补肾止颤方对帕金森病大鼠Caspase-4/11表达的影响

目的探讨补肾止颤方对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)大鼠Caspase-4/11表达的影响。方法采用蛋白酶抑制因子注射法建立慢性PD大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、多巴丝肼组(2 g·kg^(-1)·d^(-1)),补肾止颤方低、中、高剂量组(15、30、60 g·kg^(-1)·d^(-1)),假手术组采用等量的70%乙醇溶液注射。假手术组、模型组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水;其余各组给予相应药物;连续灌胃3周。观察大鼠的一般情况,于灌药前1周及灌药后第3周进行悬挂实验并评分。采用HE染色、透射电镜观察中脑黑质区神经元病理改变,qPCR技术检测中脑黑质区α-syn、TH、IL-1β、GSDMD、Caspase-4/11的mRNA表达变化。结果补肾止颤方能增加悬挂实验时间及评分,减轻神经元病理损伤,明显抑制α-syn、IL-1β、GSDMD、Caspase-4/11表达,增加TH表达。结论补肾止颤方可有效改善PD模型大鼠的行为障碍、减轻神经元病理损伤,可能通过下调Caspase-4/11,抑制GSDMD蛋白的表达,减少α-syn、IL-1β分泌,从而减轻细胞焦亡,达到神经元保护作用。

雷公藤红素通过调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡

目的探究雷公藤红素(tripterine,TRI)抑制肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)进展的新机制。方法利用不同浓度(0、0.5、2和8μmol·L-1)TRI作用于肝癌细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆、Transwell和蛋白免疫印迹等实验方法评估细胞表型和可能机制;再利用siRNA将靶基因GSDME进行干扰,确定GSDME的作用;最后使用移植肿瘤模型验证TRI在体内抑制HCC细胞的生长的机制。结果TRI可抑制HCC细胞增殖、克隆和侵袭,促进细胞焦亡。免疫印迹结果显示,TRI处理后肝细胞癌HepG2或Hepa1-6中GSDME表达均上调,同时cleaved caspase-3和PARP也明显升高。敲除GSDME后可部分逆转TRI诱导的细胞焦亡。同时GSDME敲低后的细胞具有更强的克隆和迁移能力,且与单独的TRI治疗组相比,细胞凋亡率降低。在体内实验中,TRI抑制可HCC肿瘤生长,TRI+siGSDME组小鼠肿瘤生长速度比单独TRI治疗组快。此外,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中p-eIF2a、ATF4均升高。免疫荧光结果显示,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中ATF4阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论TRI抑制肝癌细胞生长和侵袭可能与其调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡有关。

清肝活血方调控Caspase-4/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡改善酒精性肝损伤

[目的]研究清肝活血方(QGHXR)通过调控半胱天冬酶(Caspase)-4/Caspase-3/GSDME细胞焦亡通路防治酒精性肝病(ALD)的作用机制。[方法]将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和QGHXR组复制ALD小鼠模型。检测血清肝功能、血脂水平;苏木精-伊红(HE)染色及油红O染色观察肝脏病理改变及肝脏脂质沉积状况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)法及免疫荧光染色检测Caspase-4/Caspase-3/GSDME通路相关基因及蛋白表达情况。[结果]与空白对照组比较,模型组小鼠肝组织三酰甘油(TG)水平明显升高(P<0.01),血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平升高(P<0.05),血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平升高(P<0.05);肝脏组织出现病理改变及脂质沉积现象;肝组织IL-1B、IL-6、TNF-α、NLRP3 mRNA表达水平升高。与模型组比较,QGHXR组小鼠肝组织TG水平明显降低(P<0.01),血清ALT、AST、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)水平降低(P<0.05),血清TG、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)以及血清高密度脂蛋白(HDL)水平升高(P<0.01);血清中血脂、肝脏病理改变及脂质沉积现象缓解;GsdmeN、Caspase-4、Caspase-3和C-Caspase-3基因及蛋白水平降低(P<0.05)。[结论]QGHXR可通过调节Caspase-4/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡通路改善ALD小鼠肝损伤和脂质沉积。

