带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子对急性病毒性心肌炎小鼠心肌的保护作用

目的研究急性病毒性心肌炎(AVMC)小鼠的带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子(ARC)的表达及对心肌的保护。方法将60只成功建立AVMC模型的小鼠随机分为ARC反义寡核苷酸组(A组)、ARC错义寡核苷酸组(B组)和生理盐水对照组(C组),每组20只。分期分别采集标本测定外周血心肌钙蛋白T(cTnT)、心肌钙蛋白I(cTnⅠ)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同功酶(CK-MB)水平和ARC、动力相关蛋白1(Drp1)表达等数据。结果造模后第7、14、21天,3组外周血cTnT、cTnⅠ、CK、CK-MB水平差异有统计学意义(P<0.05),C组与B组相近(P>0.05),但均低于A组(P<0.05)。造模后第7天,3组ARC与Drp1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05),C组ARC表达与B组相近(P>0.05),但均高于A组(P<0.05),C组Drp1蛋白表达与B组相近(P>0.05),但均低于A组(P<0.05);造模后第14、21天3组ARC与Drp1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠发生AVMC后高表达的ARC可抑制心肌细胞凋亡,对心肌组织有保护作用。

含胱天蛋白酶富集功能域凋亡抑制因子在心血管疾病中的研究进展

细胞凋亡在维持机体正常发育以及内环境稳定中发挥重要作用,同时也对多种疾病的病理生理产生影响。研究表明心肌细胞凋亡参与了多种心血管疾病的发生发展过程。含胱天蛋白酶富集功能域凋亡抑制因子(ARC)是迄今为止唯一在心脏特异性高表达的抗凋亡蛋白,并可通过其抗凋亡能力发挥心肌保护作用。本文就ARC的结构和特点、ARC在心血管疾病中的作用及机制予以综述。

蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中伴随caspase依赖的BAG3剪切

目的:探讨Bcl-2相关抗凋亡基因3(Bcl-2-associated athanogene 2,BAG3)在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用。方法:选取人卵巢癌细胞系SKOV3,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132处理组和MG132+Z-VAD联合处理组,按不同时段处理细胞。实时定量RT-PCR法检测各组细胞BAG3 mRNA表达及MG132诱导其表达时效性,Western blot蛋白印迹法检测各组细胞BAG3蛋白表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,在MG132诱导作用下,SKOV3细胞中BAG3 mRNA表达增加(P<0.01),并随作用时间呈现时效性。发现40kDa BAG3分裂产物,其细胞凋亡率亦随之增加。结论:蛋白酶体抑制剂可诱导上调卵巢癌细胞中BAG3基因表达,BAG3蛋白裂解导致细胞凋亡增加,这一效应可能依赖caspase介导完成。

高血压诱导大鼠心肌肥大过程中Caspase募集域的凋亡抑制蛋白表达水平的变化

目的探讨高血压致心肌肥大发生发展过程中Caspase募集域的凋亡抑制蛋白(ARC)表达的变化规律。方法选取Wistar大鼠45只,按随机数字表法分为腹主动脉缩窄组、假手术组、对照组(每组15只),腹主动脉缩窄组用腹主动脉缩窄的方法建立高血压心肌肥大模型,每组又按术后1、2、3、4、6周时段平均分为5个亚组。并在心肌肥大形成的不同阶段提取组织蛋白,采用免疫沉淀法检测心肌中ARC的表达水平及其磷酸化状态。结果与假手术组相比,腹主动脉缩窄组血压、左心系数在术后第4周明显升高,病理学结果显示在术后第4周肌纤维增粗,心肌细胞肥大。由Western blot和灰度值分析结果可以看出,在心肌肥大过程中未见ARC表达水平有明显变化,而ARC磷酸化水平在术后第4周明显降低,与假手术组和对照组相比,ARC表达水平差异无统计学意义(P>0.05),第4周和第6周ARC的磷酸化水平差异有统计学意义(P<0.05),对照组与假手术组之间ARC磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ARC磷酸化水平的明显降低可能是导致高血压致心肌细胞肥大的重要分子基础之一。

