电针联合神经减压/地塞米松对面神经受损家兔面神经病变及神经生长因子、Caspase-3表达的影响

目的观察电针联合神经减压/地塞米松对面神经损伤家兔面神经病变及血清神经生长因子(NGF)水平、面神经纤维组织中Caspase-3蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将120只健康家兔随机分为假手术组、假手术+西医组、假手术+中医组、假手术+中西医组、模型组、模型+西医组、模型+中医组、模型+中西医组,每组15只。除假手术各组外,其余组均制备面神经损伤模型。术后假手术组、模型组不给予干预,假手术+西医组和模型+西医组均每天给予地塞米松1 mg/kg肌肉注射及面神经减压,假手术+中医组和模型+中医组均每天给予电针治疗(每次30 min,连续电针5 d休息2 d为1个周期),假手术+中西医组和模型+中西医组均每天给予地塞米松肌肉注射、面神经减压及电针治疗,各组均干预至术后第21天。分别于术后第1,7,21天检测外周血中NGF水平,HE染色观察面神经病变情况,免疫组化法检测面神经组织中Caspase-3阳性表达情况。结果术后第1,7,21天,模型各组血清NGF水平均明显低于假手术各组(P均<0.05);模型+中西医组血清NGF水平均明显高于模型组、模型+西医组、模型+中医组(P均<0.05),模型+西医组、模型+中医组均明显高于模型组(P均<0.05),模型+西医组与模型+中医组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。术后第1天,模型各组的Caspase-3阳性表达强度评分均明显高于假手术各组(P均<0.05);模型各干预组术后第1,7,21天的Caspase-3阳性表达强度评分均明显高于相应假手术各干预组(P均<0.05);模型+中西医组术后第1天和第7天的Caspase-3阳性表达强度评分均明显低于同期模型组和模型+西医组(P均<0.05),与模型+中医组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);模型各组间术后第21天的Caspase-3阳性表达强度评分比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论电针联合神经减压/地塞米松有促进面神经损伤修复的作用,其机制可能与上调血清NGF水平、下调面神经组织中Caspase-3蛋白的表达有关。

唾液miR-15b与口腔鳞状细胞癌cleaved caspase-3表达及临床意义

目的 分析口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者唾液miR-15b和组织cleaved caspase-3表达及与预后的关系。方法 收集2016年5月至2020年6月期间我院收治的OSCC患者154例(OSCC组),另收集103例健康志愿者作为对照组。分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)及免疫组化染色法检测唾液miR-15b水平及组织cleaved caspase-3表达。受试者工作特征(ROC)曲线分析唾液miR-15b表达诊断OSCC的效能。分析唾液miR-15b表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系,采用多因素Cox回归分析影响OSCC预后的因素。结果 OSCC患者唾液miR-15b水平显著低于对照组(0.72±0.33 vs. 1.00±0.23,P<0.001)。ROC曲线分析唾液miR-15b水平诊断OSCC的曲线下面积为0.760(0.703~0.817)。与癌旁组织比较,OSCC组织中caspase-3、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。经Spearman相关性分析,OSCC患者的唾液miR-15b水平与OSCC组织cleaved caspase-3蛋白表达呈负相关(r=-0.321,P<0.001)。唾液miR-15b表达与肿瘤直径和预后有关(P<0.05)。miR-15b低表达组患者5年DFS率和5年OS率分别为28.57%和44.16%,高表达组患者5年DFS率和5年OS率分别为62.34%和81.82%,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox风险比例回归模型结果显示TNM分期、根治性手术、唾液miR-15b水平均是影响OSCC患者OS的独立预后因素(P<0.05)。结论 OSCC患者唾液miR-15b水平与组织cleaved caspase-3相关,可作为预测OSCC患者预后的生物标志物。

