青蒿素对大鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡及Caspase-3活性的影响

目的:观察青蒿素对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖、凋亡及Caspase-3活性的影响。方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,应用不同质量浓度青蒿素干预系膜细胞,分别采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法、荧光倒置显微镜及酶标分析仪检测系膜细胞的增殖、凋亡及Caspase-3活性。结果:与对照组比较,不同质量浓度青蒿素对肾小球系膜细胞的增殖及Caspase-3活性均有不同程度的影响(P<0.01);与地塞米松组比较,其他2组相同质量浓度药物对肾小球系膜细胞增殖及Caspase-3活性均有显著影响(P<0.01),尤以青蒿素联合地塞米松高剂量组的抑制作用最强,且3组药物对肾小球系膜细胞的增殖、Caspase-3活性及其凋亡的影响均呈剂量依赖趋势,在中、高剂量药物联合治疗组中出现了系膜细胞大量死亡。结论:青蒿素能剂量依赖性抑制系膜细胞增殖、增强Caspase-3活性及促进肾小球系膜细胞凋亡。

Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。

黄芩素对SCC15口腔癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响

目的探讨黄芩素(BAI)对人口腔癌细胞株SCC15增殖和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3活性的影响。方法以噻唑蓝比色法(MTT)检测BAI在不同浓度(终浓度的50、100、200μg/ml)不同作用时间(0、12、24、36、48、60、72 h)条件下对SCC15口腔癌细胞增殖活性的影响。比色法检测Caspase-3活性的变化,通过流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 BAI在体外对SCC15细胞株具有直接抑制增殖作用,并呈时间和剂量依赖性,对SCC15细胞的IC50是153.20μg/ml。不同浓度BAI处理细胞后,SCC15细胞被阻止于G0/G1期,抑制SCC15细胞分裂而降低其增殖能力。结论 BAI可对人SCC15口腔癌细胞株的凋亡具有促进作用,并且促凋亡作用呈时间-剂量依赖性。BAI体外具有增加He La细胞Caspase-3活性的作用,能明显上调SCC15细胞中Caspase-3活性,且呈时间与浓度依赖性。

补充扇贝肽对运动大鼠停训后萎缩骨骼肌细胞Caspase-3活性的影响

目的:通过测试萎缩骨骼肌细胞Caspase-3、SOD活性和MDA含量,观察补充扇贝肽对运动大鼠停训导致骨骼肌萎缩后肌细胞Caspase-3活性及其抗氧化能力的影响,研究扇贝肽对停训后骨骼肌萎缩的干预作用。方法:40只SD雄性大鼠以15 m/min的速度,持续性水平跑台训练30 min开始进行递增负荷运动,运动6 d/周,休息1 d/周,速度递增3 m/min/周,时间递增30 min/周,运动3周后即刻处死10只大鼠为基础对照组,其余大鼠随机分组为补充安慰剂阴性对照组、补充牛乳阳性对照组和补充扇贝肽实验组,30只大鼠左侧后肢实施石膏固定模拟停训模型,并进行扇贝肽补充实验。实验组和对照组所有动物每天分别进行灌胃15%扇贝肽饮料2mL、等量的安慰剂和牛乳。结果:发现补充扇贝肽可显著减低停训后萎缩骨骼肌细胞MDA含量增加,增加SOD活性,提高细胞内抗氧化能力,可显著抑制停训后萎缩骨骼肌细胞Caspase-3的活性,从而抑制骨骼肌收缩蛋白和结构蛋白的降解,促进萎缩骨骼肌的恢复。

低氧预适应对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的探讨低氧预适应(8%O2,3h)对大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注后12h神经细胞凋亡及Caspase-3活性的影响。方法低氧预适应后12h制作脑缺血再灌注模型,大鼠大脑中动脉阻塞2h,灌注损伤12h,用TUNEL法和荧光四肽底物法分别检测假手术组、缺血再灌注组和低氧预适应组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平。结果与缺血再灌注组比较,低氧预适应组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平显著降低(P<0.05,P<0.01);低氧预适应组与假手术组比较,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3水平反而降低(P<0.01)。结论低氧预适应可减少大脑中动脉缺血2h再灌注后Caspase-3活性,抑制神经细胞的凋亡。

