酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的分级、表征及持钙特性

利用酪蛋白磷酸肽螯合钙离子的特性,以钙离子浓度为尺度,分级制取不同钙螯合能力的CPPs,同时提高其纯度。以酪蛋白的胰蛋白酶酶解产物为原料,通过逐级增加Ca^(2+)添加量,在终浓度为55%(v/v)的乙醇溶液中分级沉淀出三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分(CPP1-Ca、CPP2-Ca和CPP3-Ca),并利用PBS脱钙得到三个级分相应的酪蛋白磷酸肽(CPP1、CPP2和CPP3)。以传统钙乙醇沉淀法得到的肽钙螯合物(CPP-Ca)为对照,分析并对比三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分的理化性质以及持钙特性。结果表明,三个酪蛋白磷酸肽-钙螯合物级分中,CPP3-Ca含有最高的纯度和钙螯合量,分别为89.42%和69.59 mg/g,明显高于未分级CPP-Ca的83.77%和55.05 mg/g。氨基酸组成及N/P(摩尔比)分析发现CPP3-Ca含有更高磷酸丝氨酸基团,进而能够结合更多的Ca^(2+)。不同酪蛋白磷酸肽级分持钙能力分析结果显示CPP3能够更好地延迟和阻止磷酸钙沉淀的形成,具有更高的持钙能力。同时CPP3-Ca在模拟肠道环境中具有更高的钙溶解度,表明分级后的酪蛋白磷酸肽-钙螯合物的体外生物利用度提高。

酪蛋白磷酸肽提高矿物质元素生物利用度的研究进展

酪蛋白磷酸肽作为“矿物质载体”,因其具有特殊的磷酸丝氨酸结构,可以有效提高机体对矿物质元素的生物利用度。研究表明,酪蛋白磷酸肽能够螯合金属阳离子,生成可溶性络合物,保护矿物质元素,提高中性至碱性生理环境下矿物质元素的生物利用度,避免矿物质元素与同时摄入的食物组分或其他矿物质元素间反应造成的不利影响。酪蛋白磷酸肽不仅可以促进矿物质元素吸收,同时能够补充具有重要生物活性的肽类物质,在制药、功能性食品、保健食品和绿色添加剂等领域具有广泛的应用和开发前景。

牦牛乳酪蛋白磷酸肽纯化工艺优化及其促钙吸收作用

为了探究牦牛乳酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptide,CPP)产品性质和持钙能力,该试验以牦牛乳酪蛋白为原料,采用胰蛋白酶酶解,静态吸附试验确定洗脱剂,同时分析上样量、上样流速、洗脱液浓度对CPP纯化工艺的影响;测定纯化后CPP的基本成分、功能性质、体外抑制磷酸钙和亚铁离子沉淀能力;建立低钙小鼠模型,以体质量、脏器指数、血清生化、股骨指数、骨密度和骨钙为指标,探究CPP在小鼠体内促钙吸收能力。结果表明:以0.2 mol/L稀盐酸为洗脱液,上样流速3 mL/min,上样量100 mL条件下获得的CPP纯化效果最优,其氮磷摩尔比为6.8,磷回收率为95.5%,谷氨酸含量18.55%,丝氨酸含量6.01%;体外促钙实验表明纯化后CPP能有效阻止磷酸钙、亚铁离子沉淀;动物实验结果表明:经28 d喂养,所有小鼠内脏指数均在合理范围内,纯化后CPP无慢性毒性,中高剂量组血钙、血磷含量显著高于模型组(P<0.05),碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)值极显著低于模型组(P<0.01),高剂量组股骨指数显著高于碳酸钙组(P<0.05),CPP中、高剂量组骨钙、骨密度显著高于模型组(P<0.05)。综上,该实验可为牦牛乳功能性食品开发提供理论依据,为后续牦牛乳生物活性肽的相关研究提供参考。

