肝细胞性肝癌中Caspase-3和PCNA的表达

目的探讨Caspase-3和PCNA在肝细胞肝癌的表达及其在肝细胞肝癌发生、发展中的作用。方法应用组织芯片技术和免疫组化方法(SP法)检测95例肝细胞肝癌组织、68例癌旁组织和19例正常肝组织中Caspase-3和PCNA的表达。结果Caspase-3在肝细胞肝癌中表达阳性率(34.7%)显著低于癌旁组织(79.4%,P<0.01)和正常肝组织(84.2%,P<0.01);Caspase-3的表达与肝细胞肝癌的组织分级和HBsAg有关(P<0.01,P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小和转移无关(P>0.05)。PCNA在肝细胞肝癌中的表达阳性率(68.4%)显著高于癌旁组织(26.5%,P<0.01)和正常肝组织(15.8%,P<0.01);PCNA的表达与患者组织分级、转移有关(P<0.01,P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小、和HBsAg无关(P>0.05)。在肝癌组织中Caspase-3与PCNA的表达呈显著负相关(r=-0.598,P<0.001)。结论肝细胞肝癌中Caspase-3的低表达与PCNA的高表达在肿瘤的发生、发展过程中可能起重要作用。

法舒地尔对急性心肌梗死大鼠心肌组织Caspase-3和Rho激酶表达及血流动力学功能的影响

目的 研究法舒地尔对急性心肌梗死大鼠心肌组织Caspase-3和Rho激酶表达及血流动力学功能的影响.方法 选取假手术和心肌梗死手术24 h后存活的雄性Wistar大鼠(购于沈阳市药检所)入组,随机分为三组,每日腹腔注射给药1次,至术后满3周.A组(正常大鼠假手术组):磷酸盐缓冲盐水(PBS)+生理盐水.B组(心肌梗死组+安慰剂对照组):PBS+生理盐水.C组(心肌梗死组+法舒地尔治疗组):PBS+法舒地尔(100 mg/kg).3周后通过HE染色观察心肌组织病理形态学变化,采用Masson检测心肌梗死面积,采用Western blot检测心肌组织Caspase-3蛋白的表达;RT-PCR法测定Rho激酶mRNA的表达;并分别检测血流动力学指标左心室内压峰值(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)及左心室压力上升和下降最大速率(±dp/dtmax)的变化.结果 HE染色显示A组心肌组织未出现任何变化,其心肌细胞以及肌纤维排列整齐,细胞核清晰,无中性粒细胞浸润.B组心肌组织中有大量炎性细胞,心肌横纹严重破坏,肌纤维断裂、溶解、坏死、心肌细胞间质充血水肿,间隙增大,局部存在炎细胞浸润.C组较B组来讲,组织形态学改变程度明显好转,中性粒细胞浸润减少,肌纤维排列有序,心肌组织充血、肿胀减轻.A组无心肌梗死,B组心肌梗死面积为(0.48±0.03)%,C组心肌梗死面积为(0.20±0.05)%,C组心肌梗死面积明显小于B组(t=16.793,P=0.000).与A组相比,B组大鼠心肌细胞Caspase-3和Rho激酶mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P=0.000);与B组比较,C组大鼠Caspase-3、Rho激酶mRNA显著减少,差异均具有统计学意义(P=0.000).血流动力学指标方面,与A组相比,B组大鼠LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax降低,LVEDP指标升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与B组相比,C组大鼠LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax显著升高,LVEDP显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Caspase-3和Rho激酶在AMI大鼠中表达明显升高,两者可能参与了心肌细胞凋亡.法舒地尔能减少Caspase-3和Rho激酶表达,改善血流动力学功能,其对心肌的保护作用可能与抗心肌细胞凋亡机制有关.