解耦联蛋白2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及PKR/Caspase-11蛋白的影响

目的探究解耦连蛋白(UCP)2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-11蛋白的影响。方法按照数字随机法将80只大鼠分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型(CLP)组、单纯腺相关病毒(AAV)组、UCP2过表达手术(UCP2)组各20只。比较各组UCP2、PKR、Caspase-11蛋白表达、心肌组织病理学形态变化、心肌细胞凋亡指数、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与Sham组相比,CLP组、AAV组和UCP2组心肌组织中UCP2、Caspase-11、MDA表达明显升高,心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性明显减少(P<0.05);与CLP和AAV组相比,UCP2组心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性得到明显升高,Caspase-11蛋白MDA含量显著降低(P<0.05)。Sham组心肌仅有少数视野偶见个别凋亡细胞,CLP组和AAV组细胞的凋亡指数明显增加(P<0.05);与CLP组相比,UCP2组心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论过表达UCP2可抑制脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡,调控体内氧化应激平衡,同时对PKR/Caspase-11蛋白有一定的调控作用,增加PKR表达,抑制Caspase-11的表达。

茯苓酸通过Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路调控铁死亡改善阿尔茨海默病大鼠认知障碍的研究

背景阿尔茨海默病(AD)是一种常见且不可逆转的神经退行性脑疾病,严重影响患者的生活品质和生存质量,目前仍缺乏有效的治疗方法延缓或阻止疾病进展。中药及其活性成分在防治AD方面具有重要潜力。目的探讨茯苓酸(PA)对AD大鼠认知障碍及核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7A11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响。方法2022年1—9月将75只6~8周龄雄性SPF级SD大鼠依据随机数字表法分为对照组(Control组)、AD模型组(Model组)、PA治疗组(PA组),PA+Nrf2抑制剂组(PA+ML385组),除Control组外制备AD大鼠模型。造模成功后,PA组腹腔注射50 mg/kg PA,PA+ML385组腹腔注射50 mg/kg PA+30 mg/kg Nrf2抑制剂ML385,Control组与Model组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。末次给药24 h后进行Morris水迷宫实验,第2、4、6天进行定位航行实验,记录大鼠到达平台的时间(逃避潜伏期),第7天移走平台,记录大鼠在120 s内滞留平台时间和穿越平台次数。Nissl染色后观察各组大鼠海马神经元病理变化,普鲁士蓝染色检测海马组织铁沉积,免疫荧光染色检测海马神经元GPX4表达,检测海马组织谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+含量,蛋白质印迹法(Western blotting)检测大鼠海马组织Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达。结果末次给药第2、4、6天Model组逃避潜伏期高于Control组、PA组,PA+ML385组高于PA组,差异有统计学意义(P<0.05);Model组平台停留时间、穿越平台次数低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05)。Nissl染色结果示Model组神经元坏死严重,细胞核皱缩,尼氏体数目减少;PA组神经元坏死减少,排列紧密且尼氏体增多;PA+ML385组神经元损伤明显加重,尼氏体数目减少。普鲁士蓝染色结果示Model组铁沉积较Control组增加,与Model组比较,PA组铁沉积减少,PA+ML385组较PA组铁沉积增多。免疫荧光染色结果示Model组绿色荧光减弱,GPX4阳性细胞减少,PA组细胞绿色荧光较Model组增强,GPX4阳性细胞增多,PA+ML385组较PA组GPX4阳性细胞减少。Model组GSH低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05);Model组MDA、Fe2+高于Control组、PA组,PA+ML385组高于PA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Model组Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白相对表达量低于Control组、PA组,PA+ML385组低于PA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PA可改善AD大鼠认知障碍,其机制可能与通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制铁死亡有关。

基于p53/SLC7A11/GPX4信号轴探讨七叶内酯诱导小鼠乳腺癌4T1细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨七叶内酯对小鼠乳腺癌4T1细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:对七叶内酯与p53、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)进行分子对接,并绘制Kaplan-Meier和time ROC曲线。将4T1细胞分为对照组、1/2 IC_(50)组、IC_(50)组、2 IC_(50)组、erastin组和卡培他滨组。采用CCK-8法观察4T1细胞活力情况,筛选药物干预浓度;电镜观察4T1细胞线粒体形态,评估线粒体损伤情况;试剂盒检测4T1细胞活性氧(ROS)、Fe2+、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和GPX4的水平;采用划痕和Transwell小室实验检测4T1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测p53、SLC7A11、GPX4和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达水平。结果:与对照组相比,七叶内酯1/2 IC_(50)、IC_(50)和2 IC_(50)组细胞活力,GSH和GPX4表达水平,侵袭和迁移能力,以及SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均降低,细胞线粒体变小,膜密度增高,嵴减少(P<0.05),Fe2+、ROS和MDA水平及p53和ACSL4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:七叶内酯可促进4T1细胞铁死亡,其作用机制可能与p53/SLC7A11/GPX4信号通路相关。