仿生再矿化治疗在牙釉质早期脱矿的作用及机制

背景:随着饮食改善和生活水平提高,酸性饮食和正畸治疗等成为导致牙釉质表面脱矿的主要原因。作为牙齿龋坏的第一步,牙釉质脱矿应被积极干预,机械磨除损伤较大且不符合微创医学理念,仿生再矿化是目前应对牙釉质脱矿的最佳方式。目的:通过对牙釉质早期脱矿的仿生再矿化治疗机制、应用方式及研究进展进行综述,为进一步攻克仿生再矿化热点难题提供思路。方法:以“Enamel demineralization,Biomimetic remineralization,amelogenin,Amorphous calcium phosphate”等作为英文关键词在PubMed数据库检索,以“釉质脱矿,仿生再矿化,釉原蛋白”等关键词在中国知网数据库进行检索,通过筛选最终共得到72篇文献进行综述分析。结果与结论:①目前针对釉质脱矿有药物治疗如含氟制剂等、激光治疗、树脂渗透、再矿化治疗等治疗方式,仿生再矿化是目前牙釉质早期脱矿最理想的修复方式。②狭义的釉质再矿化指早期釉质脱矿后内部的矿物质再沉积,广义的釉质再矿化包括釉质表面和内部两方面的矿化沉积。③临床仿生再矿化试剂多以釉原蛋白、非釉原蛋白、釉原蛋白肽、酪蛋白磷酸肽-不定形磷酸钙复合物等为主要成分。蛋白及肽类材料优势在于符合生理机制,可通过诱导定向生成高强度再矿化材料,劣势在于制作工艺相对复杂,成本较高;不定形磷酸钙复合物再矿化效果好,但需与其他材料结合使用以发挥作用;其他磷酸钙材料便于携带、有利美观,但易导致牙石形成。④未来研究应着重于以下几个方面:增加随机对照试验数据和临床结果,明确各个方式的适应证;发掘更多仿生再矿化方法,寻找合适替代材料;寻找合理的材料结合方式,以使其优缺点互补;加强临床应用便携性,以增加日常使用频率,使短期实验结论获得长期临床数据支持。

掺钕钇铝钙钛晶体激光结合两种再矿化制剂与早期釉质龋的再矿化

背景:近年来,多种激光被广泛应用于口腔医学相关的各种疾病,包括龋病的预防及治疗。目的:探讨掺钕铝酸钇晶体(neodymium-doped:yttrium aluminum perovskite,Nd:YAP)激光联合两种再矿化制剂对早期釉质龋再矿化的作用。方法:将60颗牙釉质块体外建立人工龋模型后,随机分为6组(n=10):A组不进行任何处理,行体外pH循环;B组进行护牙素(主要成分为酪蛋白磷酸钙复合体)再矿化处理,行体外pH循环;C组进行舒适达牙膏(主要成分为生物活性玻璃)再矿化处理,行体外pH循环;D组进行Nd:YAP激光照射,行体外pH循环;E组进行Nd:YAP激光照射,然后进行护牙素再矿化处理,行体外pH循环;F组进行Nd:YAP激光照射,然后舒适达牙膏再矿化处理,行体外pH循环;再矿化处理2次/d,实验周期20 d。G组为正常对照,未致龋,未进行再矿化处理,仅行体外pH循环。实验结束后,检测各组牙釉质表面的显微硬度、形貌与Ca/P比值。结果与结论:①B、C、D组牙釉质表面的硬度值高于A组(P<0.0001),E、F组牙釉质表面的硬度值明显高于B、C、D组(P<0.0001),F组牙釉质表面的硬度值明显高于E组(P<0.0001);②扫描电镜下可见,A组牙釉质表面存在大量的脱矿孔隙;B组牙釉质表面有矿物质沉积,沉积不均匀且较为疏松;C组牙釉质表面有大量矿物质沉积,且钙化团块间可见脱矿孔隙;D组牙釉质表面较为平整,脱矿孔隙较A组明显变小,釉柱间质有破坏;E组牙釉质表面矿物质沉积较厚,脱矿孔隙明显减少;F组牙釉质表面沉积的矿化物最为致密且均匀,脱矿孔隙细小;③B、C组牙釉质表面Ca/P比值明显高于A组(P<0.0001),E组牙釉质表面Ca/P比值明显高于B、C、D组(P<0.0001),F组牙釉质表面Ca/P比值高于E组(P<0.001);③结果显示,生物活性玻璃、酪蛋白磷酸钙复合体、Nd:YAP激光在牙釉质脱矿后均具有促进牙釉质表面再矿化的作用,Nd:YAP激光联合生物活性玻璃或酪蛋白磷酸钙复合体能进一步加强牙釉质龋的再矿化作用,其中Nd:YAP激光和生物活性玻璃的联合使用效果最佳。