拟南芥热激因子AtHsfA1a在低温胁迫下对细胞程序性死亡中Caspase-3活性的影响

为了研究拟南芥热激因子AtHsfA1a对低温胁迫下细胞程序性死亡(programmed cell death,简称PCD)中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific protease,简称Caspase)活性的影响,进一步确定拟南芥热激因子AtHsfA1a与低温胁迫中PCD的关系。以热激因子AtHsfA1a不同基因型(野生型、基因沉默型)的拟南芥为材料,首先获得单细胞,于4℃处理1 h后,测定热激因子AtHsfA1a的表达量,发现基因沉默型中AtHsfA1a的表达量低于野生型。接着用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,简称DAPI)进行染色,在荧光显微镜下观察细胞形态,结果表明,低温胁迫后野生型未出现凋亡小体,基因沉默型的细胞出现了细胞凋亡小体。最后根据荧光底物Ac-DEVD-p NA的断裂程度测定Caspase-3活性,结果发现,低温处理后的拟南芥Caspase-3活性明显增强,而AtHsfA1a基因沉默型拟南芥Caspase-3活性比野生型拟南芥的高,说明低温胁迫下拟南芥AtHsfA1a能够抑制Caspase-3蛋白酶的活性。研究结果初步表明,在低温胁迫下拟南芥热激因子AtHsfA1a可以通过抑制Caspase-3蛋白酶的活性而对细胞程序性死亡有一定的抑制作用,这对于揭示植物耐逆境反应机制具有重要意义。

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的 :探讨亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase 3活性的影响。方法 :采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,大脑中动脉阻塞 2h ,再灌注损伤 12h ,用TUNEL法和荧光四肽底物 (AC DEVD AMC)法分别检测假手术组、对照组和亚低温组的凋亡细胞百分率和Caspase 3活性水平。结果 :与对照组比较 ,亚低温组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase活性水平显著降低。结论 :Caspase 3活性明显降低可能是亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞百分率显著下降的分子机制之一。

乙酰二脱水卫矛醇对L1210细胞Caspase-3活性的影响

目的:探讨半胱氨酶-3(Caspase-3)在二乙酰二脱水卫矛醇(d iacetyld ianhydrogalactitol,DADAG)诱导小鼠白血病L1210凋亡过程中的作用。方法:MTT法观察DADAG对L1210细胞的生长抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡;Caspase-3试剂盒测定细胞内Caspase-3的酶活性。结果:DADAG对L1210细胞有较强的体外增殖抑制作用,其IC50值为24.6 mg/L;DADAG可诱导L1210细胞发生凋亡及时间依赖性地升高Caspase-3酶活性。结论:Caspase-3在DADAG诱导的细胞凋亡中可能起重要作用。

细胞因子及异丙酚对中性粒细胞内caspase-3活性的影响

目的 观察细胞因子白介素- 6 (IL - 6 )和白介素- 10 (IL - 10 )及异丙酚对离体的健康人中性粒细胞内caspase - 3活性的影响,了解细胞因子及异丙酚影响中性粒细胞凋亡的机制。方法 选择12例健康志愿者,采静脉血并分离中性粒细胞,将每例分离的中性粒细胞分为8组,分别加入生理盐水(对照组)、IL - 6、IL - 10、IL - 6 +IL - 10、异丙酚、异丙酚的脂质溶剂intralipid、IL - 6 +异丙酚、IL - 6 +intralipid孵育,18h后利用专用的试剂盒用流式细胞仪检测每个样本caspase - 3激活的程度,并进行组间比较。结果 与对照组相比,IL - 6显著抑制中性粒细胞caspase- 3的激活(P <0 .0 5 ) ,而IL - 10、异丙酚和intralipid对caspase - 3的激活则无显著影响;但IL - 10和异丙酚均能够对抗IL - 6对caspase - 3激活的抑制(P <0 .0 5 ) ,intralipid则未表现对抗IL - 6的作用。结论 IL - 6可抑制中性粒细胞内caspase - 3的激活,而IL - 10和异丙酚可对抗IL - 6的这一作用,提示IL - 6、IL - 10和异丙酚对中性粒细胞凋亡的影响至少部分是通过影响caspase -

