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鸡Caspase3基因的克隆表达、酶活性及生物信息学分析
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作者 陈扬 项燕华 +1 位作者 李宜海 何秀苗 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4200-4210,共11页
【目的】构建鸡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(chCaspase 3)基因表达载体,鉴定表达蛋白酶活性,并进行生物信息学分析,为后续研究chCaspase 3功能奠定基础。【方法】以鸡法氏囊组织cDNA为模板,通过PCR扩增chCaspase 3基因,构建chCaspase 3基... 【目的】构建鸡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(chCaspase 3)基因表达载体,鉴定表达蛋白酶活性,并进行生物信息学分析,为后续研究chCaspase 3功能奠定基础。【方法】以鸡法氏囊组织cDNA为模板,通过PCR扩增chCaspase 3基因,构建chCaspase 3基因的原核和真核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白后利用Western blotting分析chCaspase 3原核表达产物。将真核表达载体以不同剂量(0、0.5、1.0、1.5、2.0μg)转染DF-1细胞进行表达,利用Western blotting和间接免疫荧光技术(IFA)分析chCaspase 3真核表达产物。用Caspase 3活性检测试剂盒分别检测原核和真核表达蛋白的酶活性;利用生物信息学软件分析chCaspase 3的相似性,并预测chCaspase 3蛋白的结构域和三级结构。【结果】chCaspase 3基因CDS区长852 bp,编码283个氨基酸。本研究成功构建了原核pET28a(+)-chCaspase 3和真核p3×Flag-CMV7.1-chCaspase 3重组质粒,原核表达产物分子质量为36 ku,与预期相符;真核表达产物表达量随转染的真核表达载体量的增加而增加。原核和真核表达产物均具有Caspase 3酶活性。生物信息学分析发现,chCaspase 3与其他物种相似性较低,且亲缘关系较远,chCaspase 3蛋白含有Caspase家族的保守五肽QACRG和经典的CASc结构域,其三维结构与人Caspase 3(hCaspase 3)十分吻合。【结论】试验成功克隆并表达了chCaspase 3基因,重组蛋白具有Caspase 3酶活性,生物信息学预测chCaspase 3蛋白与hCaspase 3蛋白有相似的三维结构,为揭示chCaspase 3蛋白的功能及探索其抗病毒天然免疫机制奠定了基础。 展开更多
关键词 caspase 3基因 原核表达 真核表达 酶活性 生物信息学
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Caspase3基因克隆及在癫痫样放电海马神经元中的表达
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作者 赵文元 刘建民 +2 位作者 卢亦成 周晓平 张鑫 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期210-212,共3页
目的 探讨海马神经元癫痫样放电引起神经元丢失的机制。方法 采用RT PCR法克隆大鼠全长Caspase3cDNA ,然后采用原位杂交和流式细胞技术检测了海马神经元癫痫模型中Caspase3基因表达和神经元凋亡情况。结果 得到了大鼠的全长Caspase3c... 目的 探讨海马神经元癫痫样放电引起神经元丢失的机制。方法 采用RT PCR法克隆大鼠全长Caspase3cDNA ,然后采用原位杂交和流式细胞技术检测了海马神经元癫痫模型中Caspase3基因表达和神经元凋亡情况。结果 得到了大鼠的全长Caspase3cDNA ,发现海马神经元癫痫样放电后出现Caspase3基因表达和神经元凋亡的现象。结论 癫痫样放电启动Caspase3表达 。 展开更多
关键词 caspase3基因 克隆 癫痫样放电 海马 神经元 原位杂交技术 流式细胞技术 细胞凋亡
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IP_6对人结肠癌细胞HT-29凋亡Caspase3基因作用 被引量:5
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作者 宋莉 宋扬 《青岛大学医学院学报》 CAS 2008年第3期201-204,共4页
目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞HT-29的诱导凋亡作用,检测Caspase3基因在IP6处理细胞前后表达的变化,并对IP6诱导人结肠癌细胞HT-29的凋亡机制进行初步探讨。方法不同浓度的IP6以不同时间作用于体外培养的HT-29细胞,用MTT法检... 目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞HT-29的诱导凋亡作用,检测Caspase3基因在IP6处理细胞前后表达的变化,并对IP6诱导人结肠癌细胞HT-29的凋亡机制进行初步探讨。方法不同浓度的IP6以不同时间作用于体外培养的HT-29细胞,用MTT法检测IP6持续作用对癌细胞增殖的影响;透射电镜观察癌细胞超微结构的变化;用RT-PCR方法对IP6作用前后以及作用不同浓度和时间的癌细胞内Caspase3活性进行检测。结果IP6能显著抑制人结肠癌细胞HT-29生长,呈剂量与时间依赖性;IP6作用后,HT-29细胞出现凋亡的形态学改变;与对照组相比,不同浓度的IP6作用不同时间后,Caspase3 mRNA表达均升高(F=8.173-91.755,q=3.960-17.095,P〈0.05),IP6作用6个月组Caspase3 mRNA表达升高较其他时间组显著(q=12.858-14.890,P〈0.01)。结论IP6具有抑制人结肠癌细胞HT-29增殖和诱导凋亡的作用;IP6长期作用诱导细胞凋亡更加显著;Caspase3基因参与细胞的凋亡调节机制,发挥重要作用。 展开更多
