顺铂对结肠癌细胞株Caco-2增殖凋亡和Bcl-2、Caspase3、Caspase9蛋白表达的影响

目的:探讨顺铂(顺式二氨二氯铂)(c i sdichlorodiamineplatinum,DDP)对人结肠癌Caco-2细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Caspase9、Caspase3表达的影响.方法:体外培养结肠癌Caco-2细胞;检测不同浓度DDP干预下MTT染色的A值,判定其对人结肠癌细胞恶性增殖的影响;不同浓度D D P对人结肠癌细胞凋亡的影响使用流式细胞仪进行检测,Western blot检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Bcl-2蛋白的表达;应用分光光度法检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Caspase9、Caspase3蛋白活性的影响.结果:(1)癌细胞增殖结果显示,在一定的作用时间范围内,Caco-2细胞存活率与DDP浓度呈负相关,具有剂量依赖性,其中4.000、2.000μg/m L干预的各组细胞抑制率最显著,差异均有统计学意义(P<0.05).而低剂量组0.250、0.125μg/m L及对照DMSO干预组细胞存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05),其细胞存活率明显高于其他各浓度组,差异有统计学意义(P<0.01);(2)流式细胞仪检测结果显示:DDP能诱导Caco-2细胞的凋亡,其诱导凋亡的效果呈时间和剂量性依赖;(3)Western blot检测结果显示:Bcl-2蛋白在结肠癌Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞72 h后,与对照组比较,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05).Caspase9、Caspase3在Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞48、72 h后,与对照组比较,Caspase9、Caspase3表达明显升高(P<0.01).结论:顺铂可以抑制Caco-2细胞增殖、诱导Caco-2细胞凋亡,其机制可能与活化Caco-2细胞中Caspase9、Caspase3蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关.

雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元caspase3和caspase9蛋白表达的影响

目的 :通过检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,探讨雷公藤内酯抑制神经元凋亡的机制。方法 :结晶紫染色观察海马神经元形态,免疫组化法检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平。结果 :结晶紫染色结果显示,海人酸组中,海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则。雷公藤内酯干预组中海马神经元的数量和形态与对照组相似,胞浆清晰淡染,核仁清楚。免疫组化染色显示,与对照组比较,海人酸组海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著增高(P<0.05);与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著减少(P<0.05)。结论 :雷公藤内酯可下调海人酸致痫大鼠海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,从而抑制神经元凋亡。

大肠侧向发育型肿瘤Bcl-2和Caspase9蛋白的表达研究

目的探讨大肠侧向发育型肿瘤Bcl-2和Caspase9的基因表达改变,及其与大肠腺癌的关系。方法应用免疫组化SP法测定大肠腺癌、大肠腺瘤、大肠侧向发育型肿瘤的Bcl-2和Caspase9的表达。结果正常粘膜中Bcl-2表面上皮表达阴性,在腺癌组明显低于腺瘤组和LST良性组(P<0.05),而LST良性组与腺瘤组相比没有统计学差别。正常粘膜中Caspase9广泛表达于胞浆中,在腺癌组明显低于腺瘤组和LST良性组(P<0.05),而LST良性组与腺瘤组相比没有统计学差别。结论 LST良性组与大肠腺瘤组在Bcl-2、Caspase9等基因的改变上没有统计学差异,同样是癌前病变,Caspase-9和bcl-2同样参与细胞凋亡的调节,在大肠肿瘤的恶变中发挥作用。