白藜芦醇对镧暴露仔鼠皮质神经细胞caspase-3表达的影响

通过观察白藜芦醇对镧暴露仔鼠皮层神经细胞caspase-3表达的影响,探讨其对镧暴露仔鼠的神经保护作用。建立白藜芦醇干预镧暴露仔鼠模型,用HE染色法观察皮质神经细胞形态,用实时定量PCR法检测皮质组织caspase-3 mRNA表达水平,用Western-blot法检测皮质组织caspase-3蛋白表达水平。HE染色结果显示:阴性对照组细胞数量多,形态正常;阳性对照组细胞数量最少,细胞损伤明显;随着白藜芦醇剂量的增加,干预组仔鼠皮质神经细胞损伤情况逐渐得到改善。实时定量PCR结果显示:仔鼠皮质组织caspase-3 mRNA表达在各剂量白藜芦醇干预组之间出现差异,与阳性对照组相比,中、高剂量白藜芦醇干预组仔鼠皮质组织中caspase-3 mRNA表达量明显降低,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Western-blot实验结果显示:高剂量白藜芦醇干预组caspase-3蛋白表达水平明显低于阳性对照组和低剂量白藜芦醇干预组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。研究结果提示白藜芦醇可改善镧暴露导致的仔鼠大脑皮质发育损伤,这可能与皮质组织caspase-3的mRNA和蛋白表达水平降低有关。

皮肤切创愈合中caspase-3表达的免疫组化研究

目的探讨皮肤切创损伤愈合过程中,caspase-3在损伤区内的表达以及不同损伤时间caspase-3的变化规律。方法应用免疫组织化学技术对33例不同损伤时间小鼠皮肤切创组织中caspase-3的表达进行研究。同时以3例非切创小鼠皮肤组织做对照。结果伤后6h的损伤皮肤组织中可见少量中性粒细胞表达caspase-3,伤后12～24h,大部分浸润的中性粒细胞及部分单核细胞为caspase-3阳性。随伤后时间延长,caspase-3阳性细胞以单核细胞及成纤维细胞为主。伤后0～3h,caspase-3阳性细胞比率较低,为(4.53±6.53)%,12h后逐渐增加,伤后3d达高峰,为(62.66±4.84)%,其后逐渐下降。结论小鼠皮肤损伤愈合过程中,caspase-3可能在诱导损伤区内中性粒细胞、单核巨噬细胞及成纤维细胞发生凋亡过程中发挥重要作用,同时,caspase-3的规律性表达可用于损伤时间的推断。

超声对软骨细胞凋亡、caspase-8和caspase-3表达的影响

背景:超声治疗能够缓解疼痛,改善膝骨关节炎患者的运动功能,但目前关于超声治疗的文献缺乏一致性。目的:进一步验证超声治疗的膝骨关节炎有效性。方法:24只兔子随机分为3组,正常组不干预;模型组兔行前交叉韧带离断诱导膝骨关节炎,不接受任何治疗;超声组兔建模后接受超声波治疗10 min/次,1次/d,0.3 W/cm2,1 MHz,共治疗10次。采用苏木精-伊红染色进行兔关节软骨组织学观察,运用免疫印迹和RT-PCR技术检测兔软骨中的caspases3和caspases8的表达,TUNEL技术检测兔膝骨关节软骨细胞凋亡率。结果与结论:正常兔软骨组织软骨细胞呈柱状整齐的排列,模型中软骨层变薄,软骨细胞排列无序而少。超声治疗后软骨细胞重新排列,趋于整齐,细胞数增加。模型组为膝骨关节炎模型;与正常组比较,模型组和超声组改良Mankin评分较高,模型组和超声组软骨细胞凋亡指数更高,模型组高于超声组。与正常组比较模型组和超声组caspase-3和caspase-8表达较高,超声治疗后两项指标表达下降。结果表明,超声可以改善软骨组织结构、降低caspase-3、caspase-8的表达,降低软骨细胞凋亡。提示超声治疗膝骨关节炎是有效的。

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),于损伤后不同时点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达,神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组>A组(P<0.01)。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。

大鼠不同程度脑挫伤后caspase-3表达的研究

目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后caspase-3表达的变化。方法应用免疫组织化学染色、Westernblot和RT-PCR方法对48例实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术的脑组织做对照。结果伤后1hcaspase-3即有表达,24～48h达高峰,挫伤后14dcaspase-3仍维持较高水平。阳性细胞多集中于挫伤区及周围带皮质和脑实质内海马区,不同程度脑挫伤各组之间阳性细胞面积和灰度存在差异;损伤组caspase-3酶原裂解增加,不同程度脑挫伤各组之间存在一定的差异;损伤组cas鄄pase-3表达量明显高于对照组;不同程度脑挫伤组之间于各个时间段caspase-3mRNA表达未见差异。结论Caspase-3表达增加,可辅助诊断1h～14d的脑挫伤,caspase-3阳性细胞面积和灰度的变化及酶原裂解程度与脑挫伤程度有关。