关键词 植酸 HT29细胞 细胞凋亡 基因 caspase3
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γ-羟基丁酸钠联合放射治疗脑胶质瘤Caspase3基因表达分析 被引量:1
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作者 楚建军 韩泽广 +3 位作者 杜荣兰 赵涤非 王明智 范强 《江南大学学报(自然科学版)》 CAS 2003年第6期648-652,655,共6页
目的 探讨γ 羟基丁酸钠对脑组织Caspase3的表达影响及其与放射性损伤严重程度的关系 方法 采用逆转录 多聚酶链反应(RT PCR)技术检测γ 羟基丁酸钠联合放射治疗脑胶质瘤前后瘤组织与瘤旁脑组织Caspase 3mRNA表达量,分析Caspase3基因... 目的 探讨γ 羟基丁酸钠对脑组织Caspase3的表达影响及其与放射性损伤严重程度的关系 方法 采用逆转录 多聚酶链反应(RT PCR)技术检测γ 羟基丁酸钠联合放射治疗脑胶质瘤前后瘤组织与瘤旁脑组织Caspase 3mRNA表达量,分析Caspase3基因表达活性与放射性损伤的关系 结果 常规放疗、超分割放疗组的瘤组织、瘤旁脑组织Caspase 3mRNA表达量较高;放疗前40min给予GHB200mg/kg联合常规放疗、超分割放疗,其Caspase 3mRNA表达显著降低(Q=7 93,P<0 01) 而GHB200mg/kg不接受放疗,其脑胶质瘤组织Caspase 3mRNA表达量较低,仅为19 182±1 19,较常规放疗差别显著(P<0 05) 胶质瘤及瘤旁正常脑组织放疗前Cas pase 3mRNA表达量较低,放疗后显著增加;射野内瘤组织Caspase 3mRNA表达量明显高于瘤旁组织,脑组织放射损伤严重程度野内高于野外 使用GHB后瘤组织Caspase 3mRNA表达量降低,降幅达16 2%左右,常规放疗组瘤旁脑组织Caspase 3mRNA的表达量较超分割放疗组(HF)高1 22倍 采用HF较常规放疗脑组织Caspase 3mRNA表达量减少21 83% 结论 γ 羟基丁酸钠联合放射治疗显著脑胶质瘤Caspase3基因表达,Caspase 3mRNA表达量与放射损伤严重程度有关。 展开更多
关键词 Γ-羟基丁酸钠 胶质瘤 半胱天冬酶 放射治疗 分子生物学
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大鼠海马神经元癫模型中神经元凋亡及caspase3基因的表达
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作者 刘建民 赵文元 +2 位作者 卢亦成 周晓平 赵瑞 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期69-71,共3页
目的:探讨体外培养大鼠海马神经元癫模型中神经元丢失的分子机制。方法:制备大鼠海马神经元癫样放电细胞模型,以膜片钳全细胞记录对模型放电进行检测,采用RT PCR法克隆大鼠全长caspase 3 cDNA,采用原位杂交和流式细胞术检测模型中ca... 目的:探讨体外培养大鼠海马神经元癫模型中神经元丢失的分子机制。方法:制备大鼠海马神经元癫样放电细胞模型,以膜片钳全细胞记录对模型放电进行检测,采用RT PCR法克隆大鼠全长caspase 3 cDNA,采用原位杂交和流式细胞术检测模型中caspase 3基因表达和神经元凋亡情况。结果:成功克隆获得大鼠全长caspase 3 cDNA,其序列与文献报道一致。模型组海马神经元癫样放电3 h后caspase 3基因表达开始增多,6 h后凋亡细胞开始明显增加,两者均较对照组明显增加。结论:癫样放电可能启动神经元caspase 3表达,继而介导神经元凋亡。 展开更多
关键词 caspase 3 基因表达 癫痫 海马 神经元 凋亡
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Caspase3基因克隆及在癫痫样放电海马神经元中的表达 被引量:1
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作者 刘建民 赵文元 +1 位作者 卢亦成 周晓平 《立体定向和功能性神经外科杂志》 2003年第2期63-66,共4页
目的 探讨海马神经元癫痫样放电引起神经元丢失的机制。方法 采用RT PCR法克隆大鼠全长Caspase3cDNA ,然后采用原位杂交和流式细胞技术检测了海马神经元癫痫模型中Caspase3基因表达和神经元凋亡情况。结果 获得了大鼠的全长Caspase3c... 目的 探讨海马神经元癫痫样放电引起神经元丢失的机制。方法 采用RT PCR法克隆大鼠全长Caspase3cDNA ,然后采用原位杂交和流式细胞技术检测了海马神经元癫痫模型中Caspase3基因表达和神经元凋亡情况。结果 获得了大鼠的全长Caspase3cDNA ,发现海马神经元癫痫样放电后出现Caspase3基因表达和神经元凋亡的现象。结论 癫痫样放电启动Caspase3表达 ,继而介导神经元凋亡。 展开更多
关键词 caspase3 癫痫 神经元
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ChIP技术分析A549细胞中AP-1与cyclinD1和caspase3基因转录启动子的结合
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作者 沈飞 李智涛 +2 位作者 赵瑞红 吴逸明 吴卫东 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第18期F0002-F0002,共1页