肺结节组织中Caspase 3和Caspase9蛋白表达在良恶性诊断及肺癌临床病理特征中的价值研究

目的探讨肺结节组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspastic acid-specific protease,Caspase)3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspastic acid-specific protease,Caspase)9蛋白表达在其良恶性诊断及肺癌临床病理特征中的价值研究。方法选择2018年1月~2020年7月在陕西省森工医院诊治的86例肺结节患者作为研究对象,并根据病理诊断结果分为良性结节46例(良性组)和恶性结节40例(恶性组)。然后采用免疫组织化学法检测两组患者肺结节组织中Caspase 3,Caspase 9蛋白表达情况,调查恶性肺结节的病理特征,并进一步分析Caspase 3和Caspase 9表达阳性率与病理特征的相关性。结果恶性组的Caspase 3和Caspase 9表达阳性率分别为70.0%和82.5%,显著高于对照组(13.0%,15.2%),差异均有统计学意义(χ^(2)=29.035,38.932,均P<0.001)。在恶性组中,不同组织学分化、淋巴结转移、临床分期患者的Caspase 3,Caspase 9表达阳性率对比差异有统计学意义(χ^(2)=5.614~15.920,均P<0.05)。Pearson相关性分析显示组织学分化、淋巴结转移、临床分期与Caspase 3,Caspase 9表达阳性率均呈显著正相关(r=0.591~0.762,均P<0.05)。结论肺结节组织中Caspase 3,Caspase 9蛋白呈现高表达状况,也与患者的病理特征存在相关性,因此其临床检测有利于肺结节良恶性的临床鉴别诊断。

Caspase-9和CMYC在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及与患者病理特征和预后的关系

目的探讨半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因(CMYC)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及其与患者病理特征和预后的关系。方法选取2017年2月至2020年2月周口市中心医院收治的60例DLBCL患者纳入研究,比较DLBCL肿瘤组织及病灶旁正常组织的Caspase-9、CMYC表达水平,分析Caspase-9、CMYC表达与临床病理特征的关系,比较预后良好和预后不良患者的临床病理特征、Caspase-9、CMYC表达水平,采用二元Logistic回归分析DLBCL患者预后不良的影响因素。结果DLBCL患者肿瘤组织中Caspase-9阳性率为43.33%,明显低于正常组织的80.56%,CMYC阳性率为36.67%,明显高于正常组织的13.88%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ann Arbor分期Ⅰ~Ⅱ期、国际预后指数(IPI)评分0~2分患者DLBCL肿瘤组织Caspase-9阳性率明显高于Ⅲ~Ⅳ期和3~4分患者,CMYC阳性率低于Ⅲ~Ⅳ期、3~4分患者,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良患者Ann Arbor分期中Ⅲ~Ⅳ期占比、IPI评分中3~4分占比、CMYC阳性表达占比分别为73.08%、65.38%、69.23%,均高于预后良好组的35.29%、32.35%、11.76%,Caspase-9阳性表达占比为23.08%,低于预后良好组的58.82%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ann Arbor分期、IPI评分、Caspase-9、CMYC均为影响DLBCL患者预后不良的独立影响因素(P<0.05),其中Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期预后不良风险是Ⅰ~Ⅱ期的9.008倍;IPI评分3~4分预后不良风险是0~2分的10.298倍;Caspase-9表达阳性预后不良风险是阴性的0.622倍;CMYC表达阳性预后不良风险是阴性的19.922倍。结论Caspase-9、CMYC异常表达参与DLBCL的进展,与肿瘤恶性程度有关,且Caspase-9、CMYC异常表达是DLBCL预后不良的独立影响因素,对DLBCL预后具有一定的预测价值,可作为预测DLBCL患者预后的参考指标。

电针对慢性疼痛抑郁共病大鼠海马组织Cyt-C、Caspase-9表达的影响

目的 观察电针“合谷”“太冲”对慢性疼痛抑郁共病(CPDC)大鼠海马组织细胞色素C(Cyt-C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,探讨电针治疗CPDC的可能机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组和电针组,每组15只。采用左后足足底2次注射完全弗氏佐剂复制CPDC模型。电针组于双侧“合谷”“太冲”行电针干预,20 min/次,药物组予10 mg/kg度洛西汀混悬液灌胃,连续14 d。分别于首次注射后7、14、21、28 d检测机械缩足阈值及热缩足潜伏期,14、28 d检测悬尾不动时间和糖水偏好率,尼氏染色观察海马神经元形态及尼氏体数量,Western blot、免疫组化检测海马组织Cyt-C、Caspase-9蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期减少(P<0.01),悬尾不动时间增加(P<0.01),糖水偏好率下降(P<0.01),海马神经元排列稀松,神经元受损、丢失,尼氏体数量减少(P<0.01),海马神经元细胞凋亡率升高(P<0.01),海马组织Cyt-C、Caspase-9表达及cleaved-Caspase-9/Caspase-9比值升高(P<0.01);与模型组比较,药物组和电针组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期增加(P<0.01),悬尾不动时间减少(P<0.01),糖水偏好率升高(P<0.01),海马神经元丢失减少,细胞排列较整齐,核仁清晰,尼氏体数量增加(P<0.01),海马神经元细胞凋亡率降低(P<0.01),海马组织Cyt-C、Caspase-9表达及cleaved-Caspase-9/Caspase-9比值降低(P<0.01)。结论 电针“合谷”“太冲”可减轻CPDC模型大鼠疼痛及抑郁行为,发挥神经保护作用,其机制可能与抑制海马组织Cyt-C、Caspase-9蛋白表达,抑制海马神经元凋亡有关。