Caspases抑制剂对缺氧性脑血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的 研究Caspases抑制剂对缺缺性脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用。方法 用氰化钠造成培养的牛脑微血管内皮细胞缺氧；用台盼蓝染色、TUNEL、流式细胞仪计数方法观察细胞受损和凋亡情况；用免疫细胞化学染色法观察受损细胞中Caspase-3的表达，同时比较特异性和非特异性Caspases抑制剂对缺氧性血管内皮细胞的作用。结果 氰化钠可损伤牛脑微血管内皮细胞，细胞发生了凋亡，受损细胞中Caspase-3大量表达，广谱Caspases抑制剂、选择性Caspase-1、-3、-6抑制剂均能显著减少细胞死亡数目、Caspase-1、-6抑制剂可以抑制Caspase-3的表达。结论 实验结果提示Caspases抑制剂对缺氧性脑微血管内皮细胞凋亡起有效的保护作用。

Caspases抑制剂抑制细胞凋亡研究进展

半胱天冬酶 (Caspases)是细胞凋亡中的主要执行蛋白。多肽抑制剂、细胞因子效应调节剂A、p35、凋亡抑制蛋白家族及Bcl 2家族通过抑制 14种Caspases中的一种或几种而发挥抗凋亡作用。某些Caspases抑制剂的缺乏与体内某些疾病的发生有一定关系。

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂诱导肝癌细胞H_(22)凋亡的作用及其机制

为了研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)诱导癌细胞凋亡的作用及其机制,采用细胞培养技术,以肝癌细胞系H22为靶细胞,以不同浓度的rBTI体外处理细胞不同时间后,采用MTT检测、DNA电泳分析、细胞核形态学观察、细胞色素c检测、caspases活性检测等方法测定rBTI在体外诱导肝癌细胞H22凋亡的作用。结果显示rBTI能够在体外特异性地抑制H22细胞的生长,诱导H22细胞凋亡,随着rBTI浓度及作用时间的增加,呈现剂量和时间依赖性效应。经rBTI处理的细胞可导致细胞色素c从线粒体释放到细胞质中,并能增强caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性。结果表明,rBTI能特异性地诱导H22细胞凋亡,其机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。

凋亡抑制蛋白的研究进展

近年来新发现的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins,IAPs),是一类高度保守的内源性抗凋亡基因家族表达产物,广泛存在于许多物种如病毒、真核生物、哺乳动物中,起着抑制细胞凋亡的作用。IAPs主要通过抑制caspase,参与TNFR介导的信号转导等途径发挥抗凋亡作用,与恶性肿瘤、神经系统病变等密切相关。该文就IAPs的结构、抑制凋亡的机制及其在临床疾病中的研究现状作一综述。

X-连锁凋亡抑制蛋白与神经变性疾病的研究进展

神经系统变性疾病（neurodegenerative disease ）影响全球3700万人，在发达国家是导致死亡的第4大原因［1］，其主要包括阿尔茨海默病（Alzheimer Disease，AD）、帕金森病（Parkinson’ s disease，PD）、肌萎缩性侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis， ALS）等。近年研究发现，神经元凋亡是神经变性疾病的普遍病理特征，在AD、PD、ALS 等疾病的神经元变性死亡中可能起着重要作用［2］，胞浆内的半胱氨酸蛋白酶（cysteine aspartic acic specific protease，caspase ）在神经元凋亡过程中起关键作用，被各种诱发因子激活的caspase是毁损细胞生存的介导因子和激活细胞凋亡的最终效应子，人们正在试图用caspase 抑制剂来治疗各种神经变性疾病［3-4］。而凋亡抑制蛋白（inhibitor of ap-optosis family of proteins，IAPs）的发现。

凋亡抑制蛋白在细胞凋亡中的调节作用

凋亡抑制蛋白(IAP)家族是至今发现的惟一一种内源性Caspase蛋白酶抑制剂,在细胞凋亡中发挥重要的调节作用。本文结合近年来的研究进展,综述了Caspase在凋亡中的作用、IAP家族蛋白分子的结构特征、抗凋亡作用机制以及IAPs抗凋亡作用的负调控。进一步认识细胞凋亡中复杂的调控机制,为寻找与凋亡紊乱相关的疾病治疗提供了重要靶向。