关键词 染色质免疫沉淀 AP-1 CYCLIN D1 caspase3
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caspase3基因表达与原发性肝细胞癌细胞凋亡无关 被引量:16
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作者 孙宝华 张俊 +5 位作者 王宝菊 赵西平 汪由坤 喻植群 杨东亮 郝连杰 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期39-41,共3页
目的 研究caspase3在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达并观察其与细胞凋亡的关系。方法 原位杂交检测caspase3在HCC中的表达 ,原位末端标记检测细胞凋亡。结果  39例HCC中的2 1例 (5 3 8% )不同程度的表达caspase3,而 46 2 %的HCC未见c... 目的 研究caspase3在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达并观察其与细胞凋亡的关系。方法 原位杂交检测caspase3在HCC中的表达 ,原位末端标记检测细胞凋亡。结果  39例HCC中的2 1例 (5 3 8% )不同程度的表达caspase3,而 46 2 %的HCC未见caspase3表达。HCC中caspase3阳性率低于癌旁非癌肝组织中的阳性率 (87 5 % ,7/ 8) ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。caspase3的表达与肿瘤的分化有关 ,中等至高分化的HCC中阳性率 (72 2 % )明显高于低分化HCC中的阳性率 (38 1% ,P <0 0 5 ) ,而与肿瘤的大小、分级无关。尽管在已转移的HCC中阳性率 (6 2 5 % )高于无转移的HCC中的阳性率 (5 1 6 % ) ,但差异无显著性 (P >0 0 5 )。检测HCC中的细胞凋亡发现 ,肿瘤组织中caspase3的表达与肿瘤细胞的凋亡无明显的关系 ,caspase3阳性的HCC中 ,其细胞凋亡指数 (AI)与caspase3阴性的HCC中的AI相比 ,差异无显著性 (7 1‰∶6 6‰ ,P >0 0 5 )。结论 caspase3失表达在HCC的发生中起重要作用 ,但与HCC中细胞凋亡的关系不很密切。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞 caspase3基因 基因表达
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基于转录组学与加权基因共表达网络分析探讨降脂轻身胶囊介导NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴改善高脂血症小鼠的作用及机制
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作者 徐学功 刘燕 +4 位作者 苏东东 赵梦 黑炫鼎 翟晨光 陈晓阳 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1816-1826,共11页
目的基于转录组学与加权基因共表达网络分析(WGCNA)探讨降脂轻身胶囊介导NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴改善高脂血症的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、瑞舒伐他汀组(1.3 mg·kg^(-1))及降脂轻身胶囊低、... 目的基于转录组学与加权基因共表达网络分析(WGCNA)探讨降脂轻身胶囊介导NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴改善高脂血症的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、瑞舒伐他汀组(1.3 mg·kg^(-1))及降脂轻身胶囊低、高剂量组(0.6、2.4 g·kg^(-1)),每组8只。除对照组给予普通饲料外,其余各组给予高脂饲料维喂养,以复制高脂血症模型。各给药组小鼠每日按上述剂量灌胃给药,每日1次,连续干预10周。称取小鼠肝脏质量并计算肝脏指数、Lee’s指数、肝脏胫骨比值;采用HE染色、油红O染色法观察肝脏组织病理学变化;ELISA法检测血清生化指标:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β;采用博奥晶典小鼠真核转录组芯片V4对肝脏组织进行转录组测序,并进行芯片表达信息与血脂水平性状信息的加权基因共表达网络分析;分析得到降脂轻身胶囊干预高脂血症的核心基因群(潜在作用靶点),并进行蛋白质互作(PPI)网络分析及GO功能、KEGG通路富集分析;采用RT-qPCR法检测肝脏组织NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1βmRNA表达水平;免疫荧光法检测肝组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白表达。结果与模型组比较,降脂轻身胶囊能明显降低高脂血症小鼠的体质量、肝湿质量、肝指数、Lee’s指数、肝脏胫骨比值(P<0.05);有效减轻高脂血症小鼠肝组织炎性浸润及脂肪变性,明显减少脂质沉积面积(P<0.05);明显降低血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST、IL-18、IL-1β水平(P<0.05);明显下调肝组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达(P<0.05),降低肝组织中IL-18、IL-1βmRNA表达水平(P<0.05)。转录组学与加权基因共表达网络分析显示,降脂轻身胶囊对血脂的调控作用与炎症通路密切相关。结论降脂轻身胶囊能够调节NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴抑制高脂血症小鼠肝组织炎症反应,进而改善高脂血症小鼠的血脂水平。 展开更多