外源性H2S对帕金森病模型小鼠神经保护作用及其对基质金属蛋白酶9和Caspase-1表达的影响

目的 探讨外源性硫化氢(H2S)对1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(MPTP)对诱导的帕金森病(PD)小鼠保护作用及其对基质金属蛋白酶9(MMP-9)和Caspase-1表达的影响。方法 将36只雄性昆明小鼠随机分为对照组(control)、PD组和PD+硫氢化钠(NaHS)组,每组12只。腹腔注射MPTP(30 mg/kg),每天1次,连续7 d诱导PD小鼠模型,PD+NaHS组于模型制作前30 min腹腔注射5.6 mg/kg NaHS(H2S供体),对照组给予等量生理盐水。采用震颤麻痹评分、悬挂实验评估小鼠行为学变化,HE染色观察各组小鼠中脑黑质(SN)神经元的形态学改变;免疫组织化学和Western blotting法检测各组中脑SN区酪氨酸羟化酶(TH)、MMP-9和Caspase-1蛋白表达。结果 与control组比较,PD组小鼠震颤麻痹评分增高(P<0.05),悬挂实验评分降低(P<0.05);光学显微镜下中脑SN区神经元数量明显减少,排列紊乱,部分神经元胞体固缩,胞质红染;SN区TH阳性细胞数及TH蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9与Caspase-1阳性细胞数及MMP-9与Caspase-1蛋白表达水平增加(P<0.05)。与PD组相比,PD+NaHS组小鼠震颤麻痹评分降低(P<0.05),悬挂实验评分增加(P<0.05),SN区神经元数量明显增多;SN区TH阳性细胞数及TH蛋白表达水平增加(P<0.05),MMP-9与Caspase-1阳性细胞数及MMP-9与Caspase-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 外源性H2S对PD小鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用,其机制可能与抑制MMP-9与Caspase-1介导的神经炎症反应有关。

乙型肝炎病毒感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9在不同病情阶段中临床表达意义

目的探究乙型肝炎患者不同阶段的外周血单个核细胞(PBMC)表面程序性死亡受体-1(PD-1)、半胱氨酸天冬氨酸酶-9(Caspase-9)水平,寻找其临床表达意义。方法选取湘潭市中心医院感染性疾病与肝病科2020年3月至2022年9月进行治疗的224例乙型肝炎患者,根据其病情阶段将所有患者分成乙型肝炎轻度组(n=83)、乙型肝炎中度组(n=76)和乙型肝炎重度组(n=65)。另取同期肝癌患者21例作为肝癌组,同期健康体检人员70例归入健康组。比较各组乙型肝炎患者肝功能指标,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平,统计分析不同病情阶段与PBMC表面PD-1、Caspase-9水平的关系以及其对于病情阶段的预测价值。结果乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌患者的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)都显著高于健康组,乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组AST、ALT依次升高,并且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌组患者PBMC表面PD-1、Caspase-9水平明显高于健康组(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组Caspase-9水平依次降低,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎重度组和肝癌组PBMC表面PD-1依次升高,各组差异有统计学意义(P<0.05);中度组PD-1和轻度组差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC表面PD-1与AST、ALT呈正相关,与HBV-DNA呈负相关,而Caspase-9水平与AST、ALT呈负相关,与HBV-DNA呈正相关,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平联合检测重度乙型肝炎发展为肝癌的AUC值为0.911,敏感度为90.31%,特异度为89.63%。结论乙型肝炎患者不同阶段的PBMC表面PD-1、Caspase-9水平有显著差异,且两者表达水平与肝功能指标存在相关性,进行PD-1、Caspase-9的联合检测可以对重度乙型肝炎发展为肝癌进行预测。

