Casitas B系淋巴瘤原癌基因在乳腺癌组织中的表达水平及其临床预后分析

目的 Casitas B系淋巴瘤原癌基因(CBL)在不同类型乳腺癌中的表达情况及其在乳腺癌患者诊断和预后评估中的作用鲜有报道。文章旨在分析CBL在乳腺癌组织中的表达水平及其在不同分子分型、病理类型、TNM分级和临床分期的乳腺癌组织中的表达差异,并探讨CBL在乳腺癌患者诊断及临床预后评估中的作用。方法从USCS Xena数据库下载数据,分析乳腺癌组织(1104例)与癌旁组织(113例)中CBL基因的表达差异。分析不同分子分型(三阴性型、HER2+型、Luminal A型、Luminal B型)及不同病理类型(浸润性导管癌、浸润性小叶癌、混合型组织乳腺癌、黏液性癌、其他)的乳腺癌样本中CBL基因的表达量。根据肿瘤体积和临近组织受累范围分为T1、T2、T3、T4、Tx;根据区域淋巴结受累情况分为N0、N1、N2、N3、Nx;根据是否有远处转移分为cM0 (i+)、M0、M1、Mx。按照不同临床分期分为Ι期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、其他。比较CBL在乳腺癌不同TNM分级和临床分期间的表达,判断CBL基因表达与乳腺癌不同TNM分级及临床分期间是否存在相关性。采用ROC曲线评估CBL对乳腺癌诊断的价值;根据基因表达值的中位数2.152分为高表达组(≥2.152)和低表达组(<2.152),进行生存分析,判断CBL基因是否为生存预后的相关基因。使用免疫组织化学法进一步检测CBL蛋白在乳腺癌组织中的表达水平。结果在不同分子分型的乳腺癌,三阴性型乳腺癌组织中CBL基因的表达量最高(P<0.05);Luminal B型乳腺癌组织CBL基因的表达量较Luminal A型降低(P<0.05)。浸润性导管癌、浸润性小叶癌以及黏液性癌组织中CBL基因的表达水平较混合型组织乳腺癌降低(P<0.05),浸润性导管癌中CBL基因的表达水平高于浸润性小叶癌(P<0.05)。从T1至T3 CBL基因的表达量逐渐降低(P<0.05)。N0中CBL基因的表达量较N1升高(P<0.05)。从Ι期至Ⅲ期CBL基因的表达量逐渐降低(P<0.05)。乳腺癌组织中CBL mRNA诊断乳腺癌的ROC曲线下面积为0.768。CBL基因高表达组生存率较低表达组升高(P<0.05)。CBL基因为预后相关基因,高表达CBL与乳腺癌患者的预后良好呈正相关(P<0.05)。结论 CBL是乳腺癌患者预后良好相关基因,有望成为乳腺癌患者新的临床诊断和预后评估的标志物。

ITP中T细胞活化信号分子c-Cbl和Cbl-b的表达变化

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)中T细胞活化信号通路相关分子Cbl-b和c-Cbl基因的表达情况.方法:利用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测18例ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)中Cbl-b和c-Cbl基因的表达水平,20例健康成人作为对照.结果:ITP组Cbl-b的表达水平(中位数为0.091%)与健康成人组Cbl-b的表达水平(中位数为0.366%)相比,明显降低(P<0.001);而c-Cbl基因在ITP组中的表达水平(中位数为0.372%)与健康成人组的表达水平(中位数为0.298%)相比没有统计学差异,但c-Cbl基因在ITP女性患者样本中的表达水平(中位数为0.236%)明显低于男性患者样本c-Cbl的表达水平(中位数为0.479%)(P=0.039).结论:ITP患者外周血中Cbl-b表达下调,可能是其T细胞免疫异常活化的原因之一.

miR-502-3p通过靶向结合CBL抑制卵巢癌增殖并诱导凋亡

目的探究微小RNA 502-3p(micro RNA 502-3p,miR-502-3p)通过靶向结合Casitas B细胞淋巴瘤(Casitas B-cell lymphoma,CBL)参与卵巢癌增殖和凋亡的机制。方法下载GSE66957、GSE119056、TCGA_OV卵巢癌相关数据矩阵,分析miR-502-3p、CBL与卵巢癌的关系;构建过表达miR-502-3p、CBL的SKOV3和HO8910细胞系,分别采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;通过荷瘤裸鼠实验,观察过表达CBL对肿瘤生长的影响;验证miR-502-3p与CBL的靶向关系。结果生物信息学分析显示,卵巢癌组织中CBL水平高于癌旁组织,miR-502-3p水平低于癌旁组织,CBL水平与患者预后、细胞增殖基因表达有关(P<0.05)。miR-502-3p与CBL存在靶向关系,与Vector组比较,CBL组肿瘤的体积及重量增加(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-502-3p组SKOV3、HO8910细胞中CBL蛋白表达、细胞活力、克隆数降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),但CBL可逆转上述细胞变化。结论miR-502-3p可通过靶向下调CBL抑制卵巢癌细胞的增殖,并诱导其凋亡。

