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重组体pET-28a-C12O/E.coli降解菲的功能研究
1
作者 王超 邓爽 +5 位作者 李丽阳 曹迪 侯喜林 余丽芸 毛立丰 沈江川 《绿色科技》 2024年第16期266-272,280,共8页
多环芳烃污染在石油及页岩油开采过程中不可避免,以多环芳烃菲作为标准降解底物,利用实验室初期从大庆石油采油三厂中分离得到的石油降解菌HL-1(Acinetobacter calcoaceticus)。以菌株HL-1为模板,通过PCR扩增的方法得到邻苯二酚1,2双加... 多环芳烃污染在石油及页岩油开采过程中不可避免,以多环芳烃菲作为标准降解底物,利用实验室初期从大庆石油采油三厂中分离得到的石油降解菌HL-1(Acinetobacter calcoaceticus)。以菌株HL-1为模板,通过PCR扩增的方法得到邻苯二酚1,2双加氧酶(C12O)。将C12O通过连接到表达载体pET-28a,在E.coli BL21中得到成功表达。在温度为30℃、摇床转速恒定在150 r/min,培养的初始pH值为7.0,菲浓度为2000 mg/L的高浓度下,经过7 d的降解,其降解率为15.9%。因此,通过基因工程技术在应对多环芳烃的污染方面有着较好的应用前景。 展开更多
关键词 多环芳烃 BL21 邻苯二酚1 2双加氧酶
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Characterization of catechol 1,2-dioxygenase from cell extracts of Sphingomonas xenophaga QYY
2
作者 M.Salah Uddin 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2009年第5期615-620,共6页
Sphingomonas xenophaga QYY, capable of growing significantly on more than ten kinds of aromatic compounds as sole carbon source, was used to study characterization of catechol 1,2-dioxygenase (C12O) in cell extracts. ... Sphingomonas xenophaga QYY, capable of growing significantly on more than ten kinds of aromatic compounds as sole carbon source, was used to study characterization of catechol 1,2-dioxygenase (C12O) in cell extracts. Characterization of the crude C12O showed that the maximum activity was obtained at 40–70°C and pH 7.8–8.8. Metal ions had different influences on the activity of crude C12O. It was suggested that strain QYY possessed an inducible and ferric-dependent C12O. Kinetic studies showed that the value of V max and K m was 0.25 μmol catechol/L/mg protein/min and 52.85 μmol/L, respectively. In addition, the partial purification of C12O was achieved by a HiTrap Q Sepharose column chromatography. 展开更多
关键词 catechol 1 2-dioxygenase CELL EXTRACTS CHARACTERIZATION SPHINGOMONAS xenophaga
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Subcloning and high level expression of xylE gene coding for the catechol 2, 3 dioxygenase in E. coli
3
作者 蔡在龙 王学敏 +4 位作者 毛积芳 季朝能 董海 沈仁权 毛裕民 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1997年第3期181-184,共4页