温针灸对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平的影响

目的 分析温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平的影响,探讨温针灸治疗KOA的可能作用机制。方法 将24只8周龄SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组与温针灸组,每组8只。模型组与温针灸组采用4%木瓜蛋白酶注射法建立KOA模型,空白组不做任何处理,当大鼠出现膝关节肿大,局部刺激有疼痛反应且Lequesne MG行为学评分≥3分时,提示造模成功。造模成功后温针灸组取双侧内膝眼、犊鼻穴,以毫针直刺,深度约5 mm,将艾段点燃放置于针柄末端,共灸2壮,留针20 min;空白组与模型组同等抓取固定20 min,1次/d,不做任何治疗。3组每周均干预6 d,休息1 d,共干预2周。干预后采用Lequesne MG行为学评分评估3组大鼠行为学表现,HE染色法及番红-固绿染色法观察3组大鼠膝关节软骨组织形态变化,Mankin’s评分评估3组大鼠软骨退变程度,TUNEL染色法观察3组大鼠膝关节软骨细胞凋亡率,qPCR检测3组大鼠膝关节软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平。结果 与空白组比较,模型组Lequesne MG行为学评分明显升高(P<0.05);HE染色结果显示膝关节软骨组织各层结构不清,表层出现缺损、裂隙,软骨细胞数量弥漫性增多或局部减少且软骨细胞排列紊乱;番红-固绿染色结果显示软骨基质番红染色不均,固绿染色范围增加,潮线不清;Mankin’s评分升高(P<0.05),膝关节软骨组织细胞凋亡率升高(P<0.05),Caspase-3mRNA转录水平无明显变化(P>0.05),Caspase-9 mRNA转录水平升高(P<0.05)。与模型组比较,温针灸组Lequesne MG行为学评分降低(P<0.05),HE染色结果显示膝关节软骨组织表层较为平整,软骨细胞数量弥漫性增多且排列不规则,但优于模型组;番红-固绿染色结果显示软骨基质番红染色未见明显异常,潮线清晰,Mankin’s评分下降(P<0.05),膝关节软骨细胞凋亡率下降(P<0.05),Caspase-3 mRNA转录水平降低不明显(P>0.05),Caspase-9 mRNA转录水平降低(P<0.05)。结论 温针灸能够有效保护膝关节功能,抑制膝关节软骨细胞的凋亡,延缓KOA软骨退变,其机制可能与调控凋亡因子Caspase-9 mRNA转录水平有关。

Caspase-9蛋白在亚慢性砷染毒大鼠睾丸间质细胞中的表达研究

[目的]探讨亚慢性砷染毒对大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达的影响。[方法]将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组以及低、中、高剂量染毒组,每组10只。采用自由饮水方式进行染毒,低、中、高剂量染毒组亚砷酸钠的染毒剂量分别为2.4、12、60 mg/L,对照组给予生理盐水,染毒试验持续14周。染毒试验结束后,检测大鼠外周血白细胞数量;采用ELISA法检测大鼠血清TNF-α及IL-1的浓度;利用透射电镜观察大鼠精子的超微结构;应用免疫组化法检测大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白的表达定位及表达水平。[结果]与对照组相比,中、高剂量染毒组大鼠血清中TNF-α、IL-1浓度及白细胞计数均显著(P<0.05)升高。透射电镜下,对照组精子顶体结构完整,厚度及染色均匀;低剂量染毒组可见精子胞膜肿胀,核染色质较均匀;中剂量染毒组精子顶体与核分离,胞膜肿胀;高剂量染毒组精子尾部中断,轴丝排列紊乱。免疫组化法分析表明,Caspase-9蛋白主要表达于睾丸间质细胞的细胞质,表达信号呈棕褐色;与对照组相比,各剂量染毒组大鼠睾丸组织内Caspase-9蛋白的表达水平均显著(P<0.05)升高。[结论]睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达水平升高可能是亚砷酸钠致雄性大鼠慢性生殖毒性的机制之一。