婴幼儿辅助食品中配料和膳食补充成分对酪蛋白磷酸肽持钙能力的影响

比较研究婴幼儿辅助食品中肉类、果蔬和谷物等配料以及维生素和蛋白质等膳食补充成分,对三种酪蛋白磷酸肽产品持钙能力强弱的影响。研究结果表明,大米和小麦对婴幼儿辅助食品中酪蛋白磷酸肽的持钙能力有一定的不良影响,但大米和小麦添加量在50%~85%的范围未显著改变酪蛋白磷酸肽的持钙能力。添加3%以上的肉类和果蔬类配料的添加量显著降低了酪蛋白磷酸肽的持钙能力。20 mg/kg的烟酰胺降低了酪蛋白磷酸肽的持钙能力,而其它维生素、乳清蛋白和大豆蛋白则未对其产生显著影响。进一步分析发现,肉类配料中脂肪和蛋白质以及果蔬类配料中的酚类化合物可能是影响酪蛋白磷酸肽持钙能力的关键因素。本文对于明确婴幼儿辅助食品中影响酪蛋白磷酸肽持钙能力的因素,使其更好地发挥功效具有一定的指导意义。

酪蛋白磷酸肽与维生素D促钙吸收作用机制研究进展

近年来,公众对健康的认识及重视程度不断加深,如何补充吸收利用率较差的营养物质已成为研究热点。钙作为人体必需的28种“生命元素”之一,在人体生长发育及机体调节等生理过程中发挥着重要的作用,而现有补钙制剂存在着稳定性差、生物利用率低等问题,如何提高钙离子的吸收利用得到广泛关注。目前已有研究证明维生素D及酪蛋白磷酸肽具有良好的促进钙吸收功效,本文概述了维生素D及酪蛋白磷酸肽的促钙吸收机制,旨在阐明维生素D与酪蛋白磷酸肽协同作用对促钙吸收的积极影响,同时为新型补钙制剂的开发利用提供一定参考。

再矿化材料在根面龋防治方面的研究进展

根面龋主要发生于老年人,龋损进展较快且充填后易产生继发龋,临床防治及预后效果不佳。再矿化材料可改善局部微环境、抑制菌斑生物膜形成、有效抑制脱矿和促进再矿化,符合口腔微创可再生治疗的理念,在满足无创伤修复要求的同时,对牙根部早期龋的治疗效果优于冠部龋,因此受到广泛重视。其中以氟化物最为常用,可添加到牙膏、漱口水、预处理剂、充填修复材料中发挥效果,与其他再矿化成分协同使用时效果更佳。目前精氨酸、中药等有机成分和生物活性玻璃、纳米羟基磷灰石等无机成分在体外实验中再矿化及抗菌效果肯定,但具体机制、最适浓度、协同应用影响因素及添加到充填材料中对其性能的影响仍需进一步探讨;材料在体内应用的生物安全性、长期有效性也需大量实验进一步追踪。本文就近年来用于根面龋防治的各种再矿化材料的特点、作用机制及研究进展作一综述。