To construct a high-level expression of xylE gene in E. coli for quick detection of environmental pollution of aromatic compounds. Methods and Results: XylE gene coding for the catechol 2, 3 dioxygenase (CatO2ase ) wa... To construct a high-level expression of xylE gene in E. coli for quick detection of environmental pollution of aromatic compounds. Methods and Results: XylE gene coding for the catechol 2, 3 dioxygenase (CatO2ase ) was amplified from the recombinant plasmid pTG402 by using PCR technique and was subcloned into pUC118N and pUC119N. The single stranded recombinant phage DNA from the transformed E. coli MV1184 cells was used for sequencing. The sequence of xylE gene was proved to be the same as reported. The gene was then subcloned into the high expression plasmid pJLA503, its expression amount being about 34. 2% of the total bacterial proteins. Conclusion: xylE gene is highly expressed in host E. coli TG1. 展开更多
关键词 xylE GENE catechol 2 3 dioxygenase GENE EXPRESSION
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邻苯二酚1,2-双加氧酶(C12O)基因的定位、克隆和表达 被引量:8
4
作者 罗如新 张素琴 李顺鹏 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期208-211,共4页
射性同位素标记tfdC基因片段作探针,Southernblot杂交定位L1菌株的邻苯二酚1,2双加氧酶基因位于PstⅠ的I片段和BamHⅠ的M和N片段.低熔点琼脂糖回收PstⅠ的I段,直接克隆至表达载体pKT230... 射性同位素标记tfdC基因片段作探针,Southernblot杂交定位L1菌株的邻苯二酚1,2双加氧酶基因位于PstⅠ的I片段和BamHⅠ的M和N片段.低熔点琼脂糖回收PstⅠ的I段,直接克隆至表达载体pKT230上,获得重组子pKT230p.重组子转化不具开环酶活性的甲胺磷降解菌P2。 展开更多
关键词 tfdC基因 杂交定位 基因克隆 基因表达 C12O酶
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产胞外邻苯二酚1,2-双加氧酶的菌种筛选和发酵条件的研究 被引量:4
5
作者 李钦 李丽 +1 位作者 寇秀芬 张树政 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期39-44,共6页
从112株细菌中筛选出两株产胞外邻苯二酚1,2-双加氧酶的假单胞菌(Pseudomonas p.)。进行了该菌产酶的发酵条件试验。产酶的最适温度为30℃,最适起始pH为6.8—7.0。葡萄糖、麦芽糖和甘油对产酶有明显的抑制作用,苯甲酸钠对产酶有促进作... 从112株细菌中筛选出两株产胞外邻苯二酚1,2-双加氧酶的假单胞菌(Pseudomonas p.)。进行了该菌产酶的发酵条件试验。产酶的最适温度为30℃,最适起始pH为6.8—7.0。葡萄糖、麦芽糖和甘油对产酶有明显的抑制作用,苯甲酸钠对产酶有促进作用。氨态氮对菌体生长和产酶是必需的。琥珀酸钠是酶形成的有效诱导物。采用0.15%苯甲酸钠培养基(pH6.8—7.0),于30℃振荡培养72h,每毫升发酵液酶活力可达10单位。 展开更多
关键词 双加氧酶 菌种筛选 发酵条件
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降解1,2,4-三氯苯的硝基还原假单胞菌J5-1的分离鉴定和邻苯二酚1,2-双加氧酶基因的克隆 被引量:7
6
作者 宋蕾 王慧 +2 位作者 姜健 高静思 施汉昌 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1878-1881,共4页