血清缺氧诱导因子-1α、内皮素-1及基质金属蛋白酶-9联合检测对颅内动脉瘤破裂出血142例手术预后的价值

目的探讨血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)联合预测颅内动脉瘤破裂出血术后预后不良的价值。方法选取2020年1月至2022年1月东台市人民医院收治的颅内动脉瘤破裂出血病人142例作为研究组,另选取同期健康体检者140例作为对照组,检测病人术前、入院1周(均为术后)、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平并进行比较。另依据病人出院6个月后预后情况,将其分为预后良好组(101例)和预后不良组(41例),对比预后良好组和预后不良组术前、入院1周、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平,分析颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的影响因素及血清HIF-1α、ET-1、MMP-9单项及联合检测对颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的预测价值。结果研究组术前血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于对照组(P<0.05);研究组随访6个月预后不良发生率为28.87%(41/142),血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平经重复测量方差分析差异有统计学意义(P<0.05),预后不良组入院1周、术后6个月血清HIF-1α(42.43±3.05)μg/L和(41.53±4.52)μg/L、ET-1(14.27±1.24)ng/L和(13.96±2.04)ng/L、MMP-9(15.57±1.81)μg/L和(14.68±2.65)μg/L均低于术前(51.19±4.38)μg/L、(16.50±1.45)ng/L、(18.26±2.29)μg/L;预后良好组入院1周、术后6个月血清HIF-1α(40.78±1.53)μg/L和(34.87±4.68)μg/L、ET-1(13.12±2.16)ng/L和(10.05±1.96)ng/L、MMP-9(14.87±1.20)μg/L和(12.21±2.87)μg/L均低于术前(47.82±4.13)μg/L、(14.89±2.75)ng/L、(17.41±1.21)μg/L;预后良好组术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均低于入院1周(P<0.05)。预后不良组术前、入院1周、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组多发动脉瘤、脑积水、Hunt-Hess分级Ⅳ~Ⅴ级、CT Fisher分级3~4级、手术时机为≥72 h、并发脑血管痉挛、并发脑梗死病人占比均高于预后良好组(P<0.05);Hunt-Hess分级Ⅳ~Ⅴ级、手术时机为≥72 h、术前及入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9高水平均是颅内动脉瘤破裂出血预后不良的危险因素(P<0.05);受试者操作特征曲线显示,术前及入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9三者联合预测颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的灵敏度(97.56%、95.12%)和曲线下面积(0.93、0.91)高于单独预测(P<0.05),特异度与单独评估比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论颅内动脉瘤破裂出血病人术前血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于健康人群,术前和入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9高水平均是术后预后不良的独立危险因素,且对颅内动脉瘤破裂出血术后预后不良具有一定预测价值,但三者联合预测价值更高。

解耦联蛋白2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及PKR/Caspase-11蛋白的影响

目的探究解耦连蛋白(UCP)2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-11蛋白的影响。方法按照数字随机法将80只大鼠分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型(CLP)组、单纯腺相关病毒(AAV)组、UCP2过表达手术(UCP2)组各20只。比较各组UCP2、PKR、Caspase-11蛋白表达、心肌组织病理学形态变化、心肌细胞凋亡指数、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与Sham组相比,CLP组、AAV组和UCP2组心肌组织中UCP2、Caspase-11、MDA表达明显升高,心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性明显减少(P<0.05);与CLP和AAV组相比,UCP2组心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性得到明显升高,Caspase-11蛋白MDA含量显著降低(P<0.05)。Sham组心肌仅有少数视野偶见个别凋亡细胞,CLP组和AAV组细胞的凋亡指数明显增加(P<0.05);与CLP组相比,UCP2组心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论过表达UCP2可抑制脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡,调控体内氧化应激平衡,同时对PKR/Caspase-11蛋白有一定的调控作用,增加PKR表达,抑制Caspase-11的表达。