口腔酸碱环境下渗透树脂联合再矿化对釉质白斑治疗稳定性影响的实验研究

目的:在口腔酸碱循环环境下观察比较渗透树脂联合不同再矿化治疗釉质白斑后釉质粗糙度、硬度以及Ca/P比的变化情况。方法:72颗完整离体前磨牙在牙冠颊面正中切取4 mm×4 mm×2 mm釉质块。在其表面(除颊侧面外)涂布抗酸指甲油后,置于脱矿液中3 d,建立釉质白斑体外脱矿模型。经渗透树脂处理后,用抗酸指甲油覆盖一半釉质面作为自身对照侧,另一半作为实验侧。将样本随机分为3组(n=24),RI组不做再矿化处理,RI/B组行生物活性玻璃处理(2次/日),RI/C组行含氟酪蛋白磷酸肽/无定形磷酸钙(CPP-ACPF)处理(2次/日),共计7 d。除再矿化治疗外,所有样本均置于酸碱循环溶液中。去除对照侧覆盖的指甲油记为酸碱循环前(T_(0)时刻),实验侧为酸碱循环后(T_(1)时刻)。观察并测量各组样本酸碱循环前后粗糙度、显微硬度及Ca/P比并行统计学分析。结果:再矿化和酸碱循环均可显著影响渗透树脂处理后釉质表面粗糙度和Ca/P比(P<0.05)。经酸碱循环后,3组样本的粗糙度值均有增加,但RI/B组增加值(T_(1)-T_(0))最少,RI/C组次之,RI组增加最多(P<0.05);3组显微硬度值均略有降低但无统计学差异(P>0.05);3组Ca/P比均显著性降低(P<0.05),但RI组降低最多,RI/B组降低最少。结论:釉质白斑树脂渗透治疗后,在酸碱循环环境下出现粗糙度增加、硬度及Ca/P比降低;联合生物活性玻璃或CPP-ACPF再矿化治疗,可以有效改善釉质抗脱矿能力,提高渗透树脂治疗稳定性。

定量光导荧光技术评价CPP-ACP联合多乐氟对釉质抗酸性影响的实验研究

目的利用定量光导荧光技术,研究酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(CPP-ACP)联合多乐氟对釉质抗酸性的影响及作用。方法收集在右江民族医学院附属医院口腔科就诊正畸减数前磨牙32颗,随机分为4组,分别为去离子水组、CPP-ACP组、多乐氟组及联合组,每组8颗牙,术前使用定量光导荧光系统检测各组基线处的荧光损失量(△F)、脱矿面积(Area)、病变体积(△Q)值,去离子水组未作特殊处理,CPP-ACP组、多乐氟组、CPP-ACP联合多乐氟组实验分别进行CPP-ACP涂布、多乐氟涂布、CPP-ACP联合多乐氟涂布,将所有标本放入脱矿液中72 h,72 h后停止实验,定量光导荧光系统拍摄每组标本的荧光图像,对数据进行统计学分析。结果①脱矿前QLF值:4组各QLF变量基线值间差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性;②QLF荧光图片结果:4个不同处理组表现病损区荧光强度的损失,但病损的严重程度不一,其中联合组颊侧面形成的病损面积最少,荧光损失最轻;③脱矿后QLF值:与去离子水组比较,CPP-ACP组、多乐氟组以及联合组的早期龋病损较轻,其中联合组△F、Area、△Q最少。各组脱矿后△F、Area、△Q差异比较具有统计学意义(P<0.05);组间两两比较,各组组间△F、Area、△Q差异均具有统计学意义(P<0.05);④扫描电镜结果:原样标本釉质表面平整,无釉柱晶体溶解及孔隙结构;去离子水组呈典型酸蚀样外观;CPP-ACP组、多乐氟组、联合组釉质表面地貌均有一定程度的破坏,联合组破坏最轻。结论QLF可以作为一种对釉质早期龋矿物质含量动态变化进行定量的诊断方法;CPP-ACP、多乐氟均能抑制釉质脱矿,其中两者联合使用时抗酸效果最佳,多乐氟次之,CPP-ACP抗酸作用最弱。