关键词 降脂轻身胶囊 高脂血症 转录组学 加权基因共表达网络分析 NF-κB/NLRP3/caspase-1信号轴 炎症反应 小鼠
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有氧运动训练影响阿尔茨海默症小鼠海马Notch1、Caspase-3的表达 被引量:3
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作者 杨力源 张业廷 +1 位作者 李垂坤 魏翠兰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第26期4113-4120,共8页
背景:β-淀粉样蛋白和Tau蛋白会对阿尔茨海默症患者的认知功能产生不良影响,研究发现Notch1及Caspase-3能够调控β-淀粉样蛋白和Tau蛋白的表达。Notch1及Caspase-3是否介导了有氧运动改善阿尔茨海默症患者认知能力的过程还不清楚,目前... 背景:β-淀粉样蛋白和Tau蛋白会对阿尔茨海默症患者的认知功能产生不良影响,研究发现Notch1及Caspase-3能够调控β-淀粉样蛋白和Tau蛋白的表达。Notch1及Caspase-3是否介导了有氧运动改善阿尔茨海默症患者认知能力的过程还不清楚,目前缺乏长期有氧运动影响阿尔茨海默症小鼠海马中Notch1及Caspase-3表达的研究。目的:观察长期有氧运动干预阿尔茨海默症小鼠的空间学习记忆情况及其海马中Notch1及Caspase-3的表达,探讨Notch1及Caspase-3对阿尔茨海默症小鼠的影响。方法:将3月龄野生型及APP/PS1双转基因阿尔茨海默症小鼠随机分为4组:野生对照组、野生运动组、阿尔茨海默症对照组、阿尔茨海默症运动组,每组20只。对照组小鼠不进行运动,运动组小鼠进行5个月的有氧运动干预。运动干预结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力;采用Real-timePCR、免疫荧光及Westernblot检测各组小鼠海马组织Aβ_(1-42)、Tau、Notch1及Caspase-3蛋白的表达。结果与结论:①阿尔茨海默症小鼠空间学习记忆能力显著差于野生组(P<0.05);运动组小鼠空间学习记忆能力显著优于对照组(P<0.05);②阿尔茨海默症对照组小鼠海马Aβ_(1-42)、Tau、Notch1及Caspase-3表达均显著高于野生对照组(P<0.05);阿尔茨海默症运动组小鼠海马Aβ_(1-42)、Tau、Notch1及Caspase-3表达显著低于阿尔茨海默症对照组(P<0.05);③提示:长期有氧运动干预能够改善阿尔茨海默症小鼠的空间学习记忆能力,而这可能与有氧运动降低阿尔茨海默症小鼠海马Notch1、Caspase-3、Aβ_(1-42)及Tau蛋白表达有关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默症 有氧运动 学习记忆能力 NOTCH1 caspase-3
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miR-421靶向调控Menin/Caspase-3影响抑郁症的机制 被引量:1
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作者 刘永辉 谭庆晶 +4 位作者 陈清 韦理萍 杨俊威 杨侃 高玉广 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期453-459,共7页
目的探讨miR-421影响抑郁症发生发展的作用机制。方法采取单次腹腔注射脂多糖(LPS)方法建立抑郁大鼠模型,采用糖水偏好度测试和旷场实验进行抑郁行为检测。通过miRNA微阵列芯片和RT-PCR分析miR-421在抑郁大鼠海马组织中的表达量,运用Tar... 目的探讨miR-421影响抑郁症发生发展的作用机制。方法采取单次腹腔注射脂多糖(LPS)方法建立抑郁大鼠模型,采用糖水偏好度测试和旷场实验进行抑郁行为检测。通过miRNA微阵列芯片和RT-PCR分析miR-421在抑郁大鼠海马组织中的表达量,运用TargetScan数据库和mi RDB数据库进行预测miR-421的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验观察其与靶基因的结合情况,观察过表达和抑制miR-421对靶基因的影响,随后过表达和抑制靶基因,观察其对下游因子的影响,最终探究miR-421影响抑郁症的相关机制。结果miRNA微阵列芯片和RT-PCR检测表明miR-421在抑郁大鼠海马组织中呈高表达(P<0.001),抑制miR-421的表达可显著恢复抑郁大鼠的体重和运动能力(P<0.001)。TargetScan数据库预测得到Menin与miR-421存在结合靶点,双荧光素酶报告基因实验表明Menin与miR-421具有相互作用;当miR-421过表达时,Menin表达量会下调(P<0.001),相反,当抑制miR-421表达时,Menin表达量会上调(P<0.001)。qPCR检测提示,Menin下游因子Caspase-3、NF-κB在抑郁大鼠模型海马组织中的表达显著提高(P<0.001),IL-1β在抑郁大鼠模型海马组织中的表达明显提高(P<0.01),当抑制Menin表达时,Caspase-3、NF-κB、IL-1β表达量会升高(P<0.001),当过表达Menin时,Caspase-3、NF-κB、IL-1β表达量则降低(P<0.001)。结论抑制miR-421表达可升高Menin表达,降低Caspase-3含量,减少神经炎症反应,从而改善抑郁症状。 展开更多