动态动脉硬化指数联合血清肿瘤坏死因子受体相关因子6、前蛋白转化酶枯草溶菌素9对急性分水岭脑梗死病人的预后价值

目的探究动态动脉硬化指数(AASI)联合血清肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对急性分水岭脑梗死(CWI)病人的预后价值。方法选取2019年8月至2021年8月保定市第二中心医院收治的96例急性CWI病人为研究组,另取同期体检健康者80例为对照组。收集病人一般临床资料,并对研究组和对照组的血清TRAF6、PCSK9水平及AASI进行检测;根据研究组病人预后情况将其分为预后良好组(67例)和预后不良组(29例),多因素logistic回归分析急性CWI病人预后的影响因素;绘制AASI与血清TRAF6、PCSK9对急性CWI病人预后评估的受试者操作特征曲线(ROC曲线)。结果研究组血清TRAF6(1.48±0.34)µg/L、PCSK9(97.25±14.25)µg/L水平及AASI(0.56±0.15)高于对照组(0.87±0.19)µg/L、(82.78±9.17)µg/L、(0.36±0.11)(P<0.05)。预后良好组与预后不良组年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、空腹血糖、狭窄程度及血管斑块性质差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清TRAF6(1.77±0.37)µg/L、PCSK9(104.82±17.93)µg/L水平及AASI(0.62±0.12)高于预后良好组(1.35±0.21)µg/L、(93.97±12.65)µg/L、0.53±0.09(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示NIHSS评分、狭窄程度、血管斑块性质、AASI、血清TRAF6、PCSK9水平是急性CWI病人预后的影响因素(P<0.05)。AASI联合血清TRAF6、PCSK9预测急性CWI病人预后的AUC是0.92,灵敏度为93.10%,特异度为76.12%,Youden指数为0.69,优于AASI、TRAF6、PCSK9各自单独预测(P<0.05)。结论急性CWI病人血清TRAF6、PCSK9水平显著升高,联合AA-SI对病人的预后状况具有较高的预测效能,可为临床的合理干预和改善病人预后提供依据。

复脉益心方辅助治疗风湿性心脏瓣膜病患者的临床疗效及对其心功能、基质金属蛋白酶-9、N末端前体脑利钠肽水平的影响

目的 探讨复脉益心方辅助治疗风湿性心脏瓣膜病患者的疗效及对其心功能、血清基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloprotein-9,MMP-9)水平、N末端前体脑利钠肽(N-terminal precursor brain natriuretic peptide,NT-pro BNP)水平的影响。方法 选取2021年2月—2022年2月期间湖南中医药大学第一附属医院收治的风湿性心脏瓣膜病患者88例作为研究对象。采用随机数字表法将患者分为对照组和观察组,每组各44例。两组患者均接受二尖瓣置换术治疗,术后根据病情给予西医常规治疗,观察组术后在常规西医治疗基础上联合复脉益心方治疗。治疗4周后,观察比较两组患者临床疗效、安全性,治疗前后中医证候积分,MMP-9、NT-pro BNP水平、心功能指标(每分钟心输出量、每搏输出量、心脏指数、左心室射血分数)、生活质量评分(社会限制、体力限制、症状、情绪)变化情况。结果 治疗后两组患者心悸、疲乏、气短、盗汗或自汗、心烦、失眠多梦评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组心悸、疲乏、气短、盗汗或自汗、心烦、失眠多梦评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清MMP-9和NT-pro BNP水平均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组血清MMP-9和NT-pro BNP水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者每分钟心输出量、每搏输出量、心脏指数及左心室射血分数指标均较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组每分钟心输出量、每搏输出量、心脏指数及左心室射血分数指标均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者社会限制、体力限制、症状及情绪评分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组社会限制、体力限制、症状及情绪评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组总有效率95.45%(42/44)明显高于对照组79.55%(35/44),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者肝肾功能、血常规均未发生异常,术后也未出现明显用药不良反应。结论 复脉益心方辅助二尖瓣置换术治疗风湿性心脏瓣膜病,能够降低MMP-9、NT-proBNP水平,有助于改善患者心功能,保护心肌,快速缓解患者临床症状,提高生活质量。