FasL诱导caspase-3表达与肺癌细胞凋亡相关关系的研究

目的 探讨FasL基因转染的肺腺癌细胞中caspase 3的表达 ,并观察其与肺腺癌细胞凋亡的关系。方法 RT PCR、流式细胞术检测caspase 3在FasL基因转染的A 5 4 9肺腺癌细胞中的表达 ,流式细胞术、Westernblot检测肺腺癌细胞凋亡以及caspase 3活性。结果 caspase 3在A 5 4 9母系细胞中低水平表达 ,转基因后的A 5 4 9/FasL细胞的caspase 3的表达和活性显著升高 (P <0 0 1)。同时肺癌细胞凋亡率升高 (4 4 0 8%vs 18 15 % ,P <0 0 1) ,凋亡率与caspase 3的活性呈明显正相关关系 (γ =0 6 4 7,P <0 0 1)。结论 caspase 3在肺癌凋亡中起重要作用 ;FasL基因转染的肺腺癌细胞的凋亡与caspase

四君子汤对脾虚证胃癌MGC803细胞周期凋亡及Caspase-3表达的影响

目的:探讨四君子汤对脾虚证胃癌MGC803细胞周期凋亡及Caspase-3表达。方法:采用倒置显微镜观察人胃癌MGC803细胞形态学变化,透射电镜观察染色情况,采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,采用免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果:倒置显微镜下5umol/L四君子汤组作用48 h后胃癌细胞数目减少,细胞分裂不明显,体积明显缩小,可发现核固缩现象以及圆形体积变小的凋亡小体形成;透射电镜下5umol/L四君子汤处理后细胞膜微绒毛减少,胞质有所浓缩且细胞体积变小,核染色聚集与核膜,电子密度高,可见明显的凋亡小体;流式细胞仪检测结果显示,四君子汤可诱导MGC803发生凋亡,细胞周期检测显示G0/G1期比值明显增加,而在S其与G2/M期则降低,故在G0/G1期发生阻滞;5umol/L四君子汤组Caspase-3表达显著高于0.1%DMSO组,差异有统计学意义。结论:四君子汤对脾虚证胃癌MGC803具有明显促凋亡作用,细胞周期阻滞在G0/G1期,且通过增加Caspase-3表达而促进其凋亡。

甲状腺穿刺物中Bcl-2、Caspase-3表达与乳头状甲状腺癌病理特征的关系分析

目的:分析甲状腺穿刺物中Bcl-2、Caspase-3表达与乳头状甲状腺癌病理特征的关系。方法:选取我院2021年1—12月收治的经超声引导细针穿刺细胞学检查的患者121例行甲状腺结节切除术后病理学检查,其中良性结节患者79例(良性组),乳头状甲状腺癌患者42例(恶性组),比较两组患者穿刺物中的B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨冬酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平。采用Logistic回归分析Bcl-2、Caspase-3表达的影响因素与乳头状甲状腺癌病理特征的关系。结果:两组患者的甲状腺结节穿刺物中均有Bcl-2、Caspase-3的表达,恶性组的Bcl-2 mRNA相对表达量显著高于良性组,Caspase-3 mRNA的相对表达量显著低于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。乳头状甲状腺癌中Bcl-2 mRNA相对表达量在病灶直径、TNM分期、淋巴结是否转移之间差异有统计学意义(P<0.05),而在性别、年龄、病灶个数和位置之间数值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Caspase-3 mRNA相对表达量在TNM分期、淋巴结是否转移之间差异有统计学意义(P<0.05),而在病灶直径、性别、年龄、病灶个数与位置之间数值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,病灶直径、TNM分期、淋巴结转移是Bcl-2表达的影响因素,TNM分期、淋巴结转移是Caspase-3的影响因素。结论:Bcl-2、Caspase-3在乳头状甲状腺穿刺物中均有表达,Bcl-2表达与甲状腺癌的病灶直径、TNM分期、淋巴结转移有关,Caspase-3表达与TNM分期、淋巴结转移有关,可作为术前诊断乳头状甲状腺癌的参考指标。