从受氯苯污染的土壤中分离到1株以1,2,4-三氯苯为唯一碳源生长的细菌,命名为J5-1.根据其生理生化特征和16SrDNA(GenBank Accession No.EF107515)序列相似性分析,将该菌株初步鉴定为硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens).当1,2,4... 从受氯苯污染的土壤中分离到1株以1,2,4-三氯苯为唯一碳源生长的细菌,命名为J5-1.根据其生理生化特征和16SrDNA(GenBank Accession No.EF107515)序列相似性分析,将该菌株初步鉴定为硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens).当1,2,4-三氯苯初始浓度为400 mg/L时,J5-1对其最大降解率接近90%;当1,2,4-三氯苯浓度初始为20 mg/L时,降解效果最好.J5-1对1,2,4-TCB的降解服从一级反应动力学.从J5-1的基因组DNA中克隆到CC12O的全长序列. 展开更多
关键词 硝基还原假单胞菌J5-1 1 2 4-三氯苯 生物降解 降解动力学 氯代邻苯二酚1 2-双加氧酶
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1,2-环己二醇催化脱氢制备邻苯二酚 被引量:10
7
作者 谢英男 章亚东 蒋登高 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期478-480,共3页
用均相沉淀法制备了Ni/硅藻土催化剂,用于催化1,2-环己二醇脱氢制备邻苯二酚,并用浸渍法添加Na+作为助剂,在微分反应器里考察了活性组分Ni含量、助催化剂Na含量、还原时间、反应温度、催化剂负荷等因素对反应的影响,确定了反应产物的气... 用均相沉淀法制备了Ni/硅藻土催化剂,用于催化1,2-环己二醇脱氢制备邻苯二酚,并用浸渍法添加Na+作为助剂,在微分反应器里考察了活性组分Ni含量、助催化剂Na含量、还原时间、反应温度、催化剂负荷等因素对反应的影响,确定了反应产物的气相色谱分析条件。当催化剂中w(Ni)=20%、w(Na)=4%、反应温度320℃、液时空速为9h-1时,1,2-环己二醇转化率>95%,邻苯二酚收率>85%。 展开更多
关键词 1 2-环己二醇 邻苯二酚 Ni/硅藻土 催化脱氢
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1,2-亚甲二氧基苯的合成工艺研究 被引量:3
8
作者 李鑫 赵士举 +2 位作者 吴娟 苏惠 陈见 《科技导报》 CAS CSCD 2007年第15期40-43,共4页
以邻苯二酚和二氯甲烷为原料,二甲亚砜为溶剂,在碱性条件下合成1,2-亚甲二氧基苯,产品收率达到73.4%;探讨了原料配比、浓度、温度、催化剂用量等因素对产品收率的影响,得到最优工艺条件;红外光谱和气相色谱分析表明,产品为1,2-亚甲二氧... 以邻苯二酚和二氯甲烷为原料,二甲亚砜为溶剂,在碱性条件下合成1,2-亚甲二氧基苯,产品收率达到73.4%;探讨了原料配比、浓度、温度、催化剂用量等因素对产品收率的影响,得到最优工艺条件;红外光谱和气相色谱分析表明,产品为1,2-亚甲二氧基苯,纯度达到98.6%。 展开更多
关键词 1 2-亚甲二氧基苯 邻苯二酚 工艺
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降解2,4-二氯酚的假单胞菌GT241-1的特性及其3,5-二氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因定位 被引量:5
9
作者 钟文辉 何国庆 +2 位作者 郑平 孙明 喻子牛 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期269-272,共4页
从 2 ,4 -二氯酚生产厂排污口污泥中分离并筛选到一株降解 2 ,4 -二氯酚的细菌 GT2 4 1- 1,经鉴定属假单胞菌属 .菌株 GT2 4 1- 1能在 4 8h内将 90 mg/ L的 2 ,4 -二氯酚降解 91% . GC/ MS分析表明 ,该菌株能将 2 ,4 -二氯酚彻底降解而... 从 2 ,4 -二氯酚生产厂排污口污泥中分离并筛选到一株降解 2 ,4 -二氯酚的细菌 GT2 4 1- 1,经鉴定属假单胞菌属 .菌株 GT2 4 1- 1能在 4 8h内将 90 mg/ L的 2 ,4 -二氯酚降解 91% . GC/ MS分析表明 ,该菌株能将 2 ,4 -二氯酚彻底降解而不积累中间代谢产物 .经 38℃热处理 ,菌株 GT2 4 1- 1中有 1.9%丧失了 2 ,4 -二氯酚降解能力 .菌株 GT2 4 1- 1有两条大质粒带 .Southern杂交表明 ,菌株 GT2 4 1- 1的 3,5-二氯儿茶酚 1,2 -双加氧酶基因定位于约 11kb的 Eco RI/ Xba 展开更多