电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C及凋亡蛋白酶激活因子-1表达的影响

目的观察电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能及脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)及凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)表达的影响。方法雌性Sprague-Dawley大鼠60只,随机抽取36只,采用改良T_(10)脊髓横断法制作完全性脊髓损伤后神经源性膀胱模型,取24只成功模型分为模型组和电针组各12只,其余未造模大鼠24只随机分为假手术组和空白组各12只。于造模后第19天取次髎、中极、三阴交、大椎行电针,连续7 d后行尿流动力学检测,TUNEL法测定细胞凋亡率,Western blotting测定脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白的表达情况。结果与空白组和假手术组比较,模型组和电针组膀胱最大容量及膀胱顺应性均明显降低(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力增加(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率显著升高(P<0.001);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组的膀胱最大容量及膀胱顺应性明显增加(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力降低(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C及Apaf-1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论电针次髎、中极、三阴交、大椎可改善完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能,其作用机制可能与脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1的表达下调,凋亡减少有关。

针康法对脑缺血大鼠缺血半暗区细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白和cleaved-caspase-9蛋白表达的影响

目的观察针康法对脑缺血大鼠缺血半暗区细胞凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和cleaved-caspase-9蛋白表达的影响。方法选取180只雄性Sprague-Dawley大鼠,通过随机数字表法随机分为假手术组、模型组、针刺组、康复组和针康组。每组再分为3 d、7 d和14 d三个亚组(n=12)。采用改良Longa线栓法进行造模,假手术组和模型组不予治疗,针刺组进行头穴丛刺治疗,康复组进行跑台康复训练,针康组进行针康法治疗。术后各时间点对大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS)后取材,采用TUNEL染色观察大鼠脑缺血半暗区细胞凋亡率,Western blotting检测脑缺血半暗区XIAP和cleaved-caspase-9蛋白表达。结果术后各时间点,与模型组比较,各治疗组mNSS评分均降低(P<0.05),细胞凋亡率均降低(P<0.05),XIAP蛋白表达上调(P<0.05),cleaved-caspase-9蛋白表达下调(P<0.05);与针刺组、康复组比较,针康组细胞凋亡率进一步降低(P<0.05),XIAP蛋白表达进一步上调(P<0.05)。术后7 d、14 d,针康组mNSS评分进一步降低(P<0.05),针康组cleaved-caspase-9蛋白表达进一步下调(P<0.05)。结论针康法能降低脑缺血大鼠神经功能缺损,优于单独的头穴丛刺和康复训练,其机制可能与促进XIAP蛋白表达,抑制caspase-9蛋白活化,从而减少细胞凋亡有关。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9参与Caspase-3活化的生物信息学分析

目的研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9促凋亡的作用是否与活化凋亡通路Caspase-3相关。方法用80mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育人脐静脉内皮细胞24h,同时设空白对照组、转染试剂组、阴性对照组和80nmol/L前蛋白转化酶枯草溶菌素9siRNA+80mg/L氧化型低密度脂蛋白组,流式细胞术测定细胞凋亡率,免疫印迹法和酶联免疫吸附法分别检测Caspase-3的表达及活性。然后通过生物信息学方法对前蛋白转化酶枯草溶菌素9与Caspase-8和Caspase-9进行比较,找出它们之间的序列相似程度,以及是否存在共同的功能结构域。结果前蛋白转化酶枯草溶菌素9siRNA能抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的Caspase-3蛋白表达和活性增加。生物信息学分析表明,前蛋白转化酶枯草溶菌素9、Caspase-8、Caspase-9三者的序列同源性高达22.14%,三者在C端的二级结构十分接近,特别是前蛋白转化酶枯草溶菌素9和Caspase-9的螺旋、片层、转角、无规则卷曲含量十分接近,三级结构分析发现前蛋白转化酶枯草溶菌素9和Caspase-9的外观轮廓相近,且在腹部中央都有一个裂口,显示前蛋白转化酶枯草溶菌素9和Caspase-9可能具有相同的酶切活性。结论前蛋白转化酶枯草溶菌素9具有与Caspase-9相似的功能结构域,可能具有激活Caspase-3的功能。

circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究环状RNA MYO9A_006(circMYO9A_006)对心肌细胞肥大表型的调控作用及可能机制。方法:利用腺病毒介导在乳小鼠心室肌细胞(NMVCs)中过表达circMYO9A_006,并以腺病毒介导过表达同样带有绿色荧光蛋白标签的空载体为对照,检测NMVCs中心肌肥大相关蛋白β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)和心房钠尿肽(ANP)的表达。建立去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心室肌细胞(NRVCs)肥大模型,通过鬼笔环肽染色检测过表达circMYO9A_006对NRVCs表面积的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circMYO9A_006包含的潜在内部核糖体进入位点(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa及其在细胞内分布情况。分别制备circMYO9A_006-ORF(直接表达MYO9A-208aa)和circMYO9A_006-ATG-mut(不能表达MYO9A-208aa)重组病毒,以空载体病毒和circMYO9A_006重组病毒分别感染NRVCs,检测circMYO9A_006翻译蛋白MYO9A-208aa对心肌细胞肥大表型的特异调节作用。结果:利用腺病毒可在NMVCs中有效介导circMYO9A_006过表达。过表达circMYO9A_006可显著抑制NMVCs中心肌肥大相关蛋白的表达(P<0.01),并显著抑制PE诱导的NRVCs中心肌肥大相关蛋白的表达和细胞表面积的增加(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果提示,circMYO9A_006包含的2个IRES均具有活性。Western blot检测结果显示,在NRVCs中过表达circMYO9A_006可翻译预期大小为28 kD的MYO9A-208aa蛋白,并主要分布于细胞质中。过表达MYO9A-208aa和circMYO9A_006可一致地抑制NRVCs心肌肥大相关蛋白表达(P<0.01),并可逆转PE诱导的NRVCs肥大反应(P<0.05);而过表达circMYO9A_006-ATG-mut没有抑制NRVCs肥大的作用。结论:circMYO9A_006通过翻译蛋白MYO9A-208aa发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

针刺对脑缺血大鼠海马区凋亡细胞及Caspase-9蛋白表达的影响

目的观察针刺对脑缺血损伤大鼠大脑海马区凋亡细胞及Caspase-9蛋白表达的影响,探讨针刺对脑缺血损伤的神经保护机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组,每组10只,采用化学刺激诱导血栓性闭塞大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型。针刺"百会"、"水沟",每日1次,治疗7 d。应用苏木素-伊红染色(HE)及免疫组化方法观察针刺前后大鼠缺血区凋亡细胞及海马区Caspase-9蛋白表达的变化。结果大鼠局灶性脑缺血后Caspase-9表达增加,针刺对脑缺血损伤大鼠Caspase-9的过度表达有明显抑制作用。HE染色显示,缺血灶内大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,针刺治疗后变性坏死细胞明显减少。结论针刺可减轻Caspase-9的过度表达,改善脑缺血状态,从而减轻脑损害程度,这可能是针刺减轻脑缺血损伤的机制之一。

生长激素释放肽6对心衰模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号通路蛋白表达的影响

目的研究生长激素释放肽(GHRP)-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路蛋白表达的影响及保护作用机制。方法清洁级SD大鼠100只随机分为正常对照(A)组、假手术(B)组、模型(C)组和GHRP-6治疗(E)组。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心力衰竭模型,免疫组化法(SABC)检测各组左心室心肌细胞PI3K p110α、Akt p-Ser308和Caspase-9的表达情况。结果 C组左心室心肌细胞中PI3K p110α和Akt p-Thr308阳性表达量较A组、B组显著降低(P<0.05),D组较C组显著升高(P<0.05);C组Caspase-9阳性表达量较A组、B组显著增加(P<0.05),D组较C组显著降低(P<0.05)。结论 GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9信号转导途径来发挥其保护心肌的作用。