依西美坦对异位子宫内膜间质细胞caspase-3表达的影响和意义

目的探讨芳香化酶抑制剂依西美坦对异位子宫内膜间质细胞半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响及其临床意义。方法体外培养正常和异位子宫内膜间质细胞.应用RT-PCR检测芳香化酶mRNA的表达.用SABC免疫组织化学法检测caspase-3的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与正常内膜间质细胞相比,异位内膜间质细胞可以利用芳香化酶合成雌激素,caspase-3表达和细胞凋亡减少(P均<0.05);依西美坦灭活芳香化酶,降低雌激素水平,caspase-3表达和细胞凋亡升高(P均<0.05);反向添加雌激素可阻断依西美坦的作用。结论caspase-3调控异位内膜间质细胞的凋亡;依西美坦增加caspase-3的表达,促进异位内膜间质细胞凋亡。

乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质Bcl-2 Fas Caspase-3表达的影响

乌司他丁是一种从健康成年男性尿液中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制药[1],为糖蛋白,含有143个氨基酸,相对分子质量约67000,有2个活性功能区,且不完全重叠,能够同时抑制多种蛋白酶,对溶酶体膜有稳定作用,还可抑制细胞因子和炎症介质的释放、

糖尿病患者血清白细胞介素16和caspase-3表达的意义

白细胞介素16（IL-16）是主要由CD8＋T淋巴细胞产生并分泌的一种促炎细胞因子,与CD4分子结合参与多种炎症反应的发生发展[1,2]。糖尿病被认为是一种慢性低度炎症性疾病,涉及多种炎症因子,例如肿瘤坏死因子-α、干扰素-α、C反应蛋白和白细胞介素系列等[3,4]。干扰素-α可诱导caspase-3活化促进IL-16的分泌[5]。糖尿病兔和妊娠期糖尿病母亲分娩新生儿脐血血清中caspase-3表达均明显升高[6,7]。

吡柔比星对膀胱癌EJ细胞增殖及Livin和Caspase-3表达的影响

目的吡柔比星为半合成的蒽环类抗癌药,常用于膀胱癌术后,预防肿瘤的复发。文中探讨吡柔比星对体外培养人膀胱癌EJ细胞株增殖情况及对相关基因Livin、Caspase-3表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法使用不同浓度的吡柔比星(0、0.1、1、10μg/m L)分别处理EJ细胞株,通过细胞增殖曲线实验检测不同浓度吡柔比星对EJ细胞株生长的影响;倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测不同浓度吡柔比星作用EJ细胞24 h后,膀胱癌EJ细胞周期的分布变化;RTPCR法检测不同药物浓度作用后Livin、Caspase-3 mRNA表达的情况;Western blot法检测确认Livin、Caspase-3蛋白的表达情况。结果 0μg/m L吡柔比星作用EJ细胞24 h后,细胞大小均一,轮廓清楚。随吡柔比星浓度升高(0.1、1、10μg/m L),EJ细胞缩小变形明显,细胞逐渐萎缩、碎裂。与0μg/m L吡柔比星比较,0.1、1、10μg/m L吡柔比星干预膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05),0.1、1、10μg/m L吡柔比星间及各时间点间(24、48、72 h)EJ细胞A值差异有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖抑制率随吡柔比星浓度升高、作用时间延长而升高,有明显的时间-剂量效应关系(P<0.05)。0.1、1、10μg/m L吡柔比星作用EJ细胞24 h后,Livin mRNA表达水平(0.63±0.09、0.44±0.06,、0.21±0.02)较0μg/m L吡柔比星(0.84±0.07)明显降低(P<0.05),而Caspase-3 mRNA表达水平(0.31±0.08、0.52±0.04、0.75±0.01)较0μg/m L吡柔比星(0.12±0.03)明显升高(P<0.05);Livin蛋白表达水平(0.43±0.08、0.26±0.06、0.11±0.01)较0μg/m L吡柔比星(0.74±0.03)明显降低(P<0.05),而Caspase-3蛋白表达水平(0.41±0.07、0.62±0.03、0.90±0.06)较0μg/m L吡柔比星(0.22±0.02)明显升高(P<0.05)。结论吡柔比星抑制EJ细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制可能与下调EJ细胞中Livin蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达,并使细胞阻滞于G2期有关。

槲皮素对肺腺癌细胞株A549细胞中凋亡相关因子caspase-3表达的影响

背景和目的探讨槲皮素是否有诱导肺肿瘤细胞的凋亡作用,以及对肺腺癌细胞系A549细胞中重要凋亡相关因子caspase-3表达的影响。方法采用RT-PCR与Western Blot技术检测在槲皮素不同时间、不同浓度作用A549细胞后的caspase-3mRNA和蛋白表达的变化。结果槲皮素作用A549细胞后,A549细胞的caspase-3mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,在12小时时达到了高峰,呈现出一定的时间和浓度依赖性。结论槲皮素诱导A549细胞调亡可能通过诱导caspase-3的表达而起作用。

