二甲双胍与三氧化二砷对KG1a细胞增殖的抑制作用

目的:探讨二甲双胍协同三氧化二砷对急性髓系白血病KG1a细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用CCK-8法检测二甲双胍、三氧化二砷以及联合应用对KG1a细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测应用二甲双胍协同三氧化二砷对KG1a细胞凋亡的影响;Western blot检测胞内凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果:二甲双胍与三氧化二砷联合及单独应用均可抑制KG1a细胞增殖,诱导KG1a细胞凋亡,联合用药组增殖抑制率及凋亡率高于单独用药组(P<0.05)。联合用药诱导KG1a细胞中Caspase 8和P62蛋白表达上调且高于单药组(P<0.05)。结论:二甲双胍能协同三氧化二砷杀伤KG1a细胞,其作用机制可能与诱导凋亡和增强自噬有关。

雷公藤红素通过调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡

目的探究雷公藤红素(tripterine,TRI)抑制肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)进展的新机制。方法利用不同浓度(0、0.5、2和8μmol·L-1)TRI作用于肝癌细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆、Transwell和蛋白免疫印迹等实验方法评估细胞表型和可能机制;再利用siRNA将靶基因GSDME进行干扰,确定GSDME的作用;最后使用移植肿瘤模型验证TRI在体内抑制HCC细胞的生长的机制。结果TRI可抑制HCC细胞增殖、克隆和侵袭,促进细胞焦亡。免疫印迹结果显示,TRI处理后肝细胞癌HepG2或Hepa1-6中GSDME表达均上调,同时cleaved caspase-3和PARP也明显升高。敲除GSDME后可部分逆转TRI诱导的细胞焦亡。同时GSDME敲低后的细胞具有更强的克隆和迁移能力,且与单独的TRI治疗组相比,细胞凋亡率降低。在体内实验中,TRI抑制可HCC肿瘤生长,TRI+siGSDME组小鼠肿瘤生长速度比单独TRI治疗组快。此外,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中p-eIF2a、ATF4均升高。免疫荧光结果显示,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中ATF4阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论TRI抑制肝癌细胞生长和侵袭可能与其调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡有关。

桑叶多糖结构鉴定及其降血糖活性研究

目的阐明桑叶中具有降血糖活性的多糖结构基础,为桑叶的开发和利用提供理论基础。方法采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖,经离子交换色谱和凝胶渗透色谱分离纯化获得SY02、SY02-3、SY02-3A及SY02-3B等多糖组分,并测定均一多糖的理化性质;联合单糖组成分析、糖残基连接方式分析和核磁分析对桑叶多糖进行结构鉴定;采用棕榈酸(Palimitate,PA)诱导INS-1细胞凋亡模型、Caspase3/7活性试剂盒测定桑叶多糖对INS-1E细胞凋亡的保护作用,并运用Western blot法检测桑叶多糖对INS-1E细胞凋亡关键蛋白Cleaved Caspase 3表达的影响。结果采用水提醇沉法获得桑叶粗多糖SY,经离子交换树脂柱分离再由凝胶柱纯化得到SY02-3,再次纯化后得到均一酸性多糖SY02-3A与蛋白多糖SY02-3B,两者分子量分别为3.7×10^(4)Da和1.03×10^(4)Da。单糖组成分析结果表明SY02-3A含有鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖,摩尔比分别为23.97:33.85:11.73:5.04:25.41,得率为0.32%;SY02-3B由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖与阿拉伯糖组成,其摩尔比19.83:10.34:45.42:9.01:2.23:13.17,得率为2.00%;SY02-3B含有14种氨基酸,其中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸含量相对较高。生物活性研究表明SY02-3可以保护PA诱导的INS-1E细胞凋亡,这种作用可能与降低Caspase 3活性和下调cleaved Caspase3蛋白表达有关。结论桑叶中含有酸性肽聚糖(SY02-3A)和蛋白聚糖(SY02-3B)的桑叶多糖SY02-3具有抑制PA诱导的INS-1E细胞凋亡的作用。