大鼠海马神经元缺氧/复氧后caspase-3活性的变化

细胞凋亡过程是受基因调控的级联反应过程 ,其中caspase -3在此过程中起关键作用 ,它可促进脑部发育过程中的神经元死亡 ,在缺血性脑损伤中也起重要作用。本研究应用培养的海马神经元 ,观察在缺氧或缺氧再复氧后不同时间caspase -3活性的动态变化及caspase -3抑制剂预处理对其影响 ,研究caspase -3在体外培养的海马神经元缺氧 /复氧损伤中的作用及其抑制剂的干预效果 ,为缺血性脑损伤的在体针对性治疗提供一定的实验研究资料。取当天出生 (P1)的SD大鼠 ,分离海马神经元进行体外培养。诱导体外培养 10d的大鼠海马神经元缺氧 3h ,再复氧 12～ 48h ,并在缺氧前 1h用不同剂量的caspase -3抑制剂Ac -DEVD -CMK进行干预处理 ,同时用溶剂DMSO处理进行对照 ,应用MTT比色法测定细胞存活率 ,底物裂解法检测caspase -3样蛋白酶活性。用方差分析 (ANOVA)进行统计学分析处理。结果发现 ,缺氧 /复氧后大鼠海马神经元存活率逐渐降低 ,caspase -3活性明显增强 ,复氧2 4h达高峰 ;溶剂DMSO处理后神经元存活率及caspase -3活性与缺氧 /复氧神经元相比无显著性差异 ;用Ac -DEVD -CMK预处理的海马神经元caspase -3活性降低 ,细胞存活率增高 ,并呈剂量依赖性 ,但抑制caspase -3样蛋白酶的活性并不能完全逆转神经元的死亡。

醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响

目的 探讨醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase 3活性的影响。方法 采用四唑盐 (MTT)法检测IC50 值 ,用流式细胞仪、Hoechst3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡 ,比色法测定caspase 3活性。结果 用不同浓度的醋酸铅处理细胞 48h ,其IC50 值为 (0 44 5± 0 0 80 )mmol/L ;用 0 2 5、 0 5mmol/L醋酸铅处理细胞 48h ,可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变 ,两铅处理组经流式细胞仪和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,cas pase 3活性也明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 醋酸铅可诱导PC12细胞凋亡 ,其机制可能与caspase 3的活化有关。

银杏叶提取物对糖尿病患者外周血内皮祖细胞GPX及Caspase-3活性的影响

目的:观察银杏叶提取物(GBE)对2型糖尿病(T2DM)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)及特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:取T2DM患者(实验组)和正常人(对照组)外周血分离单个核细胞,在包被有纤维连接蛋白的培养板中加入含血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)等的M199培养基,诱导EPCs分化,48h后去除悬浮细胞,继续培养,于培养第6天加入不同浓度GBE(0mg/L、6.75mg/L、12.50mg/L、25.00mg/L、50.00mg/L)干预24h后,用紫外分光光度计检测培养上清液中GPX活性,用酶标仪检测培养细胞Caspase-3活性。结果:相同GBE浓度时,实验组GPX活性较对照组明显降低(P<0.05),Caspase-3活性较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:GBE对T2DM患者EPCs有保护作用,其机制可能与抗氧化和减少自由基生成有关。