电针对大鼠肾缺血再灌注损伤的疗效及对肾组织中caspase-3表达的影响

目的:探讨电针治疗对肾缺血再灌注大鼠肾功能及组织中Caspase-3表达的影响。方法:将30只清洁级健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(IRI组)和电针组,每组10只。采用右肾摘除,左肾肾蒂夹闭缺血45min后再灌注的方法制备动物模型。电针组于造模成功后给予电针肾俞和涌泉穴治疗。各组均于术后24h采用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Scr),观察肾组织病理形态学改变,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡率和免疫组化检测肾组织细胞中Caspase-3的表达。结果:肾缺血再灌注后大鼠血清BUN和Scr明显升高,肾组织切片显示有明显的病理改变,肾组织细胞凋亡率及Caspase-3阳性细胞表达显著升高。与缺血再灌注组比较,电针组大鼠BUN和Scr显著下降,肾组织细胞凋亡率显著降低,Caspase-3阳性细胞的IOD值显著降低。结论:电针对IRI所致肾功能损害具有显著的保护作用,能够抑制Caspase-3蛋白表达,具有抑制细胞凋亡的作用,该作用可能是电针对IRI后肾脏保护作用的重要机制之一。

P38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的:探讨P38MAPK信号传导通路在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)凋亡过程中的作用及P38蛋白表达的变化,为肝纤维化的临床治疗提供依据。方法:实验设阴性对照组(HSC-T6加含10%小牛血清的DMEM培养液)、乙醛组(对照组基础上加乙醛)和实验组(乙醛组基础上加P38MAPK抑制剂SB203580,使其终浓度为4、8、16μmol.L-1),流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;Western blotting法检测磷酸化P38MAPK表达水平,SABC法检测caspase-3蛋白表达。结果:与对照组比较,乙醛组HSC-T6的凋亡率和caspase-3蛋白阳性表达率均降低(P<0.05或P<0.01),P38MAPK磷酸化水平表达增高(P<0.01)。抑制剂SB203580作用后,细胞凋亡率逐渐增高(P<0.01);P38MAPK磷酸化水平降低(P<0.01);caspase-3蛋白水平升高(P<0.01);且随剂量的增加,磷酸化水平不断降低,蛋白表达水平不断升高。结论:P38MAPK抑制剂SB203580能促使乙醛刺激的HSC-T6凋亡,且凋亡的发生可能与SB203580抑制P38MAPK的磷酸化途径和caspase-3的活化有关。

半胱氨酸蛋白酶-3/-9在金葡菌诱导的U937细胞凋亡中的作用

目的探讨金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)感染人巨噬细胞系U937细胞后半胱氨酸蛋白酶-3/-9(Caspase-3/-9)的表达,确定Caspase-3/-9在金葡菌诱导的U937细胞凋亡中的作用。方法当细胞:细菌为1:20时分别培养0、15、30、60和90min,采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞的凋亡率;采用Westernblot方法检测Caspase-3和Caspase-9的表达;采用荧光比色法检测Caspase-3/-9蛋白酶活性。结果金葡菌以时间依赖的方式诱导U937细胞凋亡。随着金葡菌感染时间的延长,Caspase-3和Cas-pase-9的表达逐渐增加,Caspase-3/-9蛋白酶活性随着培养时间的延长也逐渐上升。Caspases蛋白酶的抑制剂Z-DEVD-FMK和Z-LEHD-FMK能够抑制金葡菌诱导的U937细胞凋亡。结论Caspase-3/-9参与了金葡菌诱导的U937凋亡过程并发挥了重要的作用。

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对胃癌细胞HGC-27的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在胃癌细胞内的表达，研究其对肿瘤细胞生长的影响以及对胃癌细胞化疗敏感性的作用和机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd—p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于胃癌细胞株HGC-27不同时间后，MTF法检测其对体外培养细胞的抑制率，免疫组织化学S-P法检测p53蛋白的表达情况，流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白caspase-3的表达情况。结果rAd-p53及OXA单独作用时，随药物浓度及作用时间的增加，细胞的生长抑制率逐渐增高；两者联合作用48小时，其在较低浓度时细胞生长抑制率即明显增高（P值均〈0．05），且明显高于单药作用；OXA（3．2μg／m1）与rAd．p63（5×10。、5×107、5×108、5×109vp／m1）联合作用48小时后，与对照组比较，胃癌细胞caspase-3蛋白的含量升高（P值均〈0．05），但p53蛋白无明显升高（P值均〉0．05）。结论OXA和rAd—p53单药可抑制胃癌细胞HGC-27的生长，两者联合应用对胃癌细胞的抑制作用增强；rAd—p53有增强OXA化疗敏感性的作用，其机制与通过线粒体途径激活下游的caspase一3诱导细胞凋亡有关。