关键词 假单胞菌GT241-1 2 4-二氯酚 3 5-二氯儿茶酚 1 2-双加氧酶基因 基因定位 降解
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假单胞菌的氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因的克隆和表达 被引量:3
10
作者 钟文辉 何国庆 +2 位作者 孙明 冯孝善 喻子牛 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第2期175-179,共5页
从土壤中分离得到1株降解2,4-二氯酚(2,4-DCP)能力较强的细菌菌株GT241-1,克隆了该菌株的3,5-二氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因(dcpB),采用的克隆策略为:用Southern杂交对dcpB进行定位后,构建重组质粒,再用斑点杂交从重组质粒中筛选目的转化... 从土壤中分离得到1株降解2,4-二氯酚(2,4-DCP)能力较强的细菌菌株GT241-1,克隆了该菌株的3,5-二氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因(dcpB),采用的克隆策略为:用Southern杂交对dcpB进行定位后,构建重组质粒,再用斑点杂交从重组质粒中筛选目的转化子.经序列测定得知dcpB亚克隆片段全长4303bp,其中dcpB基因编码区765bp.核苷酸和推测的氨基酸序列分析表明,dcpB与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异.dcpB基因能够在大肠杆菌转化子中成功地表达有生物活性的酶. 展开更多
关键词 假单胞菌 2 4 二氯酚 氯儿茶酚 1 2-双加氧酶基因 基因克隆
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臭味假单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶的制备和一般性质 被引量:2
11
作者 寇秀芬 李钦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第5期397-399,共3页
邻苯二酚1,2-双加氧酶(EC 1.13.11.1)降解邻苯二酚为顺,顺-己二烯二酸,俗名粘康酸。它不仅用于合成热缩性树脂、感光性树脂及一些新功能树脂,而且是昂贵的电子材料和药用材料,由于它容易转化为己二酸,所以它也是生产尼龙的原料。用化学... 邻苯二酚1,2-双加氧酶(EC 1.13.11.1)降解邻苯二酚为顺,顺-己二烯二酸,俗名粘康酸。它不仅用于合成热缩性树脂、感光性树脂及一些新功能树脂,而且是昂贵的电子材料和药用材料,由于它容易转化为己二酸,所以它也是生产尼龙的原料。用化学法制造顺,顺-己二烯二酸十分困难,生物法却较简单。目前,日本以苯甲酸为原料已大规模生产。本文报道臭味假单胞菌(Pse- 展开更多
关键词 臭味假单孢菌 加氧酶
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用重组大肠杆菌JM109(pKST11)转化苯生产顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯 被引量:1
12
作者 曲向华 陈金春 +2 位作者 马祺祥 孙世尧 陈国强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-80,共7页
顺 1,2 二羟基 3,5 环己二烯 (简称DHCD)是航天业、电子工业、医药业以及精细化工业上重要的手性化合物。利用重组E coliJM10 9(pKST11) ,采用适时监测发酵过程中全细胞甲苯双加氧酶 (Toluenedioxygenase,TDO)活性的方法 ,研究了发... 顺 1,2 二羟基 3,5 环己二烯 (简称DHCD)是航天业、电子工业、医药业以及精细化工业上重要的手性化合物。利用重组E coliJM10 9(pKST11) ,采用适时监测发酵过程中全细胞甲苯双加氧酶 (Toluenedioxygenase,TDO)活性的方法 ,研究了发酵生产DHCD工艺中的重要影响因子IPTG以及底物苯的供给方式对DHCD产量的影响。研究结果表明 :(1)发酵初期利用IPTG诱导TDO的表达 ,不利于细胞生长 ,在对数生长中期 (6或 8h) ,采用 0 5mmol LIPTG即可诱导出TDO的最高表达。 (2 )发酵液中的苯对全细胞甲苯双加氧酶 (TDO)的活性有抑制作用 ,而利用液体石蜡作为缓释剂进行两相法发酵则降低了苯的毒害 ,明显提高了DHCD的产量。