细胞凋亡抑制蛋白:IAP家族

IAP家族 (InhibitorofApoptosisfamilyofproteins,IAPs)为一类内源性细胞凋亡抑制蛋白 ,在许多物种中起着阻止细胞凋亡的作用。IAPs主要通过抑制caspase ,参与TNFR介导的信号转导 ,与NF κB相互作用发挥抗细胞凋亡作用。IAPs可能与肿瘤发展、神经变性病以及缺血再灌注损伤有一定关系。

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究

为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用,探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-Ⅴ和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase3的活性,采用Western-blot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达。结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低。结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase3的活性而诱导凋亡。

凋亡抑制蛋白家族的研究进展

凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)不仅可以抑制细胞凋亡,还可以调节细胞周期和细胞分裂等。本文对现有的IAPs家族成员及与肿瘤治疗的研究进展进行综述。

应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响

目的：探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证。方法：应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达。结果：0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义（P〈0.001）并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异（P〈0.001）;Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加。VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低（P〈0.005）;VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化（P〉0.05）。结论：应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显。

心脏特异抗凋亡蛋白ARC研究进展

含胱冬肽酶富集功能域的凋亡抑制因子(apoptosis repressor with CARD,ARC)蛋白是20世纪末发现的在心肌、骨骼肌和大脑等终末分化组织中大量表达的抗凋亡蛋白。ARC的主要功能是抗凋亡作用。由于其在心脏中表达的特异性和抗凋亡的多层次性,使ARC在心脏中的作用成为近年来研究的热点。本文主要对其抗凋亡途径以及近年来在心肌病中的研究进展两方面进行综述。

Caspase-3、XIAP在骨关节炎中的表达及意义

目的探讨Caspase-3、XIAP在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原位末端标记技术(TUNEL)等检测Caspase-3、XIAP在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中Caspase-3的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.01);实验组软骨细胞凋亡程度与XIAP的表达呈负相关(P<0.05),与Caspase-3的表达呈正相关(P<0.01)。结论Caspase-3、XIAP基因的表达与骨关节炎发生发展有密切关系。

凋亡途径与肿瘤治疗

经典的凋亡途径是指死亡受体途径和线粒体途径,其调控可通过死亡受体、线粒体、凋亡抑制蛋白和Caspase酶等多个水平实现,也受相关传导通路信号的调节.凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,利用有关的凋亡诱导和调控机制诱导肿瘤细胞凋亡已经成为治疗肿瘤的一个重要途径,我们即对该方面的研究进展进行综述.

氯化钴对PC12细胞的凋亡作用

目的 确定氯化钴(CoCl2 )对PC12细胞的影响。方法 构建CoCl2 诱导的PC12细胞模型,检测CoCl2 对PC12细胞的毒性作用;将Caspases的抑制基因p3 5转染PC12细胞得到可稳定表达p3 5基因的细胞株PC12 p3 5 ,检测p3 5对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用;检测Caspases特异性多肽抑制剂Z VAD FMK对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用。结果 分别以10 0、3 0 0、5 0 0、70 0和10 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h或以5 0 0 μmol LCoCl2 分别诱导PC12细胞12、2 4、3 6、48和60h后,PC12细胞存活率均明显下降(P <0 0 1) ,并与CoCl2 诱导的时间和浓度呈正相关;细胞亚显微结构检测,流式细胞分析和DNA片段化结果也表明5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h可使PC12细胞出现明显凋亡特征。构建可稳定表达Caspase蛋白酶抑制基因p3 5的PC12细胞株,或分别加入5 0和10 0 μmol LCaspases多肽抑制剂Z VAD FMK预处理PC12细胞1h后,以5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h ,形态学观察结果,细胞存活率检测和流式细胞分析均表明p3 5基因和Z VAD FMK均可有效地抑制CoCl2 诱导的PC12细胞凋亡(P <0 0 1)。结论 CoCl2 可诱导PC12细胞凋亡。