关键词 抑郁症 miR-421 MENIN caspase-3 动物实验 作用机制
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基于Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究加味旋覆代赭汤治疗食管癌前病变的作用机制 被引量:1
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作者 田晶晶 袁红霞 +1 位作者 张月林 张桂贤 《中国中西医结合外科杂志》 CAS 2024年第2期258-264,共7页
目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模... 目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模成功后,分别进行药物灌胃干预,空白组、模型组用生理盐水灌胃,中药组和西药组分别给予加味旋覆代赭汤、西药(雷贝拉唑+莫沙必利)灌胃,给药8周取材。利用光学显微镜观察食管上皮组织的形态学变化;分别应用蛋白质印迹法(Western-blot)及聚合酶链式反应(PCR)检测食管上皮组织Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠食管上皮病理积分升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组大鼠食管上皮病理积分均降低(P<0.01)。PCR及Western-blot检测结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,中药、西药组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均增高(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠食管组织中Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可能通过下调Bcl-2/Bax比值,增加线粒体外膜通透性,释放凋亡因子,激活Caspase-3,使病变组织发生凋亡,扭转食管上皮异型增生,从而起到治疗食管癌前病变的作用。 展开更多
关键词 食管癌前病变 加味旋覆代赭汤 caspase-3 Bcl-2 BAX 细胞凋亡
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电针联合神经减压/地塞米松对面神经受损家兔面神经病变及神经生长因子、Caspase-3表达的影响
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作者 向兴刚 买买江·阿不力孜 +5 位作者 于晓晨 蔡宁 李大志 张永辉 依马木·依达依吐拉 林琳 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第8期1047-1052,1136,共7页
目的观察电针联合神经减压/地塞米松对面神经损伤家兔面神经病变及血清神经生长因子(NGF)水平、面神经纤维组织中Caspase-3蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将120只健康家兔随机分为假手术组、假手术+西医组、假手术+中医组、假手术... 目的观察电针联合神经减压/地塞米松对面神经损伤家兔面神经病变及血清神经生长因子(NGF)水平、面神经纤维组织中Caspase-3蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将120只健康家兔随机分为假手术组、假手术+西医组、假手术+中医组、假手术+中西医组、模型组、模型+西医组、模型+中医组、模型+中西医组,每组15只。除假手术各组外,其余组均制备面神经损伤模型。术后假手术组、模型组不给予干预,假手术+西医组和模型+西医组均每天给予地塞米松1 mg/kg肌肉注射及面神经减压,假手术+中医组和模型+中医组均每天给予电针治疗(每次30 min,连续电针5 d休息2 d为1个周期),假手术+中西医组和模型+中西医组均每天给予地塞米松肌肉注射、面神经减压及电针治疗,各组均干预至术后第21天。分别于术后第1,7,21天检测外周血中NGF水平,HE染色观察面神经病变情况,免疫组化法检测面神经组织中Caspase-3阳性表达情况。结果术后第1,7,21天,模型各组血清NGF水平均明显低于假手术各组(P均<0.05);模型+中西医组血清NGF水平均明显高于模型组、模型+西医组、模型+中医组(P均<0.05),模型+西医组、模型+中医组均明显高于模型组(P均<0.05),模型+西医组与模型+中医组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。术后第1天,模型各组的Caspase-3阳性表达强度评分均明显高于假手术各组(P均<0.05);模型各干预组术后第1,7,21天的Caspase-3阳性表达强度评分均明显高于相应假手术各干预组(P均<0.05);模型+中西医组术后第1天和第7天的Caspase-3阳性表达强度评分均明显低于同期模型组和模型+西医组(P均<0.05),与模型+中医组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);模型各组间术后第21天的Caspase-3阳性表达强度评分比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论电针联合神经减压/地塞米松有促进面神经损伤修复的作用,其机制可能与上调血清NGF水平、下调面神经组织中Caspase-3蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 面神经损伤 电针 神经减压 caspase-3蛋白
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柴胡疏肝汤对癫痫大鼠海马组织中Bcl-2、NLRP1、Caspase-3、Caspase-1表达的影响