当采用传统的通气供苯方法 ,DHCD的产量仅有 7 5g L ;批式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量提高到 2 2 6g L ,是通气供苯法的 3倍 ;而采用流加的方式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量进一步提高到 36 8g L ,是通气供苯法的 5倍。证明通过发酵工艺的优化可以解决苯的毒害与苯作为反应底物在水相中需要有一定浓度之间的矛盾 ,获得较好的转化结果。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 JM109 pKST11 顺-1 2-二羧基-3 5-环己二烯 甲苯双加氧酶 生物转化 聚苯
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假单胞菌ZL13邻苯二酚2,3-双加氧酶基因的克隆表达 被引量:1
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作者 张鲁进 杨谦 李娟 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1297-1300,共4页
寻找新型高效石油降解菌,并研究其相关基因一直是石油降解领域的热点.本文以细菌Pseudomonas sp.ZL13的降解性质粒pZL-1的DNA为模板,通过PCR扩增的方法进行基因克隆,得到邻苯二酚2,3-双加氧酶基因.序列分析结果表明,该基因大小为924bp,... 寻找新型高效石油降解菌,并研究其相关基因一直是石油降解领域的热点.本文以细菌Pseudomonas sp.ZL13的降解性质粒pZL-1的DNA为模板,通过PCR扩增的方法进行基因克隆,得到邻苯二酚2,3-双加氧酶基因.序列分析结果表明,该基因大小为924bp,编码307个氨基酸;序列同源性比较结果显示,该基因与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)和恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的基因序列的相似性较高,处于同一分支.将目的基因连接到pGEX-4T-2表达载体上,在E.coli BL21中成功表达,转化子具有原油降解能力. 展开更多
关键词 假单胞菌 邻苯二酚2 3-双加氧酶 基因克隆 序列分析 原核表达
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1,2-环己二醇脱氢制邻苯二酚镍基催化剂的研究 被引量:5
14
作者 裴松鹏 林陵 曾崇余 《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期146-150,共5页
以硝酸镍为镍源,分别以硅藻土、活性炭、MgO和γ-Al2O3为载体,采用均相沉淀法与等体积浸渍法制备了负载型镍基催化剂,考察了所制备的催化剂对1,2-环己二醇脱氢制邻苯二酚反应的活性和选择性,并对催化剂进行了BET,XRD,SEM等表征。实验结... 以硝酸镍为镍源,分别以硅藻土、活性炭、MgO和γ-Al2O3为载体,采用均相沉淀法与等体积浸渍法制备了负载型镍基催化剂,考察了所制备的催化剂对1,2-环己二醇脱氢制邻苯二酚反应的活性和选择性,并对催化剂进行了BET,XRD,SEM等表征。实验结果表明,催化剂的比表面积与脱氢活性无对应关系,但平均孔径大有利于提高邻苯二酚的选择性;沉淀剂影响催化剂的微孔结构和粒径分布。以硅藻土为载体、NH3.H2O+NH4HCO3为沉淀剂制备的镍基催化剂,镍物种的晶粒度小、分散度较高,催化剂的平均孔径大,表现出良好的活性和选择性,在320℃、101kPa、液态空速2.6h-1、N2流量30mL/min、n(1,2-环己二醇)∶n(H2O)=1∶4的条件下,1,2-环己二醇的转化率达到98.3%,邻苯二酚的选择性为85.2%。 展开更多
关键词 镍基催化剂 载体 1 2-环己二醇 脱氢 邻苯二酚
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邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达 被引量:5
15
作者 马忠华 罗如新 +3 位作者 夏怡丰 王文东 陈文峻 蒯本科 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2000年第6期579-585,共7页
