响应面法优化槟榔挥发油提取工艺及其抑菌活性研究

采用水蒸气蒸馏法提取槟榔挥发油。以挥发油得率为指标,在单因素试验的基础上通过响应面法优化提取工艺,并研究挥发油对4种供试菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:最佳提取工艺为料液比1∶9.5(g/mL)、浸泡时间3 h、提取时间10.5 h,在此条件下挥发油得率为0.0409%±0.0002%;槟榔挥发油对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌的MIC分别为15.63、31.25、31.25、62.5 mg/mL,对4种供试菌的MBC均超过250 mg/mL。

响应面分析法优化超声波提取槟榔原花青素工艺

利用响应面分析法(RSM)对槟榔原花青素的提取工艺进行优化。在单因素试验基础上选取试验因素与水平,根据中心组合(Box-Behnken)试验设计原理采用四因素三水平的响应面分析法对各个因素的显著性和交互作用进行分析,结果表明:槟榔干原花青素提取的最佳工艺条件为超声功率600W、超声时间16min、料液比1:40(g/mL)、丙酮体积分数81%,在此条件下,测定花青素提取率最高达到3.41%。

海南槟榔提取物中多酚和槟榔碱的含量测定

目的：测定海南槟榔乙醇提取物中多酚和槟榔碱的含量。方法：多酚的含量分析采用分光光度法，以没食子酸为对照品，以FeCl3-K3[Fe（CN）6]为显色剂，在720nm处进行测定；槟榔碱的含量分析采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，流动相组成为乙二胺、甲醇和乙腈，检测波长为215nm，流速1．0mL／min。结果：海南槟榔乙醇提取物中多酚的含量为10．54mg／g，线性范围为0．096～0．576μg／mL，平均回收率为101．40％，RSD为0．88％；海南槟榔乙醇提取物中槟榔碱的含量为1．935μg／g，RSD为1．8％。结论：该方法简单快捷，重现性好，适合于海南槟榔乙醇提取物中多酚和槟榔碱的含量测定。

儿茶提取物抗甲型流感病毒作用的实验研究

目的 研究从中药儿茶中提取的药物成分抗甲型流感病毒的作用。方法 用狗肾传代MDCK细胞培养法观察儿茶提取物抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用;用鸡胚培养法观察儿茶提取物抑制甲型流感病毒增生的作用;用红细胞凝集试验观察儿茶提取物体外直接抑制甲型流感病毒的作用。结果 1)儿茶提取物的细胞毒性较低,可有效抑制甲型流感病毒感染细胞(P<0.05);2)儿茶提取物在一定范围内可明显抑制甲型流感病毒在鸡胚内的增生,经红细胞凝集试验测定抑制病毒效价为8倍或8倍以上;3)儿茶提取物直接与甲型流感病毒作用后可抑制病毒血凝效价达16 倍以上。结论 儿茶提取物具有很好的抗甲型流感病毒的作用。

槟榔提取物对小鼠免疫功能及肝脏抗氧化酶的影响

以三种品牌槟榔水提取液和稀磷酸提取物为对象,测定提取物对小白鼠体重、免疫功能及抗氧化酶活性的影响。免疫评价指标包括脾脏指数、胸腺指数以及免疫球蛋白Ig A、Ig G和Ig M含量,抗氧化酶指标包括SOD和CAT活性。结果表明,三种槟榔均能显著提高小白鼠体重(p<0.01),对胸腺指数、免疫球蛋白影响不显著,仅一个品牌槟榔稀磷酸提取液90 d时显著降低脾脏指数(p<0.05)和CAT活性(p<0.05)。槟榔提取液90 d内对小鼠具有促进食欲、增加体重的作用,对其免疫功能和抗氧化酶活性总体没有明显影响。