苍耳子散调控cGAS-STINS信号通路增强机体免疫抗过敏性鼻炎作用研究

目的探究苍耳子散抗过敏性鼻炎的作用机制。方法200例患者依据随机数字法分为对照组和治疗组两组,每组100例。治疗组采用经典护理疗法鼻腔填塞苍耳子散,对照组给药糠酸莫米松鼻喷雾剂喷鼻,两组疗程均28 d。观察两组治疗前后临床疗效、鼻部分类及症状视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者鼻分泌物及血清中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)相关因子的表达水平;采用荧光定量PCR检测Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11、Caspase-12、环状GMP-AMP合成酶(cGAS)、解旋酶41(DDX41)、干扰素诱导蛋白16(IFI16)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素基因激活蛋白(STING)表达水平。结果治疗后,治疗组与对照组相比,鼻分泌物中IFN-γ分泌水平降低;鼻分泌物中Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11和Caspase-12、cGAS、DDX41、IFI16、STING表达水平降低;在实验执行期间两组均未发现明显不良反应。结论苍耳子散可通过调控cGAS-STINS信号通路增强机体免疫治疗过敏性鼻炎。

Caspase家族与失神经支配骨骼肌萎缩的研究进展

Caspase家族是含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶的简称,根据主要作用分类可分为炎症Caspases和凋亡Caspases。在失神经支配骨骼肌萎缩中Caspases已被证实通过多种途径促进肌细胞凋亡。近年来有研究发现失神经支配肌细胞萎缩中Caspase-1所主导的细胞焦亡途径被激活,这是既往研究未提及的新的探索方向。现对Caspase家族在失神经支配骨骼肌萎缩中的作用进行概述。

凋亡通路及caspases在阿尔茨海默病中作为治疗靶点的研究

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种神经退行性疾病。根据近年来的研究,AD的可能致病因素主要是由tau、APP以及Aβ引起神经元退化以及神经细胞凋亡。tau经caspases切割后会发生聚集,进而发生神经纤维缠结使神经元退化及死亡。细胞凋亡途径都需要caspases的活化,并且是凋亡的启动者、执行者。APP经β-、γ-分泌酶作用产生sAPPβ、Aβ_(40/42),其中Aβ_(42)经DR4/5激活下游凋亡信号以及经caspase切割形成的C31片段,可促进细胞凋亡。sAPPβ水解后产生的N-APP可经DR6促进神经元的异常发展,但水解位点及机制并不清楚。其中,caspase可以通过作用于γ-分泌酶激活蛋白调节Aβ_(40/42)以及C31的生成,进而影响AD的发生。目前关于AD的治疗还没有针对caspase的药物。在这篇综述中,我们就神经细胞凋亡机制及其通路中caspases在AD发生过程中的相关作用进行阐明,为药物研发以及临床治疗提供一些可能的治疗靶点。

模拟微重力环境下细胞焦亡调控成骨细胞功能的研究

目的探讨焦亡在模拟微重力环境下成骨细胞中的作用,研究焦亡对成骨细胞功能的影响。方法旋转细胞培养系统建立模拟微重力环境,采用CCK-8检测MC3T3-E1成骨细胞增殖水平,LDH检测细胞坏死率,ALP、茜素红染色检测成骨细胞分化、矿化水平,荧光Hoechst/PI双染、扫描电镜检测焦亡情况,caspase-1试剂盒检测caspase-1活性,q PCR、Western blot检测NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18以及OCN、COL-I的表达水平。确认焦亡发生后,分别加入MCC950和VX-765抑制剂检测焦亡水平以及成骨分化情况。结果模拟微重力环境下成骨细胞PI荧光明显增强,膜孔明显增多,细胞增殖减少,LDH释放增加,NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达水平升高,caspase-1活性。MCC950和VX-765可以明显降低焦亡水平,caspase-1活性明显降低,焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18均有不同程度降低,OCN、COL-I表达水平明显升高。结论模拟微重力环境下成骨细胞发生焦亡,成骨分化功能发生改变,焦亡可以调控成骨细胞功能参与其力学响应的进程,其具体机制还需进一步研究。