鼻咽癌组织中GPX4和SLC7A11的表达及临床意义

目的探讨鼻咽癌(NPC)组织中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达及临床意义。方法将2016年3月至2017年3月于本院诊治的98例NPC患者纳入研究作为NPC组,同期因鼻中隔偏曲接受手术治疗的患者作为对照组。采用免疫组化检测NPC组织和正常鼻黏膜组织中GPX4、SLC7A11的表达情况。采用Spearman秩相关分析癌组织中GPX4、SLC7A11表达的相关性。比较不同NPC临床参数患者之间GPX4、SLC7A11表达阳性率。采用Kaplan-Meier法分析GPX4、SLC7A11表达对NPC患者生存预后的影响。采用单因素及多因素Cox回归分析NPC患者生存预后的影响因素。结果NPC组织中GPX4、SLC7A11表达阳性率分别为75.51%(74/98)、73.47%(72/98),分别高于正常鼻黏膜组织中的11.67%(7/60)、13.33%(8/60),差异均有统计学意义(P<0.001)。NPC组织中GPX4与SLC7A11表达呈正相关(r=0.724,P<0.001)。不同临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及放疗敏感性NPC患者癌组织中GPX4、SLC7A11表达阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。GPX4阳性及阴性表达组的5年总体生存率分别为66.22%(49/74)、91.67%(22/24);GPX4阳性表达组累积生存明显低于阴性表达组(Log-rankχ^(2)=5.822,P<0.001)。SLC7A11阳性及阴性表达组5年总体生存率分别为66.67%(48/72)、88.46%(23/26);SLC7A11阳性表达组累积生存明显低于阴性表达组(Log-rankχ^(2)=5.041,P=0.012)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=1.608,95%CI:1.225~2.112)、淋巴结转移(HR=1.917,95%CI:1.319~2.799)、GPX4阳性(HR=1.839,95%CI:1.228~2.753)、SLC7A11阳性(HR=1.738,95%CI:1.246~2.426)是影响NPC患者生存预后的独立危险因素。结论NPC中GPX4、SLC7A11表达水平升高,两者与不良临床病理特征有关,是NPC患者预后评估的潜在标志物。

基于Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路探讨附芍地芩方抗结直肠癌作用机制

目的探讨附芍地芩方治疗结直肠癌的作用机制。方法体外细胞实验用附芍地芩方处理结直肠癌CT-26细胞,检测细胞增殖、迁移能力。流式细胞术检测结直肠癌CT-26细胞的活性氧(ROS)水平,并检测其铁离子(Fe^(2+))、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。PCR Array与Western blot方法分析验证铁死亡差异基因表达情况。体内动物实验将Balb/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、奥沙利铂组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、附芍地芩方低剂量组(4.49 g·kg^(-1)·d^(-1))、附芍地芩方中剂量组(8.97 g·kg^(-1)·d^(-1))、附芍地芩方高剂量组(17.94 g·kg^(-1)·d^(-1)),检测附芍地芩方对小鼠肿瘤组织Fe^(2+)、ROS、MDA水平,SOD活性及Nrf2、Keap1、SLC7A11、GPX4表达水平的影响。结果体外细胞实验显示,与空白对照组相比,附芍地芩方通过剂量依赖的方式显著抑制了结直肠癌CT-26细胞的增殖与迁移。附芍地芩方可以提高结直肠癌CT-26细胞中的Fe^(2+)(P<0.05)与ROS水平(P<0.01);提高结直肠癌CT-26细胞内MDA水平(P<0.01),并显著降低SOD活性(P<0.01)。铁死亡PCR Array分析发现,与空白对照组比较,附芍地芩方干预后,基因GPX4、SLC7A11表达显著下调,GSTA1、HMOX1、Ca9、Chac1、Keap1、Sqstm1、NOX1、FTH1、Tfr1、SAT2、Pparg、Hamp表达显著上调。Western blot实验检测发现,附芍地芩方干预后,结直肠癌CT-26细胞Keap1蛋白表达上调(P<0.01),Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达下调(P<0.01)。体内动物实验结果显示,附芍地芩方显著抑制小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05),肿瘤组织坏死程度增加,Fe^(2+)、ROS以及MDA水平增加(P<0.05,P<0.01),SOD活性下降(P<0.01),且肿瘤组织中Keap1蛋白表达上调(P<0.01),Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达下调(P<0.01)。结论附芍地芩方具有抗结直肠癌作用,并可能通过抑制Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路促进结直肠癌细胞铁死亡以发挥抗结直肠癌作用。