儿茶提取物对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

用流感病毒鼠肺适应株A/FM /1 /47(H1N1 )感染的小鼠肺炎为模型 ,研究儿茶提取物对流感病毒感染机体免疫功能的影响 ,包括对迟发型超敏反应 (DTH)及中和抗体产生的影响。结果显示 :儿茶提取物可显著增强 2 ,4 二硝基氟苯 (DNFB)诱发的小鼠DTH反应 ,即儿茶素 +病毒感染组和儿茶素对照组小鼠的耳肿胀度和脾指数都明显增加 ,与正常对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;提示 :儿茶提取物具有增强小鼠T细胞免疫功能的作用。儿茶提取物实验组的中和抗体平均效价为 1∶2 0 3 ,与病毒感染对照组 (平均效价为 1∶1 0 4.2 )相比具有非常显著性差异 (P <0 .0 1 ) ;说明儿茶提取物可增强流感病毒感染小鼠中和抗体的水平 ,提示其对小鼠体液免疫功能亦有增强作用。研究表明 :儿茶提取物具有增强病毒感染机体的细胞免疫和体液免疫功能的作用。

槟榔籽油提取工艺优化与脂肪酸成分分析

目的:优化槟榔籽油的提取工艺,并分析槟榔籽油的成分。方法:采用传统溶剂法萃取槟榔籽油,对其工艺条件进行优化,并用气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)对槟榔籽油所含的脂肪酸种类及含量进行测定。结果:槟榔籽油的最佳提取工艺条件为提取温度80℃、液料比24:1、提取时间11h,在此条件下油脂提取率可达12.84%。利用GC-MS鉴定出10个组分,占槟榔籽油脂肪酸总量的99.99%,主要含肉豆蔻酸(30.78%)、棕榈酸(19.23%)、油酸(26.86%)和亚油酸(19.56%)。结论:槟榔籽油中饱和脂肪酸达到51.18%,不饱和脂肪酸达到48.81%,其中多不饱和脂肪酸占总脂肪酸的20.10%。

儿茶提取物抗流感病毒作用的小鼠体内实验研究

用流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/4 7(H1N1)感染小鼠 ,制备小鼠肺炎模型 ,研究儿茶提取物对流感病毒感染小鼠死亡的保护作用。结果显示 :高剂量组对感染小鼠具有很好的死亡保护作用 (P <0 .0 5) ,高、中剂量组均可明显延长感染小鼠的平均存活时间。高剂量组 ( 12 .5g/L)的肺指数、肺指数抑制率和肺病变程度与阳性药物 (病毒唑 )对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5)。研究表明

槟榔提取物在小白鼠体内的抑菌作用

以海南产槟榔果为原材料,以小白鼠为试验对象,探讨槟榔不同提取物在其体内的抗菌效果。结果表明:不同槟榔提取物/萃取物具有不同的抑菌效果,以粗提取物,乙酸乙酯相及水相效果较好,效果最好的应属水相,其次为粗提取物,两者在高剂量(50mg/kg)时死亡率分别为27.3%及30.0%,并且3种受试物均呈现出一定的量效关系。这说明,相比脂溶性组分,槟榔中起抑菌作用的更主要的是其中的极性组分。

槟榔叶片总蛋白质提取及双向电泳条件初探

采用3种提取植物组织蛋白的方法(TCA/丙酮沉淀法、E-TCA法、酚法)提取槟榔叶片总蛋白,在蛋白产量,一维和二维电泳图谱等方面对3种方法的提取效果进行比较。结果表明,TCA/丙酮沉淀法效果较好,是槟榔叶片总蛋白提取的可选方法,同时优化了双向电泳的条件和上样量。

槟榔壳总酚类提取物抗抑郁作用研究

目的:探讨槟榔壳总酚类提取物对抑郁模型小鼠的抗抑郁作用。方法:采用小鼠悬尾、强迫游泳等抑郁模型,以小鼠行为绝望的不动时间作为指标,考察槟榔壳总酚类抗抑郁活性。结果:槟榔壳总酚类320,160 mg.kg-1剂量组均能显著减少小鼠悬尾和强迫游泳的不动时间。结论:槟榔壳总酚类可以改善小鼠的绝望行为,具有明显的抗抑郁作用。