丹参酮ⅡA对鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Tan ⅡA低剂量治疗组和Tan ⅡA高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Tan ⅡA高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给予高、低剂量Tan ⅡA3d,每天1次。用免疫组化法观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质Bcl-2和caspase-3蛋白表达,并进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化。结果:脑缺血再灌注24h,缺血再灌注组Bcl-2和caspase-3表达增加,与假手术组比较,差异具有显著性意义(P<0.05);与缺血再灌注组比较,Tan ⅡA高、低剂量治疗组均显著增加Bcl-2表达,减少caspase-3表达,高、低剂量组之间差异亦具有显著性意义(P<0.05)。Tan ⅡA高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有显著性意义(P<0.05)。Tan ⅡA高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,TanⅡA高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组。结论:Tan ⅡA对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低caspase-3蛋白表达有关。

丁苯肽联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Caspase-3表达的影响研究

目的:研究丁苯酞联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Caspase-3表达的影响,并探讨其对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经细胞的保护作用。方法:40只SD大鼠将其随机分为假手术组与缺血再灌注组,应用大脑中动脉内线栓阻断法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别用Longa神经功能评分法与免疫组化法评价丁苯酞联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经细胞保护作用及脑内Caspase-3表达的影响。结果:与缺血再灌注组相较而言,假手术组大鼠所表现的出的神经功能缺失症状明显要,而Caspase-3表达减少。结论:丁苯酞联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注具有重要的保护作用,其中丁苯酞与亚低温均对Caspase-3表达有抑制作用,因此与其作用机制有关。

胃癌中caspase-3表达及其临床病理意义

目的 研究caspase 3表达在胃癌发生发展中的作用。 方法 采用免疫组化S P法观察 113例胃癌旁上皮细胞、原发灶癌细胞和浸润淋巴细胞以及转移灶癌细胞中caspase 3表达 ,并分析原发灶癌细胞中caspase 3表达与胃癌临床病理特征的关系。结果 caspase 3在 5 0 4 % (5 7/113)的胃癌旁上皮细胞中表达 ,高于原发灶癌细胞中的阳性率 32 7% (37/113) (P <0 0 5 ) ;caspase 3在胃癌原发灶浸润淋巴细胞中的阳性率为 70 8% (80 /113) ,高于胃癌旁上皮细胞和原发灶癌细胞中阳性率(P <0 0 5 ) ;5 8 1% (2 5 /43)的转移灶癌细胞中caspase 3表达阳性 ,其阳性率高于对应原发灶癌细胞 (34 2 % ,13/38) (P <0 0 5 ) ;原发灶癌细胞中caspase 3表达与胃癌患者的年龄、性别以及胃癌肿瘤大小、浸润深度、转移、TNM分期、生长方式和分化程度无相关性 (P >0 0 5 )。结论 胃癌原发灶癌细胞中caspase 3表达下调和浸润淋巴细胞中caspase 3表达上调与胃癌发生有关 ,来自原发灶和转移微环境中的化学物质可能通过提高转移灶癌细胞中caspase 3表达 ,进而起到抑制转移灶的作用。

老年晚期非小细胞肺癌组织p53,bcl-2,caspase-3表达变化及其与预后关系

目的分析老年晚期非小细胞肺癌组织p53,bcl-2,caspase-3表达变化及和预后关系。方法老年晚期非小细胞肺癌患者58例的临床资料。结果鳞癌、中央型、有淋巴结转移、低分化患者肿瘤组织中p53阳性表达率均显著高于其他病理类型、周围型、无淋巴结转移、高分化患者(P<0.05),有淋巴结转移、高分化患者肿瘤组织中bcl-2阳性表达率均显著高于无淋巴结转移、低分化患者(P<0.05),无淋巴结转移、高分化患者肿瘤组织中caspase-3阳性表达率均显著高于有淋巴结转移、低分化患者(P<0.05);p53,bcl-2表达阳性患者的2年生存率均显著低于表达阴性患者(P<0.05);肿瘤组织中bcl-2和caspase-3表达呈显著正相关(P<0.05)。结论老年晚期非小细胞肺癌的发生发展可能受到p53,bcl-2,caspase-3的调控,能够为临床判断患者预后提供有效依据。