密点麻蜥调控SLC7A11/GPX4通路诱导胃癌MKN45细胞铁死亡的作用及机制

目的:基于SLC7A11/GPX4信号通路探讨密点麻蜥对人胃癌MKN45细胞发生铁死亡的影响。方法:选择SD大鼠制备含药血清,将MKN45细胞随机分为空白对照组(10%空白血清)、5-FU含药血清(10%)阳性对照组、密点麻蜥含药血清低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度组。CCK-8法检测MKN45细胞的存活率;Transwell法检测MKN45细胞的迁移及侵袭能力;激光共聚焦检测细胞内二价铁离子(Fe^(2+))水平;试剂盒检测细胞内LPO水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;qPCR法检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53 mRNA表达的影响;Western Blotting检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,密点麻蜥含药血清中、高浓度组MKN45细胞存活率、迁移及侵袭能力显著降低,Fe^(2+)、ROS水平显著升高,P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低,高浓度组LPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:密点麻蜥可能通过抑制SLC7A11/GPX4信号通路,同时促进细胞内Fe~(2+)、LPO的积累,从而诱导MKN45细胞发生铁死亡,抑制其增殖、迁移及侵袭。

CCK-8降低LPS诱导的小鼠单核细胞RAW264.7 CHOP/caspase-11/caspase-1的表达

目的探讨CCK-8对LPS激活RAW264.7细胞CHOP/caspase-11/caspase-1信号通路的影响。方法用LPS和(或)CCK-8和(或)CCK-8的1受体阻滞剂孵育RAW 264.7细胞,用Western blot法检测CHOP、caspase-11蛋白表达,用试剂盒检测caspase-1活性,用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-1β水平。结果与对照组相比,LPS组CHOP、caspase-11表达水平均显著升高(P<0.05),给予CCK-8可有效抑制LPS诱导的CHOP、caspase-11表达升高(P<0.05),而预先给予CCK-8的1受体阻滞剂可明显抑制CCK-8的作用。caspase-1活性变化、IL-1β含量变化趋势均与CHOP、caspase-11表达水平变化趋势一致(P<0.05)。结论 CCK-8通过受体1抑制CHOP/caspase-11/caspase-1表达,减少LPS诱导IL-1β的生成,发挥抗炎作用。

淫羊藿苷通过上调SLC7A11/GPX4轴减轻铁死亡改善心力衰竭

目的 基于脂质过氧化研究淫羊藿苷抗异丙肾上腺素所致小鼠心力衰竭的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为空白组、异丙肾上腺素模型组(ISO,15 mg/kg)、氯沙坦阳性药组(Los, 9 mg/kg),以及淫羊藿苷低剂量组(ICA-L组,15 mg/kg)、淫羊藿苷高剂量组(ICA-H组,60 mg/kg)。采用小动物超声检测仪检测小鼠心功能(EF%、FS%)的变化,计算小鼠心脏指数。采用HE染色观察小鼠左心室组织病理变化,采用布鲁士蓝染色观察小鼠左心室组织铁离子的积累。采用Western blot检测小鼠左心室组织中铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4、4-HNE、ACSL4、LPCAT3、TFR1、DMT1的表达。结果 ICA和Los可以改善ISO引起的小鼠左心室射血分数和短轴缩短率的降低,减轻ISO所致的左心室组织病理损伤以及铁离子过度积累,抑制ISO所致左心室组织中SLC7A11、GPX4蛋白的下调,4-HNE、ACSL4、LPCAT3、TFR1、DMT1蛋白的上调(P<0.05)。结论 ICA可能通过上调SLC7A11/GPX4轴抗脂质过氧化,减轻铁死亡,改善ISO所诱导的小鼠心力衰竭。

