀活性也不同。当N/P高时，CPPs的阻钙沉淀活性较低；N/P低时，CPPs的阻钙沉淀活性高。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)的纯化研究

研究了用大孔强碱性阴离子交换树脂提纯酪蛋白磷酸肽（ CPPs）的方法。结果表明，树脂 GM201对 CPPs的分离提纯效果较好，最佳洗脱纯化工艺条件为：盐酸浓度 0.2mol/L， NaCl浓度 0.3mol/L，温度 45℃。在上述最佳工艺条件下， CPPs回收率可达 77.7％～ 80％，纯度提高到 N:P=4.7:4.9。

生物活性肽─酪蛋白磷酸肽(CPPs)的研究、应用及展望

酪蛋白的基本功能是为生物体提供氨基酸和氨源。但是，人们似乎并没有注意到奶蛋白，尤其是酪蛋白，还是生物活性肽的主要来源。在离体和在体条件下，通过蛋白酶水解酪蛋白均得到一系列生物活性肽。这些活性肽按照其生物学作用有：促进营养吸收的，如：磷酸肽，类吗啡因子；饭后促激素分泌的，如：类吗啡因子；激活免疫活性的，如：免疫活性肽，酪激肽．类吗啡因子；以及神经性内分泌信号传递体，如：酪激肽。酪蛋白磷酸肽（CPPs）是可以促进钙质吸收的生物活性肽。已经发现CPPs不仅可以促进钙质吸收，还可以有效地促进锌、铁等的吸收，也可以防止蛀牙，可以用于牙膏、漱口液等。日本和德国已经把CPPs定为功能性食品。但是，到目前为止．中国在这方面只有很少的研究，所以该综述意在介绍CPPs研究的主要工作，并展望它的研究和应用前景。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)测定方法的研究

酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides简称CPPs)是到目前为止所发现的唯一具促钙吸收作用的短肽。在日本和德国已经由国家列入重点推荐的功能性食品添加剂。由于其生物活性中心为：－SerP－SerP－SerP－Glu－Glu－，所以CPPs实际上是一系列含有磷酸丝氨酸簇的短肽。国外主要用高效毛细管区带电泳(High performance capillary zone electrophoresis,HPCE)和高效液相色谱(HPLC)对CPPs进行定量测定和纯度测定。这些方法所需设备昂贵，对操作人员素质要求高，不能适应不同层次的要求。本项研究对直接定磷法、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)法、聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(IEF)法测定CPPs进行了探讨和比较。结果表明：这三种方法都可以用来对CPPs进行定量测定，但适用于不同情况，定磷法适用于产业测定；SDS－PAGE法适用于CPPs的组分测定，而IEF则适用于较精确的测定。

利用2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPPs的研究

酪蛋白磷酸肽简称CPPs(Casein phosphopeptides)，是一种具有多种生物活性的多肽。国外已经对其制备方法进行了大量研究，但是目前用于工业化生产的主要还是用胰蛋白酶水解酪蛋白或β-酪蛋白来获得。但是胰蛋白酶价格比较昂贵，用其进行工业化生产必定增加成本。本项研究改用价格十分廉价的2709碱性蛋白酶水解酪蛋白得到了和胰蛋白酶水解酪蛋白同样的产品，实验结果表明利用2709碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPPs可以大大降低成本。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)制备条件研究

研究了以牛奶酪蛋白为原料制备 CPPs的工艺过程及条件 .以氮、磷含量为指标 ,通过正交试验 ,确定了在胰蛋白酶作用下制备 CPPs的最佳条件为 :最适温度 40℃ ,水解时间 80 min,底物浓度15 % ,底物与酶之比为 10 0∶

食品加工条件及主要成分对CPPs延缓磷酸钙沉淀能力的影响

对食品加工条件(温度、pH值)、食品中的主要组分(葡萄糖、蔗糖、淀粉、蛋白质)、及VC和苯甲酸钠等对CPP在pH8时延缓磷酸钙沉淀形成能力的影响进行了研究。其结果为:加热温度在100℃以下时,对CPP活性无影响,在pH8～9时CPP仍能延缓磷酸钙沉淀的形成;应用CPP时在蛋白质含量高、淀粉含量低的条件下较好。

防龋齿口香糖中糖醇类成分对CPPs延缓磷酸钙沉淀性能的影响

防龋齿口香糖常用糖醇类成分(木糖醇、山梨醇、甘露醇)及热加工条件等对酪蛋白磷酸肽(CPPs)延缓磷酸钙沉淀形成能力的影响进行研究。研究表明温度在100℃以下时,对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力没有太大的影响。当浓度在2%～14%范围内,甘露醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用;山梨醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有减弱作用;而木糖醇在浓度小于6%时对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用,大于6%有减弱作用。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)研究进展