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作者 何乾超 雷晶晶 +5 位作者 高玉广 王丹辉 陈甜 马玉娟 谷晶 黄德祥 《广西医学》 CAS 2024年第10期1528-1537,共10页
目的探讨柴胡疏肝汤对癫痫大鼠海马组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、含NLR家族pyrin结构域1因子(NLRP1)、Caspase-3、Caspase-1表达的影响。方法基于生物信息学分析筛选柴胡疏肝汤治疗癫痫的核心活性成分及核心靶点。将100只SD大鼠随机分为... 目的探讨柴胡疏肝汤对癫痫大鼠海马组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、含NLR家族pyrin结构域1因子(NLRP1)、Caspase-3、Caspase-1表达的影响。方法基于生物信息学分析筛选柴胡疏肝汤治疗癫痫的核心活性成分及核心靶点。将100只SD大鼠随机分为癫痫组(n=80)与空白组(n=20)。对空白组大鼠不作任何处理,对癫痫组大鼠建立癫痫模型,成功建模后将其随机分为模型组、柴胡疏肝汤低剂量组、柴胡疏肝汤中剂量组、柴胡疏肝汤高剂量组,每组20只。给予柴胡疏肝汤低、中、高剂量组大鼠柴胡疏肝汤(2.5 mg/100 g、5 mg/100 g、10 mg/100 g)灌胃,给予模型组及空白组大鼠生理盐水灌胃。给药4周后,比较模型组与柴胡疏肝汤低、中、高剂量组的大鼠癫痫发作等级,然后处死5组大鼠并获取其海马组织,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot检测Bcl-2、NLRP1、Caspase-3、Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平。结果(1)柴胡疏肝汤治疗癫痫的核心活性成分包括槲皮素、山柰酚、柚皮素、β-谷甾醇、川陈皮素、异鼠李素、木犀草素、豆甾醇、7-甲氧基-2-甲基异黄酮、罗通定,核心靶点包括Bcl-2、NLRP1、Caspase-3、Caspase-1。槲皮素、山柰酚、柚皮素、β-谷甾醇、川陈皮素和木犀草素与核心靶点表现出较好的结合活性。(2)干预后,与模型组相比,柴胡疏肝汤中、高剂量组的癫痫发作等级降低(P<0.05);与柴胡疏肝汤低剂量组相比,柴胡疏肝汤中、高剂量组的癫痫发作等级降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平降低,NLRP1、Caspase-3、Caspase-1的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,柴胡疏肝汤各剂量组Bcl-2的m RNA和蛋白表达水平升高,NLRP1、Caspase-3、Caspase-1的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);柴胡疏肝汤低剂量组、柴胡疏肝汤高剂量组、柴胡疏肝汤中剂量组Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平依次升高,柴胡疏肝汤中剂量组、柴胡疏肝汤低剂量组、柴胡疏肝汤高剂量组NLRP1的m RNA和蛋白表达水平依次升高,柴胡疏肝汤高剂量组、柴胡疏肝汤低剂量组、柴胡疏肝汤中剂量组Caspase-3、Caspase-1的mRNA和蛋白表达水平依次升高(P<0.05)。结论柴胡疏肝汤可能通过上调大鼠海马组织中Bcl-2的表达,抑制NLRP1、Caspase-3、Caspase-1的表达,发挥抗癫痫作用。 展开更多
关键词 癫痫 B细胞淋巴瘤2 含NLR家族pyrin结构域1因子 caspase-3 caspase-1 生物信息分析 大鼠
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槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌caspase-3基因蛋白表达的影响 被引量:10
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作者 季凤清 李宝红 +2 位作者 孙海梅 曾晓蓓 唐玉 《首都医科大学学报》 CAS 2004年第4期435-437,共3页
为观察槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌细胞半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )基因蛋白表达的影响 ,采用大鼠急性心肌缺血模型 ,应用免疫组织化学PAP法检测caspase 3基因蛋白的表达 ,并用图像分析系统进行定量分析。发现 :大鼠急性心肌缺血... 为观察槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌细胞半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )基因蛋白表达的影响 ,采用大鼠急性心肌缺血模型 ,应用免疫组织化学PAP法检测caspase 3基因蛋白的表达 ,并用图像分析系统进行定量分析。发现 :大鼠急性心肌缺血后心肌细胞caspase 3基因蛋白表达明显增强 ,槲皮素预保护可降低caspase 3基因蛋白的表达。提示 :槲皮素对急性心肌缺血损伤有保护作用 ,这种保护作用可能是通过抑制心肌细胞caspase 3基因蛋白的表达实现的。 展开更多
关键词 急性心肌缺血 槲皮素 caspase-3基因 大鼠 基因蛋白表达 心肌细胞 caspase3 半胱氨酸蛋白酶-3 发现 图像分析系统
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肺癌组织 Caspase-3基因表达与细胞凋亡的关系(英文) 被引量:12