茯苓酸通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究茯苓酸通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路抑制氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的心肌细胞铁死亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,诱导建立细胞OGD/R模型后以0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L茯苓酸处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各处理组细胞活力后筛选出合适的茯苓酸作用浓度。将H9c2细胞随机分为对照组、模型组、茯苓酸组、ML385组(Nrf2抑制剂组)、茯苓酸+ML385组,除对照组外其余各组建立细胞OGD/R模型后以茯苓酸、ML385分组处理,采用CCK-8法与流式细胞实验分别检测各组H9c2细胞活力、凋亡率;采用试剂盒检测各组H9c2细胞培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、促炎因子[前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、抗炎因子白细胞介素(IL)-10水平及细胞抗氧化因子[过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)]、铁死亡相关指标[铁含量、丙二醛(MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组H9c2细胞凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,茯苓酸组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05);ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与茯苓酸组比较,茯苓酸+ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。结论:茯苓酸可通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号而抑制OGD/R诱导的心肌细胞炎症、脂质过氧化与铁死亡,增强其抗氧化活性及细胞活力,最终减轻其细胞凋亡损伤。

沉默驱动蛋白KIF11影响caspase-1介导的细胞死亡方式

目的:探讨驱动蛋白家族成员11(KIF11)通过影响胱天蛋白酶1(caspase-1)介导的细胞死亡方式调控肿瘤发展的机制。方法:采用生物信息学分析KIF11在不同肿瘤中的表达及其与caspase-1和消皮素D(GSDMD)的相关性,以及对肿瘤患者生存预后的影响;构建受体相互作用蛋白激酶2(RIPK2)/GFP和caspase-1质粒,以及共转染的野生型、KIF11低表达和KIF11过表达的人肾透明细胞癌786-O细胞系,探讨KIF11在caspase-1介导细胞死亡中的作用;活细胞成像观察细胞形态变化;免疫组化测定肾癌和癌旁组织中KIF11的表达;Western blot测定细胞焦亡通路相关蛋白水平。结果:生物信息学分析结果显示,KIF11在大多数恶性肿瘤中高表达;免疫组化发现,KIF11在肾癌中的表达高于正常组织。同时,KIF11与肾透明细胞癌中caspase-1和GSDMD表达呈正相关。活细胞成像显示,野生型和KIF11过表达的细胞大量起泡,随后释放凋亡小体(绳珠状细胞凋亡结构)。相比之下,KIF11低表达的细胞变圆和肿胀,呈现细胞焦亡的典型特征,体积明显比野生型和KIF11过表达细胞大,细胞核和细胞质丢失,乳酸脱氢酶释放增加。同时,免疫荧光结果显示,caspase-1介导的细胞死亡有cleaved GSDMD表达。Western blot结果表明,转染RIPK2/caspase-1能够激活细胞焦亡通路,上调caspase-1 p20、GSDMD-NT和cleaved IL-1β蛋白水平。进一步通过PI和Hoechst染色,发现野生型细胞中91%的细胞凋亡,9%发生细胞焦亡;而在KIF11低表达细胞中,22%细胞发生凋亡,78%细胞发生焦亡。结论:KIF11作为一个致癌基因,在肿瘤组织中高表达;沉默KIF11可影响caspase-1介导的细胞死亡方式,以细胞焦亡为主。