酪蛋白磷酸肽(CPPs)是含有成簇的磷酸丝氨酸生物活性肽,现已证明,CPPs具有重要生理功能。本文介绍CPPs的结构与功能、制备工艺和检测方法,并展望其发展前景。

仿生再矿化治疗在牙釉质早期脱矿的作用及机制

背景:随着饮食改善和生活水平提高,酸性饮食和正畸治疗等成为导致牙釉质表面脱矿的主要原因。作为牙齿龋坏的第一步,牙釉质脱矿应被积极干预,机械磨除损伤较大且不符合微创医学理念,仿生再矿化是目前应对牙釉质脱矿的最佳方式。目的:通过对牙釉质早期脱矿的仿生再矿化治疗机制、应用方式及研究进展进行综述,为进一步攻克仿生再矿化热点难题提供思路。方法:以“Enamel demineralization,Biomimetic remineralization,amelogenin,Amorphous calcium phosphate”等作为英文关键词在PubMed数据库检索,以“釉质脱矿,仿生再矿化,釉原蛋白”等关键词在中国知网数据库进行检索,通过筛选最终共得到72篇文献进行综述分析。结果与结论:①目前针对釉质脱矿有药物治疗如含氟制剂等、激光治疗、树脂渗透、再矿化治疗等治疗方式,仿生再矿化是目前牙釉质早期脱矿最理想的修复方式。②狭义的釉质再矿化指早期釉质脱矿后内部的矿物质再沉积,广义的釉质再矿化包括釉质表面和内部两方面的矿化沉积。③临床仿生再矿化试剂多以釉原蛋白、非釉原蛋白、釉原蛋白肽、酪蛋白磷酸肽-不定形磷酸钙复合物等为主要成分。蛋白及肽类材料优势在于符合生理机制,可通过诱导定向生成高强度再矿化材料,劣势在于制作工艺相对复杂,成本较高;不定形磷酸钙复合物再矿化效果好,但需与其他材料结合使用以发挥作用;其他磷酸钙材料便于携带、有利美观,但易导致牙石形成。④未来研究应着重于以下几个方面:增加随机对照试验数据和临床结果,明确各个方式的适应证;发掘更多仿生再矿化方法,寻找合适替代材料;寻找合理的材料结合方式,以使其优缺点互补;加强临床应用便携性,以增加日常使用频率,使短期实验结论获得长期临床数据支持。

牦牛与奶牛酪蛋白制备的CPPs分子量分布及其生物功能研究

牦牛或奶牛酪蛋白CPPs粗制品,经阴离子交换精制后获得的高磷组分具有相似的高效分子排阻层析(HPSEC)谱图,均分离出3个峰,分子量依次在15000￣16500u之间、4000￣5000u之间及2500u左右。采用体外消化模拟实验研究了CPPs样品的促钙吸收能力,证实牦牛与奶牛酪蛋白CPPs在促钙吸收能力方面无明显差异。探讨了CPPs制品的促钙吸收能力与r(N/P)、分子量大小分布之间的关系,结果表明:牦牛与奶牛酪蛋白CPPs的r(N/P)值越小其促钙吸收能力越强,而且分子量小于5000u组分在CPPs制品中所占百分率增加,则其r(N/P)呈下降趋势。

全效利用乳酪蛋白制备CPPs与CNPPs研究进展

综述了国内外酪蛋白源生物活性肽产品的开发研究进展,综合国内外市场酪蛋白磷酸肽(CPPs)开发现状,提出了开发CPPs的同时充分利用酪蛋白非磷酸肽(CNPPs),在工业化规模上全面利用酪蛋白资源生产生物活性肽的建议.

牦牛与奶牛酪蛋白制备CPPs的酶工艺优化及其离子交换纯化研究

优化了以牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白为原料酶法制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)的工艺条件,并评估了离子交换对CPPs粗制品的纯化效果。结果表明,牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白的产率最优化条件以及氮磷比r(N/P)最优化的酶解工艺条件均基本一致,产率最大的胰蛋白酶酶解工艺条件为:底物浓度13.1%,酶解反应时间104min,酶底物浓度比0.9%;r(N/P)最优(小)的酶解工艺条件为:底物浓度7.6%,酶解反应时间155min,酶底物浓度比1.2%。牦牛及奶牛CPPs粗制品经过阴离子交换树脂纯化后,所获得的精制CPPs其r(N/P)均明显降低,对于CPPs的产率最优样品其r(N/P)由原来的12.2￣12.4降低到6.3￣6.9;对于r(N/P)最优样品,其r(N/P)由原来的9.90￣9.95进一步降低至5.6￣5.8。研究表明:无论以产率或制品质量为优化指标,牦牛与奶牛酪蛋白的酶解工艺优化条件基本一致,而且利用阴离子交换树脂处理可以有效地降低CPPs粗制品的r(N/P)、提高制品的质量。