B7H3和c-Cbl基因在多发性骨髓瘤中的表达水平及临床意义

目的探讨共刺激因子B7同源体3(B7H3)和泛素连接酶c(c-Cbl)在多发性骨髓瘤(MM)中的表达水平及临床意义。方法选取该院2017年1月至2018年9月收治的92例MM患者纳入MM组。选取90例同期同年龄层来该院体检的健康者纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应测定MM组和对照组血清B7H3和c-Cbl的表达水平。通过Pearson相关分析B7H3和c-Cbl的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同B7H3和c-Cbl表达水平患者的生存情况。通过Cox回归模型分析患者预后的影响因素。结果MM组血清B7H3表达水平较对照组升高,而c-Cbl表达水平较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。MM患者血清B7H3表达水平与c-Cbl表达水平呈负相关(r=-0.818,P<0.05)。不同分化程度和国际分期系统(ISS)分期MM患者血清B7H3、c-Cbl表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。B7H3高表达组治疗有效率较B7H3低表达组降低,而c-Cbl高表达组治疗有效率较c-Cbl低表达组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。B7H3高表达组3年总生存率较B7H3低表达组降低,而c-Cbl高表达组3年总生存率较c-Cbl低表达组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,ISS分期为Ⅱ、Ⅲ期,分化程度为中、高分化,B7H3≥3.52,以及c-Cbl≤0.73是影响MM患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论MM患者血清B7H3水平升高、c-Cbl水平降低,且均与分化程度和ISS分期有关。B7H3水平升高和c-Cbl水平降低时,不仅降低了MM患者的治疗有效率,更降低了MM患者的生存率,对临床进行针对性干预治疗具有重要指导意义。

Cbl- b通过HOXA10调控miR-99a和miR-125b参与CD4^+T细胞活化的机制研究

目的:探讨卡西塔斯B细胞淋巴瘤谱系b(Cbl-b)调控CD4^+T细胞活化的机制。方法:用CCK8试剂盒检测过表达微小RNA(miR)-99a和miR-125b的小鼠淋巴瘤细胞(EL4)细胞增殖活性。取抗CD3和抗CD28抗体活化野生型(WT)和Cbl-b缺失型(Cbl^-b-/-)CD4^+T细胞,激光共聚焦观察WT和Cbl^-b-/-CD4^+T细胞中同源异型盒蛋白A10(HOXA10)的入核情况。用双荧光素酶报告系统检测HOXA10对miR-99a和miR-125b的表达调控作用。用蛋白质印迹法和双荧光素酶报告系统检测miR-99a和miR-125b对靶基因的表达水平影响。结果:在Cbl^-b-/-CD4^+T细胞中,HOXA10在抗CD3抗体单独刺激时即可入核。HOXA10入核后促进miR-99a和miR-125b表达,而过表达miR-99a和miR-125b则抑制蛋白激酶B2和3(AKT2、AKT3)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基A和D(PIK3CA、PIK3CD)的表达。结论:Cbl-b通过阻止HOXA10核转位来抑制miR-99a和miR-125b表达,导致AKT2、AKT3、PIK3CA、PIK3CD(AKT/PI3K)表达增加,最终抑制CD4^+T细胞活化。

乳腺癌中CBL表达及靶向CBL miRNA的筛选及意义

目的探究乳腺癌(BC)中Casitas B系淋巴瘤原癌基因(CBL)的表达和靶向CBL的miRNA的筛选及临床意义。方法收集乳腺外科30例手术切除的BC组织及癌旁组织,将标本组织分为BC组和癌旁组,利用逆转录-实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测CBL在BC组织中的表达,分析其与患者临床资料及患者预后的相关性并通过TIMER数据库分析CBL与BC的肿瘤纯度和免疫浸润相关性;使用TarBase和miRWalk数据库预测靶向CBL miRNAs,进一步验证筛选的miRNA在BC组织中的表达。结果与癌旁组织比较,CBL在BC组织中表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),其表达水平与BC转移和预后相关(P<0.05);TIMER数据库分析显示CBL的表达与肿瘤的纯度呈负相关性(r=-0.118,P<0.05),与B细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞呈正相关性;生物信息学工具预测共获得5个靶向CBL miRNAs,经qRT-PCR验证hsa-let-7e-5p在BC中高表达(P<0.05)。结论CBL在BC中低表达,其低表达可能受hsa-let-7e-5p的负调控,且与BC转移、预后及免疫浸润相关。