颅脑创伤患者早期血清PDCD4 GDF11水平及其与病情和预后的关系

目的 探讨颅脑创伤患者血清程序性细胞死亡因子4(PDCD4)、生长分化因子11(GDF11)水平与患者病情、预后的关系。方法 选取112例2020年1月至2022年4月成飞医院收治的颅脑创伤患者为研究组,另选取110例同时期在成飞医院进行健康体检的志愿者为对照组。酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组研究对象血清PDCD4、GDF11水平。根据格拉斯哥昏迷指数(GCS)将研究组患者分为轻度组(48例),中度组(36例),重度组(28例)。治疗后随访3个月,根据格拉斯哥预后评分(GOS)将研究组患者分为预后不良组(42例),预后良好组(70例)。比较不同病情、不同预后患者血清PDCD4、GDF11水平。采用Pearson相关性分析研究组血清PDCD4水平与GDF11水平的相关性,Spearman相关性分析研究组患者血清PDCD4、GDF11水平与GCS、GOS评分的相关性。采用多因素logistic回归分析颅脑创伤患者预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清PDCD4、GDF11对颅脑创伤患者预后的预测价值。结果 研究组血清PDCD4、GDF11水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组患者血清PDCD4、GDF11水平均低于轻度组和中度组,差异有统计学意义(P<0.05),中度组患者血清PDCD4、GDF11水平均低于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清PDCD4、GDF11水平均低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,研究组血清PDCD4水平与GDF11水平呈正相关(P<0.05);Spearman相关性分析显示,研究组血清PDCD4、GDF11水平与GCS、GOS评分均呈正相关(P<0.05)。多因素logistic分析显示,脑疝影响是颅脑创伤预后的危险因素,GCS评分、PDCD4、GDF11是影响颅脑创伤预后的保护因素(P<0.05)。血清PDCD4、GDF11联合预测颅脑创伤患者预后的ROC曲线下面积(AUC)大于PDCD4单独预测的AUC(Z=1.993,P=0.046)及GDF11单独预测的AUC(Z=2.907,P=0.004)。结论 颅脑创伤患者血清PDCD4、GDF11表达下调与患者病情相关,两者联合对颅脑创伤患者的预后具有较高的预测价值。

苍术素调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对脑胶质瘤细胞铁死亡的影响

目的探讨苍术素调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对脑胶质瘤细胞铁死亡的影响及其机制。方法体外培养脑胶质瘤U251细胞,将U251细胞分为对照组、苍术素低剂量组(5 mol/L)、中剂量组(10 mol/L)、高剂量组(20 mol/L)、ML385组(Nrf2抑制剂1 mol/L)。MTT和Edu实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测亚铁离子(Fe^(2+))、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)水平;Western blot检测Ki-67、cleaved-caspase3、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达;建立脑胶质瘤裸鼠模型,观察肿瘤生长情况,检测肿瘤组织中Ki-67、cleaved-caspase3、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白水平。结果细胞实验结果显示,与对照组比较,苍术素低、中、高剂量组U251细胞Fe^(2+)、MDA、LDH、ROS水平、细胞凋亡率、cleaved-caspase3水平显著性升高,GSH水平、OD490(24 h、48 h)值和细胞增殖率、Ki-67、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与苍术素高剂量组比较,ML385组U251细胞各检测指标水平无统计学差异(P>0.05);裸鼠成瘤实验结果表明,与模型组比较,苍术素组和ML385组裸鼠肿瘤质量和肿瘤体积、裸鼠肿瘤组织中Ki-67、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平显著性降低,cleaved-caspase3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05);与苍术素组比较,ML385组裸鼠肿瘤质量、肿瘤体积、抑瘤率和各蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论苍术素可能通过抑制Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路促进脑胶质瘤细胞铁死亡。

AAVC-Ⅰ对人口腔鳞癌Tca8113细胞GRP78和Caspase-4基因表达的影响

目的:研究不同浓度的AAVC-Ⅰ对人口腔鳞癌Tca8113细胞GRP78、Caspase-4基因表达的影响。方法:设置正常对照组和AAVC-Ⅰ实验组,Trizol试剂提取各组总RNA,运用RT-PCR法扩增内参基因β-actin及目的基因GRP78、Caspase-4片段,Chemi Doc XRS凝胶成像系统观察电泳结果并采用Quantity One软件测定目的条带灰度值。结果:正常对照组、实验组均扩增出GRP78、Caspase-4目的条带,且随AAVC-Ⅰ浓度增大GRP78、Caspase-4表达增加。结论:高浓度AAVC-Ⅰ可上调GRP78、Caspase-4基因的表达,因此AAVC-Ⅰ可能诱导人口腔鳞癌Tca8113细胞发生了内质网应激。