儿茶儿茶素抑制流感病毒增殖作用的研究

目的研究儿茶儿茶素的抗流感病毒作用。方法应用鸡胚培养法和血凝抑制试验分析不同浓度的儿茶提取物对病毒增殖的影响。结果儿茶儿茶素最大无毒剂量为12.5 mg/ml,在3.12512.5 mg/ml浓度范围内对甲型和乙型流感病毒的增殖具有抑制作用,12.5 mg/ml能完全抑制病毒的增殖。结论提示该儿茶儿茶素具有抑制甲型和乙型流感病毒增殖的作用。

槟榔黄化病组织RNA提取方法的比较

为了从发生黄化病的槟榔茎、叶、花中提取到完整的RNA,采用了CTAB法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取槟榔黄化病组织RNA。从RNA的完整性、产率和纯度方面对这几种方法进行了比较,结果表明,异硫氰酸胍法所得RNA完整性较好,条带清晰无明显降解,OD260/OD280介于1.8-2.0之间,RNA得率较高,为120μg/g以上,并能成功进行反转录制备cDNA,表明该RNA可以进行后续分子生物学操作。

基于多级错流提取槟榔生物碱的工艺优化

为了优化槟榔生物碱的提取工艺,以青果槟榔壳为原料,采用多种溶剂体系进行提取,确定最佳提取溶剂;根据多级错流浸取理论公式设计料液比和浸取级数,在单因素试验的基础上,以提取温度、提取时间、溶剂pH值为自变量,以槟榔生物碱提取率为指标,进行有交互的正交试验。结果表明:以水为提取剂,料液比1:20(m:V),提取温度60℃,提取时间100min,pH值为2,提取2次,该条件下的槟榔生物碱提取率为7.241 7mg/g。

适合于高通量测序的槟榔总RNA的提取方法

为了获得能满足高通量测序要求的槟榔叶片总RNA,采用通用植物总RNA提取试剂盒和异硫氰酸胍-苯酚法提取槟榔叶片的总RNA。结果表明:异硫氰酸胍-苯酚法提取的总RNA完整性好、纯度高,通用植物总RNA提取试剂盒不能从槟榔叶片中提取完整的总RNA;70℃,10 min的热处理会导致槟榔总RNA的降解,苯酚/氯仿抽提能得到高纯度、完整性好的总RNA;总RNA质量浓度达到979 mg·L-1,OD260/OD280=1.98,OD260/OD230=2.31,能满足转录组高通量测序的要求。

槟榔基因组DNA提取及ISSR反应体系的优化

以槟榔为试验材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,并设置不同梯度分别对每个PCR反应因子做了相应的试验。结果表明:改良的CTAB法提取的槟榔基因组纯度高、质量好;同时,建立了适合槟榔ISSR-PCR反应体系,即20μLPCR反应体积中,模板DNA浓度为30ng/μL,Mg2+浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U,dNTPs浓度为0.4mmol/L,引物为浓度为0.8μmol/L。