E3泛素连接酶c-CBL对血管紧张素Ⅱ诱导后小鼠原代心肌成纤维细胞表型转换影响

目的探讨E3泛素连接酶c-CBL对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导后小鼠原代心肌成纤维细胞表型转换的影响。方法将细胞分为对照组(未刺激)与AngⅡ刺激组(不同浓度AngⅡ刺激细胞24 h),荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Western blot检测c-CBL、α-平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达。应用小干扰RNA转染法建立低表达c-CBL细胞(si-CBL)后,将细胞分为si-control组(小干扰RNA对照转染24 h),si-CBL组(c-CBL小干扰RNA转染24 h),si-control+AngⅡ组(小干扰RNA对照转染24 h后给予AngⅡ刺激24 h)以及si-CBL+AngⅡ组(c-CBL小干扰RNA转染24 h后给予AngⅡ刺激24 h)。应用荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞c-CBL、αSMA和胶原1(collagen 1)表达,应用免疫荧光染色检测各组细胞collagen 1表达。结果 AngⅡ组αSMA、c-CBL基因mRNA和蛋白均明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。siCBL组c-CBL基因mRNA及蛋白的表达显著低于si-control组,差异有统计学意义(P <0. 05)。AngⅡ刺激后,si-control+AngⅡ组和si-CBL+AngⅡ组αSMA基因mRNA、蛋白的表达均较si-control组和si-CBL组明显增加,si-CBL+AngⅡ组αSMA基因mRNA和蛋白均明显低于si-control+AngⅡ组,差异有统计学意义(P <0. 05)。AngⅡ刺激后,si-control+AngⅡ组和siCBL+AngⅡ组collagen 1基因mRNA均较si-control组和si-CBL组明显增加,且si-CBL+AngⅡ组collagen 1基因mRNA水平明显低于si-control+AngⅡ组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 c-CBL可影响AngⅡ诱导后小鼠原代心肌成纤维细胞的表型转换。

特异性小干扰RNA沉默Cbl—b基因增强小鼠脾脏T淋巴细胞的免疫活性

目的观察特异性小干扰RNA（siRNA）沉默Cbl—b基因对于小鼠脾脏T淋巴细胞免疫活性影响。方法尼龙毛柱法分离T淋巴细胞，加入抗CD3抗体（1mg／L）在体外模拟T淋巴细胞活化的第一信号，脂质体转染12、24、48h后，流式细胞仪检测早、中、晚期活化标志分子CD69、CD25、CD71的表达变化；转染48h后细胞计数试剂盒（CCK-8）试剂盒检测T淋巴细胞增殖程度。结果利用特异性Cbl．bsiRNA能有效沉默T淋巴细胞Cbl-b基因，转染12h后，转染组、对照组、空白组CD69分子表达阳性率分别为（46．78±4．89）％、（21．36±2．06）％、（25．09±2．27）％（P〈0．01）；转染24h后，转染组、对照组、空白组CD25分子表达阳性率分别为（19．27±1．84）％、（8．18±0．71）％、（9．25±0．65）％（P〈0．01）；转染48h后，转染组、对照组、空白组CD71分子表达阳性率分别为（43．26±3．89）％、（23．99±1．97）％、（28．09±2．15）％（P〈0．01）；转染48h后，CCK-8试剂盒检测转染组、对照组、空白组吸光度值分别为0．763±0．063、0．356±0．039、0．383±0．015（P〈0．01）。结论利用特异性小干扰沉默Cbl—b基因能够增强小鼠脾脏T淋巴细胞免疫活性。

瘤体注射Cbl—b基因真核表达质粒转染T淋巴细胞免疫治疗小鼠前列腺癌

目的瘤体注射Cbl—b基因真核表达质粒[短发卡RNA（shRNA）一Cbl—b]转染T淋巴细胞，观察前列腺癌小鼠肿瘤生长及机体免疫水平变化。方法尼龙毛柱法提取小鼠脾脏T淋巴细胞，质粒转染shRNA-Cbl—b至T淋巴细胞；瘤体注射shRNA—Cbl—bT淋巴细胞至RM-1前列腺癌小鼠肿瘤部位，每周1次，共4次；Westernblot法检测荷瘤小鼠肿瘤组织中Cbl—b蛋白的表达，测量小鼠肿瘤体积变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠外周血中的白细胞介素（IL-2）、吖干扰素（IFN-1）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）水平变化。结果与阴性对照组和空白组比较，瘤体注射shRNA—Cbl-bT细胞能降低肿瘤组织Cbl-b蛋白表达，显著抑制小鼠前列腺肿瘤生长（P〈0．05）；shRNA—Cbl—b组、阴性对照组、空白组外周血中IL-2浓度分别为（560．34±21．29）、（447．05±20．11）、（445．12±15．06）ng／L（P〈0．05），IFN-1浓度分别为（435．70±22．25）、（403．37±7．15）、（380．02±14．43）ng／L（P〈0．05），TNF—β浓度分别为（306．81±9．71）、（253．15±9．34）、（253．38±15．67）ng／L（P〈0．05）。结论瘤体注射shRNA-Cbl—b T淋巴细胞能抑制小鼠前列腺肿瘤的生长，提高外周血IL-2、IFN-γ、TNF—β等细胞因子分泌水平，增强了小鼠机体抗前列腺肿瘤免疫。