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作者 张百红 姜宁西 +4 位作者 邢传平 刘斌 李天真 张红 岳红云 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第1期35-39,共5页
摘 要 :目的 研究 caspase- 3在肺癌中的表达并观察其与细胞凋亡的关系 .方法 免疫组织化学法检测 caspase- 3在肺癌组织中的表达 ,原位未端标记法 (terminal deoxynu-cleotidyl transferase mediated nick end labelling,TUNEL)检... 摘 要 :目的 研究 caspase- 3在肺癌中的表达并观察其与细胞凋亡的关系 .方法 免疫组织化学法检测 caspase- 3在肺癌组织中的表达 ,原位未端标记法 (terminal deoxynu-cleotidyl transferase mediated nick end labelling,TUNEL)检测细胞凋亡 .结果 肺癌细胞 caspase- 3表达呈现胞质染色 .6 2例肺癌中的 3 2例 (5 1 .6 % )不同程度的表达 caspase- 3 .检测肺癌中的细胞凋亡发现 ,3 8例肺癌表达高 TUNEL阳性率(6 1 .2 % ) ,2 4例表达低 TUNEL阳性率 ,高 TUNEL 阳性率与肺癌的淋巴结转移有关 (P=0 .0 0 7) ,并联系着较差的预后 .Caspase- 3的表达与肿瘤的分化 (P=0 .0 1 2 )和淋巴结转移 (P=0 .0 0 5 )有关 ,与患者的年龄、性别、分期及组织学类型无关 .肺癌组织中 caspase- 3的表达与肿瘤细胞的凋亡无明显关系 .Kaplan- meier生存曲线显示 caspase- 3阳性表达联系较好的预后 (P<0 .0 1 ) .结论  caspase- 3表达有重要的预后意义 。 展开更多
关键词 肺癌 caspase-3基因 细胞凋亡 病理
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大鼠肺鳞癌caspase-3基因表达水平与其细胞增殖关系的研究 被引量:5
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作者 陈洪雷 刁路明 +4 位作者 陈福春 刘绚 张玉霞 叶波 刘铭球 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第6期440-443,共4页
目的 探讨caspase 3在大鼠肺鳞癌癌变转化过程中的表达及其与细胞增殖的关系。方法 Wistar大鼠 60只 ,其中 5 0只用化学致癌物 3 甲基胆蒽 (MCA)及二乙基亚硝胺 (DEN)碘油溶液于左肺叶支气管灌注诱发大鼠肺鳞状细胞癌 ,10只作为对照... 目的 探讨caspase 3在大鼠肺鳞癌癌变转化过程中的表达及其与细胞增殖的关系。方法 Wistar大鼠 60只 ,其中 5 0只用化学致癌物 3 甲基胆蒽 (MCA)及二乙基亚硝胺 (DEN)碘油溶液于左肺叶支气管灌注诱发大鼠肺鳞状细胞癌 ,10只作为对照。应用免疫组织化学S P法检测促凋亡基因caspase 3和增殖细胞核抗原 (PCNA)在癌变过程中的表达。结果  3 4例大鼠肺鳞癌中 15例 (4 4 .12 % )有caspase 3的阳性表达 ,阳性系数为 1.3 8± 0 .95 ,均显著低于对照组大鼠支气管粘膜上皮细胞 (P =0 .0 0 7,P <0 .0 1)和癌前病变 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。对照组大鼠支气管粘膜上皮区、实验组大鼠癌前病变区与肺癌区PCNA的平均增殖指数 (PC NA LI)分别为 :14 .10± 5 .0 2、2 8.13± 8.72、41.88± 14 .2 4,两两比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。Caspase 3与PCNA LI呈显著负相关 (r =-0 .73 0 6,P <0 .0 1)。结论 Caspase 3失表达促进了肿瘤细胞的生长 ,可能在大鼠肺鳞癌的发生发展中起着重要的作用。联合检测caspase 3和PCNA蛋白可作为肺鳞癌癌变的主要参考指标。 展开更多
关键词 肺鳞癌 基因表达 细胞增殖 肺肿瘤 免疫组织化学 caspase-3基因 PCNA 增殖细胞核抗原
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Bcl-2蛋白及caspase-3基因表达与暴发性肝衰竭肝细胞凋亡关系的研究 被引量:10
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作者 王玉梅 冯国和 +1 位作者 刘德刚 窦晓光 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期494-496,共3页
目的:研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭(FHF)中对肝细胞凋亡的作用。方法:用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型;免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达;原位杂交法检测肝组织内caspase-3基因表达;缺口原位末端... 目的:研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭(FHF)中对肝细胞凋亡的作用。方法:用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型;免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达;原位杂交法检测肝组织内caspase-3基因表达;缺口原位末端标记技术检测肝细胞凋亡。结果:模型组用药后2 h Bcl-2有较多表达,4 h表达最多,以后逐渐减少,4 h与2 h比较差别显著(P<0.05),与8 h、12 h比较差别十分显著(P<0.01)。模型组用药后2 h caspase-3开始少量表达,8 h达最高峰,并出现典型的肝细胞凋亡改变,12 h表达下降,且同时存在肝细胞凋亡和坏死。。Bcl-2与caspase-3表达及肝细胞凋亡均呈负相关。结论:在FHF中,肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关;Bcl-2可能通过抑制caspase-3的活性而抑制肝细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝细胞凋亡 BCL-2蛋白 caspase-3基因