青蒿琥酯对人肺腺癌A549细胞中caspase-9及caspase-3活性的影响

目的研究青蒿琥酯(artesunate,Art)体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对半胱天冬氨酸蛋白酶9(cysteine containing aspartate9,caspase-9)和caspase-3活性的影响。方法Art处理A549细胞,流式细胞计数(Flow Cytometry,FCM)检测细胞周期和细胞凋亡,比色法检测caspase-9活性,westernblot检测caspase-3变化。结果FCM显示A549细胞经100mg/L Art作用24h,出现S期细胞减少(P<0.01),G2/M期细胞数目增多(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.0)。不同浓度(10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)的Art作用A549细胞24h,caspase-9活性呈浓度依赖性增加,分别为对照组的9.87倍、23.33倍(P<0.01)、38.47倍(P<0.01)和60.47倍(P<0.01)。Western blot显示A549细胞经100mg/L Art作用6、12、24h后,细胞浆中caspase-3活化,分别为对照组1.2倍、1.6倍(P<0.01)、1.8倍(P<0.01)。结论青蒿琥酯可通过增加caspase-9和caspase-3的活性,诱导A549细胞凋亡,为阐明Art的抗癌机理,指导青蒿琥酯用于肿瘤治疗提供实验依据。

丹参对槟榔碱诱导血管内皮细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的观察丹参(SalviaMiltiorrhizae,SM)对槟榔碱诱导血管内皮细胞凋亡和Caspase-3活性的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells,HUVECs)为模型,槟榔碱作为致伤因素,SM作为保护因素,用荧光显微镜观察凋亡细胞形态学改变并计算凋亡百分率,比色法检测Cas-pase-3的活性。结果槟榔碱诱导的细胞凋亡率较正常对照组明显增多,Caspase-3活性增加,而SM干预后凋亡发生率明显降低(P<0.05),Caspase-3活性下降。结论丹参可使Caspase-3活性下降,抑制槟榔碱诱导的内皮细胞凋亡的发生,维持内皮细胞结构和功能的完整,可能为其治疗口腔黏膜下纤维性变的机制之一。

地塞米松对脑缺氧缺血新生大鼠细胞凋亡抑制蛋白1 mRNA及Caspase-3活性的影响

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后细胞凋亡抑制蛋白1(cIAP1)基因表达、Caspase-3活性的变化及地塞米松(DEX)对其影响,阐明DEX预处理对HIBD神经保护的可能机制。方法7日龄SD大鼠24只,随机分成DEX组、9g/L盐水组(NS组)、HIBD组、健康对照组。DEX、NS、HIBD组大鼠采用Rice方法制备HIBD模型。DEX和NS组在缺氧缺血前12h腹腔内分别注射DEX、等量9g/L盐水。取HIBD动物模型实验侧大脑半球,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测cIAP1基因表达,比色法测定Caspase-3活性。结果与健康对照组比较,HIBD组大鼠cIAP1基因表达明显下降(P<0.01),Caspase-3活性明显上升(P<0.01)。与HIBD组比较,DEX组cIAP1基因表达明显上升,而Caspase-3活性明显下降。结论脑缺氧缺血可导致cIAP1基因表达下调,Caspase-3活性升高。DEX能通过上调cIAP1基因表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞凋亡,起到神经保护作用。

维生素E缺乏对雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA表达的影响

用低维生素E(VE)和添加不饱和脂肪酸的日粮饲喂雏鸡建立VE缺乏雏鸡模型,采用比色法和半定量RT-PCR法分别检测脾脏淋巴细胞Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA的表达水平。结果显示,VE缺乏组雏鸡脾脏淋巴细胞Caspase-3活性和Caspase-3 mRNA丰度高于对照组,组间差异均极显著(P<0.01)。结果表明,Caspase-3活性及Caspase-3 mRNA丰度的改变,是VE缺乏雏鸡脾脏淋巴细胞凋亡的调控机制之一。

caspase-3活性对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨特异的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )活性水平对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤 (MIRI)的影响。 方法 大鼠在体心肌缺血再灌注模型 ,设青年组和老年组 ;各组分设缺血 3 0min再灌注 1、3、6、12h和 2 4h时相点 ,用荧光分析法检测caspase 3活性 ,缺口末端标记法 (TUNEL)标记凋亡细胞 ,用酶法测定中性粒细胞 (PMNs)浸润数 ,红四唑 (TTC)染色法测梗死范围。 结果 MIRI时 ,青年组和老年组caspase 3活性、心肌细胞凋亡指数 (AI)、PMNs浸润数、心肌梗死范围均随再灌注时间延长而逐渐增加。青年组caspase 3活性和心肌细胞AI于再灌注 12h达到高峰 ,其后维持在较高水平 ;而老年组在再灌注 2 4h仍未下降。所有指标除再灌注 1h外 ,其余各时相点老年组明显较高 ,P <0 0 5～ 0 0 1。 结论 caspase 3参与介导了MIRI时心肌细胞凋亡和PMNs对心肌组织的浸润 ;caspase 3活性水平的增高可能是导致老年大鼠MIRI较青年组严重的重要因素之一。

