金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF通过激活固有免疫增强小鼠抵抗金黄色葡萄球菌感染

Cathelicidin抗菌肽系多物种保守的具有天然广谱抗微生物活性的小分子多肽。本研究旨在探究金环蛇抗菌肽cathelicidin-BF是否可以激活宿主抗金黄色葡萄球菌感染免疫。在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S.aureus)感染前24、8和4h给C57BL/6小鼠腹腔注射抗菌肽cathelicidin-BF(10mg/kg),或等体积PBS为对照,0h经腹腔注射S.aureus或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus, MRSA),18h后计数小鼠腹水菌落形成单位(colony forming unit, CFU)。实验发现抗菌肽cathelicidin-BF注射组小鼠腹水细菌CFU显著低于对照组,表明预注射cathelicidin-BF能显著增强小鼠抗S.aureus感染。为明确抗菌肽是否通过调节小鼠固有免疫应答而达到抗菌效果,流式分析注射抗菌肽后小鼠腹水中各免疫细胞亚群发现:cathelicidin-BF显著促进了单核/巨噬细胞和中性粒细胞在腹腔的富集。进一步分析发现,抗菌肽在体内可促进小鼠腹腔中单核细胞及中性粒细胞趋化因子CCL2、CXCL1、CXCL2表达;体外则以剂量依赖方式促进小鼠巨噬细胞分泌趋化因子。Cathelicidin-BF还能激活小鼠腹腔巨噬细胞MAPK和NF-κB信号通路。以上结果表明,抗菌肽cathelicidin-BF可通过增强小鼠巨噬细胞/中性粒细胞固有免疫加强小鼠抗S.aureus感染。

化学发光免疫法测定大鼠血清中金环蛇抗菌肽的含量

目的采用化学发光免疫法测定大鼠血清金环蛇抗菌肽(BF-30)的含量,为药代动力学研究提供简单快速的检测手段,初步探讨BF-30体内药代动力学特征。方法建立化学发光免疫分析方法并对方法的基质效应、精密度、准确度、稳定性和稀释效应进行确证,应用该法检测Wistar大鼠血清中BF-30的浓度。结果在大鼠血清中,BF-30在0.5~40 ng/ml浓度范围内Logistic曲线拟合良好,最低定量限为0.5 ng/ml;该法不存在基质效应;日内精密度为8.76%~14.15%、日间精密度为4.91%~11.11%,准确度为-1.27%^-7.71%;样品在-20℃放置13 d、反复冻融2次稳定性良好;储备液在-20℃放置30 d稳定性良好;样品在稀释40倍后无稀释效应。结论该分析方法简便、准确、可靠,能满足大鼠血清中BF-30含量的测定及其临床前药代动力学研究。