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RNAi介导Caspase-3基因及其抑制LPS诱导肾脏上皮细胞凋亡的研究 被引量:5
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作者 张艳 陈栋 +2 位作者 贡福盛 刘健 刘晓晴 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期16-19,共4页
目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的... 目的:探讨RNA干扰Caspase-3基因及抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的作用效果。方法:构建针对大鼠Caspase-3基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-Caspase-3shRNA,用电穿孔法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达Caspase-3 shRNA的细胞系。实验分为3组:①正常对照组:未转染的RK3E细胞;②阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;③实验组:转染Caspase-3 shRNA的RK3E细胞系。经脂多糖(LPS)孵育12小时后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达,以及各组Caspase-8蛋白的活性。结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Caspase-3的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P<0.01)。结论:针对Caspase-3的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的肾脏上皮细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 RNA干扰 caspase-3 基因沉默 细胞凋亡
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siRNA介导hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞Caspase-3的影响 被引量:5
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作者 侯敢 黄迪南 +1 位作者 姜英华 梁爱玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期193-197,共5页
目的应用siRNA表达载体介导的RNA i技术,特异地抑制端粒保护蛋白POT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞Caspase-3活化的影响。方法利用作者课题组先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsDNA)的3种重组siRNA表达质粒(pmU6-shRNA1、pmU6... 目的应用siRNA表达载体介导的RNA i技术,特异地抑制端粒保护蛋白POT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞Caspase-3活化的影响。方法利用作者课题组先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsDNA)的3种重组siRNA表达质粒(pmU6-shRNA1、pmU6-shRNA2和pmU6-shRNA3),由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT-PCR和EM-SA法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过RT-PCR、W estern b lot和Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3表达和活化。结果3种pmU6-shRNA重组质粒转染HeLa细胞48 h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平均降低,Caspase-3 mRNA表达水平基本无变化,Caspase-3酶原水平降低,而Caspase-3酶活性增高。结论siRNA表达载体介导的RNA i能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达的抑制导致细胞Caspase-3活化。 展开更多
关键词 RNA干扰 hPOTl基因 HELA细胞株 caspase-3
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