Caspases与细胞凋亡(综述)

Caspases是一组天门冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶。Caspases在凋亡信号作用下发生逐级水解活化 ,最后裂解细胞的结构蛋白和功能蛋白 ,使细胞分解引起凋亡 ,故Caspases的活化是导致凋亡的中心环节。本文阐述了Caspase家族的一般特性及其在凋亡中的作用 ,Caspases与凋亡调控基因蛋白的相互关系及Caspases在凋亡相关疾病防治中的应用前景。

Caspases抑制剂的研究进展

目前证明Caspases蛋白酶家族在细胞凋亡的过程中起关键作用,因此也就成为药物发现的潜在靶点。Caspases抑制剂被认为是治疗细胞过度凋亡引起的相关疾病的有效手段。本文着重介绍了近些年来发展的Caspases抑制剂,特别是那些处于临床或接近临床阶段的候选药物。

长春胺衍生物Vin24通过Bcl-2/Bax/Caspase3通路改善糖尿病小鼠周围神经病变研究

目的探讨长春胺衍生物Vin24对糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠病理症状的保护作用及其作用机制。方法40只8周龄雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、长春胺给药组和Vin24给药组。除对照组外,其余3组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,150 mg·kg^(-1))诱导1型糖尿病模型,6周后开始给药。30只18周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、长春胺给药组和Vin24给药组,10只同窝阴性小鼠作为对照组。给药组每天灌胃长春胺(30 mg·kg^(-1))或Vin24(46.8 mg·kg^(-1)),对照组和模型组每天灌胃等体积的生理盐水,持续4周。通过检测机械异位痛觉和热痛觉阈值来评价小鼠感觉功能。利用激光散斑成像仪检测小鼠外周血流量。取足垫表皮组织进行PGP9.5免疫荧光染色评价表皮内神经纤维(IENF)密度;提取原代背根底神经节(DRG)神经元进行β-tubulinⅢ免疫荧光染色评价DRG神经元突起生长情况。此外,取DRG组织进行ATF3免疫荧光染色以及Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3和Caspase3的蛋白水平来评价DRG神经元凋亡水平。结果与模型组相比,Vin24给药组小鼠的机械异位痛和热痛觉阈值降低(P<0.01,P<0.001),外周血流量增加(P<0.001);IENF密度增加(P<0.05,P<0.01),DRG神经元突起生长得到改善(P<0.001)。荧光染色结果显示,Vin24给药后小鼠DRG组织中神经元凋亡标记物ATF3的表达减少(P<0.01,P<0.001)。Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平显著增加(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和Cleaved-Caspase3的蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论长春胺衍生物Vin24通过调控Bcl-2/Bax/Caspase3通路,抑制Cleaved-Caspase3的激活,降低神经元的凋亡水平,从而减轻DRG神经元损伤,改善糖尿病小鼠周围神经病变。