LF抗菌作用和CPPs促钙吸收功能及其影响因素

乳铁蛋白(LF)和酪蛋白磷酸肽(CPPs)均为天然功能性营养成分,具有抑菌、抗氧化、增强免疫力及促进钙、铁、锌等矿物质吸收等多种生物学功能。对乳铁蛋白的抗大肠杆菌性能和酪蛋白磷酸肽延缓磷酸钙沉淀效果及木糖醇、Vc等成分对其功能影响进行研究。结果显示,LF浓度在2.0g/L时抑菌效果较强;CPPs浓度大于0.2g/L时有较好的延缓磷酸钙沉淀效果;Vc浓度0.8g/L,木糖醇浓度20.0g/L时,对乳铁蛋白抑菌效果及CPPs促钙吸收均有促进作用。

不同检测方法测定婴幼儿配方奶粉中CPPs含量的比较研究

本研究比较了传统沉淀法、HPLC法和HPLC-MS/MS法在婴幼儿配方奶粉中CPPs的测定。结果表明,传统沉淀法测定2个婴幼儿配方奶粉样品CPPs含量的RSD均大于5%,而HPLC法和HPLC-MS/MS法的RSD则均小于5%,这表明HPLC法和HPLC-MS/MS法在婴幼儿配方奶粉CPPs测定中优于沉淀法。HPLC法和HPLCMS/MS法两者回收率和精密度无明显差异,但HPLC法测定婴幼儿配方奶粉CPPs的检出限为6.5mg/100g,而HPLC-MS/MS法的检出限为0.9mg/100g。考虑到婴幼儿配方奶粉中实际添加量远高于方法检出限,且HPLC应用更广泛,成本也更低,因此本研究认为HPLC法更适合在婴幼儿配方奶粉CPPs含量测定中应用。

酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的分级、表征及持钙特性

利用酪蛋白磷酸肽螯合钙离子的特性,以钙离子浓度为尺度,分级制取不同钙螯合能力的CPPs,同时提高其纯度。以酪蛋白的胰蛋白酶酶解产物为原料,通过逐级增加Ca^(2+)添加量,在终浓度为55%(v/v)的乙醇溶液中分级沉淀出三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分(CPP1-Ca、CPP2-Ca和CPP3-Ca),并利用PBS脱钙得到三个级分相应的酪蛋白磷酸肽(CPP1、CPP2和CPP3)。以传统钙乙醇沉淀法得到的肽钙螯合物(CPP-Ca)为对照,分析并对比三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分的理化性质以及持钙特性。结果表明,三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分中,CPP3-Ca含有最高的纯度和钙螯合量,分别为89.42%和69.59 mg/g,明显高于未分级CPP-Ca的83.77%和55.05 mg/g。氨基酸组成及N/P(摩尔比)分析发现CPP3-Ca含有更高磷酸丝氨酸基团,进而能够结合更多的Ca^(2+)。不同酪蛋白磷酸肽级分持钙能力分析结果显示CPP3能够更好地延迟和阻止磷酸钙沉淀的形成,具有更高的持钙能力。同时CPP3-Ca在模拟肠道环境中具有更高的钙溶解度,表明分级后的酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的体外生物利用度提高。

酪蛋白磷酸肽提高矿物质元素生物利用度的研究进展

酪蛋白磷酸肽作为“矿物质载体”,因其具有特殊的磷酸丝氨酸结构,可以有效提高机体对矿物质元素的生物利用度。研究表明,酪蛋白磷酸肽能够螯合金属阳离子,生成可溶性络合物,保护矿物质元素,提高中性至碱性生理环境下矿物质元素的生物利用度,避免矿物质元素与同时摄入的食物组分或其他矿物质元素间反应造成的不利影响。酪蛋白磷酸肽不仅可以促进矿物质元素吸收,同时能够补充具有重要生物活性的肽类物质,在制药、功能性食品、保健食品和绿色添加剂等领域具有广泛的应用和开发前景。