酪蛋白磷酸肽的功能性研究进展

酪蛋白磷酸肽是以牛奶酪蛋白为原料,经过酶水解并分离纯化后得到的含有磷酸丝氨酸簇的生物活性肽。它能促进机体肠黏膜对钙、铁和锌等矿物盐的吸收利用,被誉为“矿物质载体”。此外,酪蛋白磷酸肽在预防龋齿、影响骨骼形成以及提高机体免疫力等方面也有重要作用。本文针对酪蛋白磷酸肽的功能性进行了总结,并对其在婴幼儿配方奶粉中的应用进行简单介绍。

饲粮中添加酪蛋白磷酸肽对产蛋后期蛋鸡生产性能和钙代谢的影响

为探讨饲粮中添加酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptide,CPP)对产蛋后期蛋鸡钙代谢的影响,试验采用单因素设计,选择800只58周龄海兰褐商品蛋鸡,随机分为5组,对照组(T1组)饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.5(T2组)、1.0(T3组)、1.5(T4组)、2.0(T5组)g/kg CPP。结果表明:与对照组相比,T2、T3、T4组和T5组鸡蛋合格率显著提高(P<0.05);T3组胫骨钙含量和胫骨强度提高,T2、T3组血清中碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.05);在十二指肠中,T2组碳酸酐酶活性提高(P<0.05),T4组钙结合蛋白和钙泵的基因相对表达量显著上调(P<0.05),T3、T5组钠钙交换体的基因相对表达量显著上调(P<0.05);T2、T3组蛋壳腺中钙结合蛋白的含量提高(P<0.05),T2、T3、T4、T5组的碱性磷酸酶基因相对表达量上调(P<0.05),碳酸酐酶基因相对表达量显著下调(P<0.05)。综上,饲粮中添加CPP能够提高鸡蛋合格率、提高蛋鸡肠道和蛋壳腺中相关酶活性,进而促进血清钙含量与胫骨强度的提高;饲粮中添加0.5~1.0 g/kg CPP的T2、T3组效果最佳。

固定化碱性蛋白酶生产CPP的研究

以ＧＭ２０１大孔树脂和壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，对碱性蛋白酶２７０９的固定化条件、固定化酶的性质以及利用固定化酶制备ＣＰＰ进行研究，考察了交联剂的浓度、载体与酶的比例、温度以及ｐＨ等对碱性蛋白酶固定化的影响。确定了固定化最佳条件为以ＧＭ２０１为载体的固定化酶活力回收１９％以上；而以壳聚糖为载体的固定化酶活力回收达到了６６％以上，其最适温度为４５℃，最适ｐＨ８．０，最适底物浓度为４０％，利用固定化酶水解酪蛋白４０ｍｉｎ所制备ＣＣＰ的产率达到了７．５４％。

CPPs阻钙沉淀活性与酪蛋白水解度之间关系的研究

通过对在不同的酶与底物浓度比下所得CPPs的特性进行研究，从而找出了在不同水解度下所得CPPs的阻钙沉淀性能与酪蛋白水解度之间的关系。即当酶与底物的比不同时，所得CPPs的N/P不同；N/P不同，其CPPs阻钙沉淀活性也不同。当N/P高时，CPPs的阻钙沉淀活性较低；N/P低时，CPPs的阻钙沉淀活性高。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)的纯化研究

研究了用大孔强碱性阴离子交换树脂提纯酪蛋白磷酸肽（ CPPs）的方法。结果表明，树脂 GM201对 CPPs的分离提纯效果较好，最佳洗脱纯化工艺条件为：盐酸浓度 0.2mol/L， NaCl浓度 0.3mol/L，温度 45℃。在上述最佳工艺条件下， CPPs回收率可达 77.7％～ 80％，纯度提高到 N:P=4.7:4.9。

酪蛋白磷酸肽（CPP）对大鼠钙吸收利用的影响

酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）是从牛奶中提取出的一种多肽制品，在中性和弱碱性的环境下可提高钙的溶解度和钙溶液的稳定性。将ＣＰＰ按０．５％和０．２％浓度分别加入大鼠基础饲料和低钙饲料中，并设一组含５％脱脂奶粉为阳性对照。每组１０只断乳大鼠，进行四周生长试验和三天代谢试验。结果表明，基础饲料添加０．５％ＣＰＰ组的大鼠钙吸收率和钙储留率比对照组升高６％左右，差别有显著性意义。低钙饲料添加０．２％ＣＰＰ亦使钙吸收率和储留率增加５％～６％，差别有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１）。奶粉的钙吸收率和利用率在各组中最高。ＣＰＰ作为促进钙吸收利用的食品添加剂有进一步研究应用的前景。