基于网络药理学及实验验证探讨仙茅对非小细胞肺癌顺铂增敏作用机制

目的:探讨中药仙茅对肺癌细胞顺铂化疗的增敏作用机制。方法:运用网络药理学和分子对接技术筛选仙茅对非小细胞肺癌的主要凋亡蛋白;CCK-8法检测细胞增殖率;蛋白印迹法检测仙茅、顺铂单用及联用后肺癌细胞(A549)中Caspase3和Caspase9蛋白表达量;流式细胞术检测细胞总凋亡率;细胞划痕和细胞侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:100~1500μg/mL剂量浓度的仙茅水提液对A549细胞增殖率无明显抑制作用,联用组较顺铂单用组对A549细胞的抑制作用显著增强;与对照组相比,仙茅组、联用组Caspase3和Caspase9蛋白表达量、细胞总凋亡率以及细胞迁移侵袭抑制率显著升高,顺铂组Caspase3、Caspase9蛋白表达量、细胞总凋亡率显著升高;与顺铂单用组相比,仙茅组、仙茅联用顺铂组Caspase3和Caspase9蛋白表达、细胞总凋亡率以及细胞迁移侵袭抑制率显著升高。结论:仙茅、顺铂、仙茅联用顺铂可以诱导A549细胞凋亡,与仙茅联用增强了顺铂对A549细胞凋亡的诱导作用,其作用机制与凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9有关。同时,联用仙茅后顺铂对A549细胞增殖率及迁移侵袭能力的抑制作用也更加显著。

Caspases家族在妇科疾病中的研究进展

Caspases家族是一类促凋亡蛋白,代表着一类细胞内的蛋白酶系统,在凋亡各个阶段发挥重要作用。细胞凋亡的发生是一个复杂caspase家族引导的蛋白酶级联反应过程,不同的细胞或不同信号转导途径诱发的凋亡过程中参与的caspase有所不同,其中caspase-3是凋亡的执行者,caspase-9在线粒体凋亡过程中发挥重要作用。现就其结构、机制,在妇科疾病中的表达及基因治疗等方面进行阐述,为妇科疾病的诊断治疗开辟新的途径。

Caspases与细胞凋亡

Caspases是一类蛋白裂解酶,在细胞内以无活性的酶原形式存在。Caspases具有半胱氨酸激活位点和底物裂解位点,当作用于胞内特异性底物后将引起细胞凋亡。Caspases的底物特异性由其裂解位点N-端的4个氨基酸残基决定,其底物裂解部位通常位于靶蛋白质一级结构中Asp残基后,数目由一个到多个不等。Caspase酶系作为细胞凋亡的中枢效应器,在细胞凋亡的启动及进程中发挥着极为重要的作用。无活性的caspases酶原主要通过上游caspseses加工机制、邻近诱导机制或偶联调节亚基机制三种方式被激活而引发细胞凋亡。细胞凋亡是细胞生命活动的基本特征之一。本文就引起凋亡的酶系和细胞凋亡的生化机理加以综述。

Caspases在TRAIL诱导MG-63骨肉瘤细胞株凋亡中的作用

目的 :初步观察并探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TNF relatedapoptosis inducinglig and ,TRAIL)蛋白诱导MG 6 3骨肉瘤细胞凋亡的作用机制。方法 :用RT PCR检测TRAIL受体在MG 6 3骨肉瘤细胞上的表达 ;用MTT试验检测TRAIL对MG 6 3细胞的抑制率及加入Caspase抑制剂后TRAIL对MG 6 3骨肉瘤细胞株抑制率的变化。初步分析TRAIL诱导MG 6 3骨肉瘤细胞株凋亡的作用机理。结果 :当TRAIL单独作用于MG 6 3骨肉瘤细胞株时 ,可产生明显的抑制效果 ;而当TRAIL分别加入广谱的Caspase抑制剂zVAD FMK、Caspase 8的抑制剂zIETD FMK、Caspase 3的抑制剂zDEVD FMK与细胞株MG 6 3共同孵育时 ,TRAIL的抑制作用均被阻断。结论 :TRAIL可能是通过与细胞膜表面的死亡受体结合 ,然后激发细胞内Caspase级联反应从而诱导肿瘤细胞凋亡的。

宰后细胞死亡方式和Caspases活化对肉品品质的潜在影响综述

近5年来,凋亡及相关水解酶已成为肉品科学的研究热点,caspase酶系统对细胞骨架蛋白的降解已逐渐为人们所认识,然而,其活化过程及影响因素尚缺乏深入研究。本文对潜在影响caspases活化的宰后细胞内环境变化进行了初步分析;对肉品领域关于肌细胞凋亡及caspases活化的研究进行了概述;对医学上关于caspase介导降解的细胞蛋白进行了介绍;最后,对目前肉品品质变化机制研究提出了几点思考。