铁死亡相关蛋白SLC7A11及GPX4在肾细胞癌中的表达及意义

目的:探讨SLC7A11及GPX4在肾细胞癌及正常肾组织中的表达差异,初步分析SLC7A11及GPX4的表达情况与肾癌预后之间的关系。方法:采用免疫组化方法检测SLC7A11及GPX4在肾癌及正常肾组织中的表达,同时分析SLC7A11及GPX4表达水平与肾癌患者临床病理参数的相关性。采用Spearman法分析SLC7A11及GPX4之间表达的相关性,利用Kaplan-Meier生存曲线及Cox回归方法分析SLC7A11,GPX4表达的高低及临床因素对肾癌患者预后产生的影响。结果:SLC7A11及GPX4在肾癌中为高表达,而在正常肾组织为低表达(P<0.05),SLC7A11及GPX4蛋白表达与肾癌大小、远处转移及临床分期密切相关,SLC7A11与GPX4之间呈正相关(r=0.583,P<0.01)。在肾癌组织中,SLC7A11,GPX4表达阳性的患者与阴性表达的患者相比预后较差(P<0.05)。多因素分析提示肾癌大小、远处转移、临床分期、SLC7A11及GPX4是影响肾癌预后的独立因素。结论:SLC7A11及GPX4在肾癌中高表达,可能参与了肾癌的发生,SLC7A11或GPX4高表达的肾癌患者预后不良,未来可能成为肾癌治疗新靶点。

丹参酮ⅡA诱导NB_4细胞凋亡时Caspase_3活性变化

目的 研究 Caspase3在丹参酮 A( Tan A)诱导 NB4细胞凋亡过程中的变化及与凋亡的关系。方法 通过细胞形态学、DNA含量分析及 DNA片段比率 ,证实 Tan A是否可诱导 NB4细胞凋亡 ,用荧光分光光度仪检测 Caspase3活性及 N -乙酰 -天冬氨酸 -谷氨酸 -颉氨酸 -天冬氨酸 - 7氨基 - 4甲基 -香豆素 ( AC- DEVD- AMC)行Caspase3抑制试验探讨细胞凋亡与 Caspase3间的关系。结果 Tan A可诱导 NB4细胞凋亡 ,并伴有 Caspase3活性增高。AC- DEVD-乙醛 ( AC- DEVD- CHO)可抑制 Tan A诱导 NB4细胞凋亡。结论 Tan A诱导 NB4细胞凋亡可通过激活

4A11铝合金热变形行为与热加工图

用热压缩模拟方法研究总压缩量为60%、变形温度为380~460℃、应变率为0.01~10 s^(-1)下4A11铝合金的流变特征和物理模型;建立了基于峰值应力的本构方程,构建了应变量为0.6时的热加工图。结果表明:压缩过程中真应力变化是加工硬化和动态软化协同作用的结果;变形温度为380~460℃、应变率为0.01~1 s^(-1)的区域为合金最佳工艺参数范围。

MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间位相移行

背景与目的:在细胞凋亡过程中,位于细胞浆中的Caspase-3酶原是由什么方式引起细胞形态序贯性变化的问题还没有完全阐明,本研究旨在探讨放射诱导的MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间分布、细胞形态的变化以及二者的关系。方法:10GyX射线照射诱导MOLT-4细胞。亚G1峰法和凝胶电泳检测凋亡细胞中DNA变化。膜联蛋白V标记细胞膜,带荧光素的Caspase抑制剂(fluorochromeinhibitorofcaspase,FLICA)标记活性Caspase,并用流式细胞仪检测。应用共聚焦显微镜观察MOLT-4细胞凋亡形态及活性Caspase-3在细胞内的分布。免疫印迹检测Caspase-3的表达。结果:X射线10Gy照射后,MOLT-4细胞出现细胞膜翻转、凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。其凋亡过程中Caspase-3激活,4h其活性明显增加。在细胞内,活性Caspase-3由靠近细胞膜的胞浆面向细胞浆、胞核移行,与细胞凋亡的形态学变化相吻合,在时间上早于细胞膜翻转。结论:X线照射后MOLT-4细胞中Caspase-3激活,且其亚细胞分布与细胞凋亡的形态学变化相吻合。活性Caspase-3在凋亡细胞中空间位相的移行是放射诱导的细胞凋亡机制之一。