肺结核患者血清caspase-3活性研究

目的：观察肺结核患者血清 caspase-3活性。方法选取广西医科大学第一附属医院感染科2010年12月住院肺结核患者38例，其中肺结核初治结核杆菌痰涂片阳性13例、肺结核初治结核杆菌痰涂片阴性15例、肺结核复治耐药10例，于入院次日采集外周静脉血，同时选取健康体检者22例为对照组采用分光光度法检测肺结核患者血清 caspase-3酶活力单位，即 caspase-3催化产生的4-硝基苯胺（pNA）的吸光度（A）。结果肺结核初治结核杆菌痰涂片阳性组、肺结核初治结核杆菌痰涂片阴性组、肺结核复治耐药组、正常对照组血清 caspase-3酶活力单位分别为37.15±5.06，50.38±6.29，45.32±3.32和23.89±2.29。各组之间 caspase-3活性差异具有统计学意义（F＝10.68，P＜0.01）。与正常对照组相比，肺结核初治涂阳组（q＝3.51，P＝0.016）、肺结核初治涂阴组（q＝7.5，P＜0.001）、肺结核复治耐药组（q＝5.34，P＝0.001） caspase-3活性差异具有统计学意义。肺结核患者各亚组（耐药组、涂阳组、涂阴组）之间 caspase-3活性差异无统计学意义（P＞0.05）。各组之间性别构成比[χ2＝0.38（DL＝3），P＝0.94]差异无统计学意义；各组之间年龄差异亦无统计学意义（F＝0.82，P＝0.49）。结论 caspase-3与肺结核发生和发展的过程密切相关，其机制可能通过 caspase-3的激活促进了病变细胞的细胞凋亡从而产生机体抗结核的免疫过程。

大鼠海马神经元缺氧/复氧后caspase-3活性的变化

目的:研究caspase-3在体外培养的海马神经元缺氧/复氧损伤中的作用及其抑制剂的干预效果,为缺血性脑损伤的治疗提供实验资料。方法:诱导体外培养的大鼠海马神经元缺氧3 h,再复氧12～48 h,并在缺氧前1 h用不同剂量的caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CMK进行干预处理,应用MTT比色法测定细胞存活率,底物裂解法检测caspase-3活性。结果:缺氧/复氧后大鼠海马神经元存活率逐渐降低,caspase-3活性明显增强,复氧24 h达高峰;用Ac-DEVD-CMK预处理的海马神经元caspase-3活性降低,细胞存活率增高,并呈剂量依赖性。结论:体外培养的大鼠海马神经元缺氧及缺氧/复氧后出现迟发性死亡,caspase-3介导的细胞凋亡机制在这种损伤过程中起一定的作用,通过抑制其活性可产生神经保护作用。

缺氧缺血新生鼠脑caspase-3活性的变化

目的 了解缺氧缺血对新生鼠脑组织caspase 3活性的影响并探讨其意义。方法 7d龄Wistar大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤 (HIBD)组。HIBD组新生鼠行左颈总动脉结扎后 ,吸入氧氮混合气 (氧浓度为 8%) 1L min持续2h。于 1、12、2 4、48h取脑组织在低温下进行匀浆 ,离心后取上清用四肽荧光底物法测定其荧光强度。结果 HIBD后 1hcaspase 3活性已升高 ,2 4h达高峰 ,48h明显下降。各时间点左侧脑组织荧光强度之间比较 ,差异有显著性 ;各时间点与假手术组比较 ,左侧脑组织荧光强度差异有显著性。结论 HIBD新生鼠脑组织中caspase 3明显激活。可能为临床新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)