芪麦益心颗粒对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探究芪麦益心颗粒对左冠状动脉前降支结扎导致急性心肌缺血大鼠心功能及心肌组织凋亡的影响,并为其临床应用提供依据。方法:将Wistar大鼠随机分成对照组、模型组、芪麦益心颗粒组、单硝酸异山梨酯组。对照组、模型组给予蒸馏水灌胃,芪麦益心颗粒组2.43 g/(kg·d)生药灌胃、单硝酸异山梨酯组1 mg/(kg·d)生药灌胃。除对照组外,其余各组大鼠均以左冠状动脉前降支结扎法造模,观察大鼠血清CPK、LDH浓度,RT-PCR检测心肌TNFα、Fas mRNA,Western Blot检测心肌Fas、Caspase3表达水平。结果:芪麦益心颗粒可以降低血CPK、LDH浓度,下调TNFα、Fas转录水平的表达,下调Fas、Caspase3蛋白水平的表达。结论:芪麦益心颗粒对急性心肌缺血大鼠心肌具有保护作用,其作用机制可能与下调死亡途径的受体和配体从而拮抗心肌组织的凋亡有关。

Caspases与蛋白激酶在凋亡中的相互作用

细胞内错综复杂的蛋白激酶网络与Caspases网络均与细胞存活以及凋亡密切相关。凋亡过程中Caspases级联反应受到多种信号通路的调节,其中蛋白激酶可以磷酸化Caspases及其底物,进而影响其活性。而蛋白激酶又常常为Caspases的底物,Caspases介导的蛋白激酶裂解可改变下游信号,从而产生生物学效应。另外,多种蛋白激酶通过磷酸化Caspases底物,保护底物蛋白免于Caspases裂解,因此,蛋白激酶可以作为分子治疗的靶点。本文将对Caspases与蛋白激酶在凋亡中的相互作用研究进展作一综述。

基于Caspase3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制

目的 基于胱天蛋白酶(Caspase)3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制。方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、乙酰半胱氨酸颗粒(富露施,C)组、余甘子叶提取物(D)组、Caspase3抑制剂(Z-DEVD-FMK,E)组、余甘子叶提取物+Caspase3抑制剂(F)组,每组10只,对B、C、D、E、F组采用香烟发生器+脂多糖法建立慢阻肺模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组灌胃50 g/kg富露施,D组灌胃50 mg/kg余甘子叶提取物,E组灌胃10μg/kg Z-DEVD-FMK,F组给予余甘子叶提取物联合Z-DEVD-FMK,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,无创肺功能仪检测气道高反应,干湿重法测定肺体脂数(LBF)、肺含水量(LWC),苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,免疫组化法检测肺组织中Caspase3蛋白表达。结果 与A组比较,B组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达显著升高(P<0.05),肺组织病理形态遭到破坏;与B组比较,C、D、E、F组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达明显降低(P<0.05),肺组织病理形态明显改善,且D组较C组变化更显著(P<0.05),E组与D组相比无明显差异(P>0.05),F组较E组变化显著(P<0.05)。结论 余甘子叶提取物可有效改善慢阻肺大鼠气道高反应及肺泡上皮细胞活性,其作用机制可能与抑制Caspase3表达有关。

甲胎蛋白与Caspases3在Huh7肝癌细胞中共表达的意义

目的:确定Caspases3与甲胎蛋白(AFP)共表达于Huh7细胞中,为肝癌的治疗提供新思路。方法:取对数期Huh7肝癌细胞,提取总RNA,经反转录成cDNA,经PCR扩增,并行琼脂糖电泳检查、照相。结果:Caspases3与AFP共表达于Huh 7肝癌细胞中。结论:其于此理论提出了治疗肝癌的新思路。