槟榔多糖多酚对大鼠的亚慢性毒性研究

目的:研究槟榔多糖多酚对大鼠的亚慢性毒性作用,为槟榔的开发利用提供毒理学依据。方法:SPF级Wistar大鼠100只,雌雄各半,随机分为4组:0.28和0.83 g/kg槟榔多糖多酚组,每组20只,染毒90 d后处死;2.50 g/kg槟榔多糖多酚组和对照组,每组30只,其中20只在染毒90 d后处死,10只在染毒90 d后停止给予受试物,进入恢复期继续正常饲养28 d。染毒期间按10 mL/kg连续灌胃90 d,每天1次,对照组给予等体积蒸馏水。每周称量大鼠体质量和进食量,计算食物利用率,分别于染毒期和恢复期结束后检测血常规、血生化、尿液指标,大鼠麻醉后解剖进行大体观察、计算主要脏器的脏器系数并进行组织病理学检查。结果:2.50 g/kg槟榔多糖多酚组大鼠染毒期体质量总增量低于对照组,除雄性大鼠第1周食物利用率低于对照组(P<0.05)外,其余各周大鼠的食物利用率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.50 g/kg槟榔多糖多酚组雌雄大鼠各有5只于灌胃第3周出现精神欠佳、被毛不顺、胃肠胀气、活动减少等症状,于90 d染毒期间各死亡2只,于濒死前解剖肉眼可见胃肠胀气、胃肠壁变薄呈透明状,但主要脏器组织病理学检查未见明显异常。其他剂量组大鼠在90 d染毒期及恢复期与对照组比较未见明显异常,血常规、血生化、尿液个别指标与对照组比较虽有统计学差异,但均在本实验室正常检测值范围内,无生物学意义。主要脏器系数和组织病理学检查未见明显异常。考虑大鼠的死亡可能为大剂量槟榔多糖多酚引起胃肠胀气严重导致进食及消化受阻所致。在本试验条件下,槟榔多糖多酚灌胃Wistar大鼠90 d,未观察到有害作用剂量(NOAEL)为0.83 g/kg。结论:2.50 g/kg槟榔多糖多酚灌胃90 d可引起Wistar大鼠精神萎靡、胃肠胀气、进食及消化受阻,此症状虽可逆,但剂量过高可致死亡,因此槟榔多糖多酚的开发利用需控制在安全剂量范围内。

复方儿茶水提液对HT-29细胞水通道蛋白3表达的影响

目的检测复方儿茶提取液对人结肠癌HT-29细胞水通道蛋白3(AQP3)表达的影响,初步探讨复方儿茶水提液发挥止泻作用的分子机制。方法实验共分3组,高剂量组、低剂量组和空白对照组。不同剂量处理分为高(40 mg/L),低(10 mg/L)剂量组,分别作用12 h后应用RT-PCR和Western blot法检测高低剂量含药培养液对HT-29细胞AQP3表达的影响。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,高低剂量含药培养液均上调HT-29细胞AQP3表达水平。结论复方儿茶水提液可以上调AQP3表达,是发挥止泻作用的重要机制之一。

槟榔醇提物对H9C2心肌细胞的抗缺氧保护作用

目的 研究槟榔无水醇提物对低氧H9C2心肌细胞的作用及其保护机制.方法 建立H9C2心肌细胞低氧模型,CCK-8法检测槟榔无水醇提物对H9C2细胞存活率的影响;通过检测细胞内丙二醛(MDA)含量,过氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)活力,研究槟榔无水醇提物对H9C2细胞的保护作用;RT-PCR法检测细胞内Nrf2、Caspase-3 mRNA水平的表达,从分子水平研究槟榔无水醇提物对低氧H9C2细胞的保护机制.结果 与常氧对照组相比,低氧24 h时细胞存活为28.46%(P<0.01),细胞内MDA含量升高44.33%(P<0.05),SOD、GSH活力分别下降16.18%、30.64%(P<0.05或P<0.01).RT-PCR实验结果表明,Nrf2被激活,其mRNA表达上升1.74倍(P<0.05).与低氧模型组相比,槟榔无水醇提物处理组H9C2细胞存活率明显升高(P<0.01),且呈现剂量依赖性,槟榔无水醇提物处理组细胞内SOD、GSH活力分别增加14.90%、28.94%(P<0.05),Nrf2基因mRNA相对表达下降66%(P<0.05).结论 槟榔无水醇提物对低氧H9C2细胞有显著的保护作用,其保护机制可能与提高细胞内抗氧化物酶活力,减轻细胞氧化应激损伤,提高细胞耐低氧能力有关.

基于因素最少化的槟榔多酚错流提取条件研究

有效提高槟榔多酚提取率,采用多种溶剂体系进行提取,探讨最佳提取溶剂。根据错流浸取工艺理论设计了料液比与浸取级数,并在单因素试验的基础上进行正交优化设计,最终确定了槟榔中多酚提取的最佳工艺条件。结果表明,最佳提取剂为混合溶剂(甲醇∶丙酮∶水=1∶2∶2)(V∶V),料液比为1:20(g:m L),p H值为4.0,在70℃下提取100 min,提取次数为2,槟榔多酚提取率达到34.46 mg/g。