根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全... 根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 80 1bp ,有一个阅读框 ,编码 2 55个氨基酸 ,与增氧产碱菌 (Alcaligeneseutroplus)的tfdC基因相比 ,在 693位相差一个碱基 (C→A) ,导致编码产物在 2 2 8位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到 pBluescrip tIIKS质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pBt1 2G ,在大肠杆菌JM1 0 9中可表达邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶 (C1 2 0 )的活性 ;将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到 pET 30a质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pET30A ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3) plysS中可表达目的蛋白。C1 2 0是芳香族化合物降解过程中的关键酶 ,为了进一步在草坪草中表达tfdC基因 ,利用草坪草降解环境中芳香族污染物 ,将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG ,突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C1 2 0的活性。 展开更多
关键词 邻单胞菌 (tfd C) PCR 克隆 表达
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来源于假单胞菌4-硝基酚降解基因簇中的偏苯三酚1,2-双加氧酶基因克隆和功能鉴定 被引量:2
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作者 孙雯 许丽 +3 位作者 张双宇 田健 初晓宇 伍宁丰 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第4期71-76,共6页
通过富集培养的方法从农药厂废水曝气池的活性污泥中筛选到了一株既具有甲基对硫磷降解活性又可以有效降解4-硝基酚的高效菌株1-7,经16S rDNA鉴定为假单胞菌(Pseudom onassp.)。根据4-硝基酚降解相关基因保守区设计简并引物扩增小片段,... 通过富集培养的方法从农药厂废水曝气池的活性污泥中筛选到了一株既具有甲基对硫磷降解活性又可以有效降解4-硝基酚的高效菌株1-7,经16S rDNA鉴定为假单胞菌(Pseudom onassp.)。根据4-硝基酚降解相关基因保守区设计简并引物扩增小片段,再应用TAIL-PCR克隆得到偏苯三酚1,2-双加氧酶基因dio1,基因全长873 bp,编码290个氨基酸,酶蛋白理论分子量为32.8 kDa。doi1基因在E.coliBL21中过量表达,并通过N i-NTA亲和层析纯化,结果表明该酶具有正常的生物学活性,证明了假单胞菌1-7可以通过偏苯三酚途径降解4-硝基酚。初步探讨了假单胞菌1-7的4-硝基酚降解机制。 展开更多
关键词 甲基对硫磷 4-硝基酚 假单胞菌 TAIL-PCR 偏苯三酚1 2-双加氧酶
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青枯雷尔氏菌GMI1000菌株龙胆酸1,2-双加氧酶活性中心关键氨基酸残基的鉴定(英文)
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作者 刘冬啟 朱顺尼 倪晋仁 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期863-867,共5页
生物信息学分析表明,位于青枯雷尔氏菌GMI1000菌株的染色体上的读码框RSc1087可能编码一个龙胆酸1,2-双加氧酶.本研究克隆、表达了该基因,并通过亲和层析对该基因表达产物进行了纯化.酶学测试结果证实,该基因编码的正是龙胆酸1,2-双加氧... 生物信息学分析表明,位于青枯雷尔氏菌GMI1000菌株的染色体上的读码框RSc1087可能编码一个龙胆酸1,2-双加氧酶.本研究克隆、表达了该基因,并通过亲和层析对该基因表达产物进行了纯化.酶学测试结果证实,该基因编码的正是龙胆酸1,2-双加氧酶.SDS-PAGE结果表明,该酶亚基分子量约为38×103.基因的定点突变揭示105位、107位和146位组氨酸残基是该酶活性中心的关键氨基酸残基. 展开更多
关键词 关键氨基酸残基 定点突变 龙胆酸1 2-双加氧酶 青枯雷尔氏菌GMIl000菌株
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青枯雷尔氏菌龙胆酸1,2-双加氧酶基因的克隆、表达和酶性质的研究(英文)