AG490对人宫颈癌裸鼠移植瘤STAT3信号转导通路的影响

信号转导和转录激活因子-3（signaltransducerandacti—vatoroftranscription·3，STAT3）是JAK激酉每／信号传导和转录激活因子（Januskinase／signaltransducersandactivatorsoftranseription，JAKs／sTATs）信号转导通路的重要成员，近年来研究提示STAT3在人类多种肿瘤组织与细胞系中异常表达或活性增强”12J。在本实验中，利用AG490来抑制JAK酶活性，并联合顺铂观察JAK酶被抑制后宫颈癌裸鼠移植瘤内STAT3活化情况的变化和Survivin、Caspase一3表达的改变以及裸鼠移植瘤生长凋亡的变化。

参附注射液对心肌缺血再灌注损伤患者Bcl-2、Bax与Caspase-3蛋白水平的影响

目的:探讨参附注射液对心肌缺血再灌注损伤患者Bcl-2,Bax与Caspase-3蛋白水平的影响。方法:将40例急性心肌梗死患者按随机数字表法分为两组。对照组20例采用溶栓治疗,观察组20例在溶栓治疗前后均给予参附注射液静脉滴注,6 d为1个溶栓疗程,疗程结束后比较两组患者的冠脉再通率以及采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组患者血浆中Bcl-2、Bax与Caspase-3蛋白水平。结果:①观察组的冠脉再通率明显高于对照组(P<0.05);②两组再灌注损伤发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05);③观察组患者血浆中Bax、Caspase-3蛋白水平明显低于对照组(P<0.05),而Bcl-2表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:参附注射液治疗心肌缺血再灌注损伤的作用机制与抑制心肌细胞凋亡有关。

山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡机制研究

目的探讨山药多糖抗神经细胞缺氧性凋亡作用机制。方法运用SD胎鼠大脑皮层神经细胞建立缺氧性神经细胞损伤体外模型,再使用不同质量浓度山药多糖处理,Rh-123染色检测线粒体损伤,RT-PCR及免疫细胞化学测定Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达。结果山药多糖抑制缺氧的神经细胞线粒体损伤,下调Caspase-3蛋白及mRNA的表达,下调Bax mRNA及蛋白的表达,上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax mRNA及蛋白的比例(P<0.05)。结论山药多糖在一定发范围内能有效地抑制神经细胞缺氧性凋亡,其机理是降低凋亡基因及蛋白产生,上调抗凋亡基因及蛋白产生。

五味子多糖对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的观察五味子多糖对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用,初步探讨五味子多糖作用肿瘤细胞的机制。方法通过体外细胞实验的方式,培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白组和用药组,倒置显微镜观察五味子多糖作用后的凋亡情况,用WST-1法检测人脑胶质瘤细胞中SOD和GSH的含量,ELISA法检查凋亡蛋白Bcl-2、bax和Caspase-3的表达情况。结果通过与用药组进行比较,倒置显微镜下观察不同浓度的五味子多糖作用于脑胶质瘤SHG-44细胞48 h可明显抑制其生长;与对照组相比,肿瘤细胞中SOD和GSH含量变化具有统计学意义(P<0.01),含量轻度降低;Caspase-3和Bcl-2/bax含量明显降低。结论五味子多糖可以在一定程度上促进脑胶质瘤细胞凋亡。

孤独症大鼠前额叶皮质神经元凋亡相关蛋白的表达

目的观察孤独症大鼠前额叶皮质神经元凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的变化，探讨细胞凋亡在孤独症发病中的作用。方法健康繁殖期Wistar雌鼠20只，体质量250～260g，随机选取10只在E12．5腹腔注射丙戊酸钠（VPA），其子代为孤独症模型组；其余10只在E12．5腹腔注射生理盐水，其子代为对照组。通过比较负向性实验、自梳理实验验证模型是否成功；Westemblotting方法对比对照组与孤独症模型组大鼠P42前额叶皮质凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果成功建立孤独症动物模型。与对照组比较，孤独症模型组大鼠旋转调头时间显著延长（P〈0．05），理毛时间显著增加（P〈0．05）；P42前额叶皮质凋亡相关蛋白Caspase-3表达显著降低（P〈0．05），Bcl-2表达显著升高（P〈0．05）。结论孤独症大鼠P42前额叶皮质凋亡受到抑制，提示调节凋亡可能是一个潜在的孤独症治疗策略。