Alcalase水解酪蛋白制备磷酸肽和非磷肽的研究

研究了Alcalase水解酪蛋白制备磷酸肽和非磷肽的作用条件,同时分析了酪蛋白磷酸肽(CPPs)和酪蛋白非磷肽(CNPPs)的相对分子质量分布和氨基酸组成。结果表明,Alcalase水解酪蛋白的最佳条件是:底物浓度5%,加酶量0.03mL/g蛋白质,温度60℃,pH9.0。乙醇浓度和酪蛋白的水解度(DH)对CPPs的得率和N/P(摩尔比)均有影响:当乙醇浓度为70%,DH为18%时,CPPs得率达到最高,为23.94%,N/P(摩尔比)是9.61,CNPPs得率为76.06%。CPPs和CNPPs的相对分子质量都分布在200～5000之间,其中低于700的肽含量最高,分别为61.52%和67.26%。CNPPs中疏水性氨基酸含量远高于CPPs。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)测定方法的研究

酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides简称CPPs)是到目前为止所发现的唯一具促钙吸收作用的短肽。在日本和德国已经由国家列入重点推荐的功能性食品添加剂。由于其生物活性中心为：－SerP－SerP－SerP－Glu－Glu－，所以CPPs实际上是一系列含有磷酸丝氨酸簇的短肽。国外主要用高效毛细管区带电泳(High performance capillary zone electrophoresis,HPCE)和高效液相色谱(HPLC)对CPPs进行定量测定和纯度测定。这些方法所需设备昂贵，对操作人员素质要求高，不能适应不同层次的要求。本项研究对直接定磷法、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)法、聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(IEF)法测定CPPs进行了探讨和比较。结果表明：这三种方法都可以用来对CPPs进行定量测定，但适用于不同情况，定磷法适用于产业测定；SDS－PAGE法适用于CPPs的组分测定，而IEF则适用于较精确的测定。

护牙素在正畸治疗中对减少牙齿脱矿及促进再矿化的功效研究

目的评价Tooth Mousse护牙素对减少离体牛牙粘接托槽周围的釉质脱矿及促进再矿化的功效。方法将60颗粘接托槽的离体牛牙随机分成实验组、阳性对照组和阴性对照组,分别在牙面上涂擦Tooth Mousse护牙素、Duraphat氟保护漆和蒸馏水。将3组样本轮流放置入人工致龋液和人工唾液中浸泡,然后使用偏光显微镜、扫描电镜、电子探针检测。结果偏光显微镜下观察,实验组釉质表面完整,主要表现为以脱矿为主的正性双折射区明显减少;扫描电镜观察实验组釉质表面有大量的矿物质沉积,填补釉质表面局限性的小凹陷;电子探针检测结果显示,实验组釉质表面钙、磷含量明显高于阴性对照组(P<0.05),与阳性对照组之间无统计学差异(P>0.05)。结论Tooth Mousse护牙素在体外实验模型中能使牛釉质在人工致龋环境中减少脱矿和促进再矿化。

酪蛋白磷酸肽功能性质的体外研究

以酪蛋白为原料，通过有控制的酶解以及离子交换和凝胶过滤技术制得N／P（摩尔比）不同的酪蛋白磷酸肽（CPPS），并对其体外阻止磷酸钙沉淀的效果进行了分析、测定和比较。在添加量相同时，总的趋势是N／P较小的样品阻止磷酸钙沉淀形成的效果好于N／P值较大的样品。CPPs的作用效果不仅与N／P值有关，还和它们分子中氨基酸的组成和排序或磷酸基的分布有关。