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作者 刘冬啟 朱顺妮 倪晋仁 《北京大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期828-833,共6页
本研究克隆、表达了青枯雷尔氏菌GMI1000菌株中编码龙胆酸1,2-双加氧酶的基因,并通过亲和层析对该酶进行了纯化,SDS-PAGE结果表明该酶亚基约为38kDa。该酶的最适反应温度和最适pH分别为30℃和7.5。该酶的Km为56μmol/L,pI为4.6~4.8。... 本研究克隆、表达了青枯雷尔氏菌GMI1000菌株中编码龙胆酸1,2-双加氧酶的基因,并通过亲和层析对该酶进行了纯化,SDS-PAGE结果表明该酶亚基约为38kDa。该酶的最适反应温度和最适pH分别为30℃和7.5。该酶的Km为56μmol/L,pI为4.6~4.8。纯化后的龙胆酸1,2-双加氧高度不稳定:4℃下放置72h即失去85%的酶活。甘油和β-巯基乙醇可稳定该酶酶活,在添加10%(体积比)甘油至酶液(50mmol/L,pH7.3的磷酸盐缓冲液保存)后,-20℃保藏2周后均能检出明显的酶活。0.1~1mmol/LFe2+可以激活或者稳定该酶的酶活。Na+,K+,Mg2+和Ca2+(分别为1~2mmol/L)对该酶的酶活无明显的影响。Mn2+,Zn2+和Fe3+的添加量超过2mmol/L时,酶活急剧下降。1mmol/L的Cu2+即使该酶失去酶活。 展开更多
关键词 青枯雷尔氏菌GMI1000菌株 龙胆酸1 2-双加氧酶 酶性质
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红球菌35R1中邻苯二酚1,2-双加氧酶的表达及纯化
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作者 何航航 姚霓红 +2 位作者 吴菁 闫达中 晁红军 《武汉轻工大学学报》 2021年第3期20-23,72,共5页
3,5-二甲基苯酚(3,5-DMP)是一种重要的精细化工原料以及有机合成中间体,在工农业生产领域广泛应用并大量排放到环境中,对人类和环境造成了巨大的危害。Rhodococcus sp.35R1是一株以3,5-二甲基苯酚为唯一碳源和能源的高效降解菌。为验证... 3,5-二甲基苯酚(3,5-DMP)是一种重要的精细化工原料以及有机合成中间体,在工农业生产领域广泛应用并大量排放到环境中,对人类和环境造成了巨大的危害。Rhodococcus sp.35R1是一株以3,5-二甲基苯酚为唯一碳源和能源的高效降解菌。为验证菌株35R1中3,5-二甲基苯酚是通过邻苯二酚途径开环代谢的,通过生物信息学分析,寻找到35R1基因组上的邻苯二酚1,2-双加氧酶编码基因catA,通过一步克隆法将其连接到表达载体pET28a(+)上,然后,将其转化至表达宿主E.coli BL21(DE3)中,从而进行该基因的异源表达。结果成功在35R1基因组上扩增到catA基因,构建了重组质粒pET28a-catA,采用自诱导的方法诱导表达了邻苯二酚1,2-双加氧酶,纯化酶可催化邻苯二酚生成顺式粘糠酸。 展开更多
关键词 3 5-二甲基苯酚 邻苯二酚 邻苯二酚1 2-双加氧酶 基因克隆 异源表达
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苯酚降解菌株GXY-1分离鉴定、降解及其粗酶特性研究 被引量:14
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作者 周集体 关晓燕 +3 位作者 曲媛媛 李昂 苟敏 艾芳芳 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期340-345,共6页
从处理石化废水的活性污泥样品中分离得到一株能以苯酚为唯一碳源生长的菌株GXY-1.通过形态特征、生理生化及16S rDNA序列分析,初步鉴定菌株GXY-1属于布鲁氏杆菌属(Brucella sp.).实验结果表明,菌株GXY-1对土霉素和四环素不敏感,其降解... 从处理石化废水的活性污泥样品中分离得到一株能以苯酚为唯一碳源生长的菌株GXY-1.通过形态特征、生理生化及16S rDNA序列分析,初步鉴定菌株GXY-1属于布鲁氏杆菌属(Brucella sp.).实验结果表明,菌株GXY-1对土霉素和四环素不敏感,其降解苯酚的最佳条件为温度30℃,pH7.0.在最佳条件下,GXY-1对600mg/L苯酚的降解率在60h时达99%以上.同时GXY-1还可以利用苯胺、萘、氯苯等芳香化合物为唯一碳源生长.测定了降解途径中相关酶的活性,表明菌株GXY-1是通过邻苯二酚1,2双加氧酶催化开环来降解苯酚.该菌株粗酶的最适反应pH为7.8,最适反应温度为40℃. 展开更多
关键词 苯酚 生物降解 布鲁氏杆菌 邻苯二酚1 2双加氧酶
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