牦牛乳酪蛋白磷酸肽纯化工艺优化及其促钙吸收作用

为了探究牦牛乳酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptide,CPP)产品性质和持钙能力,该试验以牦牛乳酪蛋白为原料,采用胰蛋白酶酶解,静态吸附试验确定洗脱剂,同时分析上样量、上样流速、洗脱液浓度对CPP纯化工艺的影响;测定纯化后CPP的基本成分、功能性质、体外抑制磷酸钙和亚铁离子沉淀能力;建立低钙小鼠模型,以体质量、脏器指数、血清生化、股骨指数、骨密度和骨钙为指标,探究CPP在小鼠体内促钙吸收能力。结果表明:以0.2 mol/L稀盐酸为洗脱液,上样流速3 mL/min,上样量100 mL条件下获得的CPP纯化效果最优,其氮磷摩尔比为6.8,磷回收率为95.5%,谷氨酸含量18.55%,丝氨酸含量6.01%;体外促钙实验表明纯化后CPP能有效阻止磷酸钙、亚铁离子沉淀;动物实验结果表明:经28 d喂养,所有小鼠内脏指数均在合理范围内,纯化后CPP无慢性毒性,中高剂量组血钙、血磷含量显著高于模型组(P<0.05),碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)值极显著低于模型组(P<0.01),高剂量组股骨指数显著高于碳酸钙组(P<0.05),CPP中、高剂量组骨钙、骨密度显著高于模型组(P<0.05)。综上,该实验可为牦牛乳功能性食品开发提供理论依据,为后续牦牛乳生物活性肽的相关研究提供参考。

掺钕钇铝钙钛晶体激光结合两种再矿化制剂与早期釉质龋的再矿化

背景:近年来,多种激光被广泛应用于口腔医学相关的各种疾病,包括龋病的预防及治疗。目的:探讨掺钕铝酸钇晶体(neodymium-doped:yttrium aluminum perovskite,Nd:YAP)激光联合两种再矿化制剂对早期釉质龋再矿化的作用。方法:将60颗牙釉质块体外建立人工龋模型后,随机分为6组(n=10):A组不进行任何处理,行体外pH循环;B组进行护牙素(主要成分为酪蛋白磷酸钙复合体)再矿化处理,行体外pH循环;C组进行舒适达牙膏(主要成分为生物活性玻璃)再矿化处理,行体外pH循环;D组进行Nd:YAP激光照射,行体外pH循环;E组进行Nd:YAP激光照射,然后进行护牙素再矿化处理,行体外pH循环;F组进行Nd:YAP激光照射,然后舒适达牙膏再矿化处理,行体外pH循环;再矿化处理2次/d,实验周期20 d。G组为正常对照,未致龋,未进行再矿化处理,仅行体外pH循环。实验结束后,检测各组牙釉质表面的显微硬度、形貌与Ca/P比值。结果与结论:①B、C、D组牙釉质表面的硬度值高于A组(P<0.0001),E、F组牙釉质表面的硬度值明显高于B、C、D组(P<0.0001),F组牙釉质表面的硬度值明显高于E组(P<0.0001);②扫描电镜下可见,A组牙釉质表面存在大量的脱矿孔隙;B组牙釉质表面有矿物质沉积,沉积不均匀且较为疏松;C组牙釉质表面有大量矿物质沉积,且钙化团块间可见脱矿孔隙;D组牙釉质表面较为平整,脱矿孔隙较A组明显变小,釉柱间质有破坏;E组牙釉质表面矿物质沉积较厚,脱矿孔隙明显减少;F组牙釉质表面沉积的矿化物最为致密且均匀,脱矿孔隙细小;③B、C组牙釉质表面Ca/P比值明显高于A组(P<0.0001),E组牙釉质表面Ca/P比值明显高于B、C、D组(P<0.0001),F组牙釉质表面Ca/P比值高于E组(P<0.001);③结果显示,生物活性玻璃、酪蛋白磷酸钙复合体、Nd:YAP激光在牙釉质脱矿后均具有促进牙釉质表面再矿化的作用,Nd:YAP激光联合生物活性玻璃或酪蛋白磷酸钙复合体能进一步加强牙釉质龋的再矿化作用,其中Nd:YAP激光和生物活性玻璃的联合使用效果最佳。

婴幼儿辅助食品中配料和膳食补充成分对酪蛋白磷酸肽持钙能力的影响

比较研究婴幼儿辅助食品中肉类、果蔬和谷物等配料以及维生素和蛋白质等膳食补充成分,对三种酪蛋白磷酸肽产品持钙能力强弱的影响。研究结果表明,大米和小麦对婴幼儿辅助食品中酪蛋白磷酸肽的持钙能力有一定的不良影响,但大米和小麦添加量在50%~85%的范围未显著改变酪蛋白磷酸肽的持钙能力。添加3%以上的肉类和果蔬类配料的添加量显著降低了酪蛋白磷酸肽的持钙能力。20 mg/kg的烟酰胺降低了酪蛋白磷酸肽的持钙能力,而其它维生素、乳清蛋白和大豆蛋白则未对其产生显著影响。进一步分析发现,肉类配料中脂肪和蛋白质以及果蔬类配料中的酚类化合物可能是影响酪蛋白磷酸肽持钙能力的关键因素。本文对于明确婴幼儿辅助食品中影响酪蛋白磷酸肽持钙能力的因素,使其更好地发挥功效具有一定的指导意义。