Caveolin-1在胃癌组织中的表达及临床生物学意义

背景与目的:Caveolin-1作为候选抑癌基因,在多种肿瘤均有异常表达。本研究探讨Caveolin-1在非癌胃粘膜、肠上皮化生、异型增生和胃癌组织以及胃癌细胞系MGC803和BGC823的表达特点。方法:采用冰冻组织微阵列的免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色,在完全相同的实验条件下检测56例胃癌及29例非癌粘膜、11例肠上皮化生、7例异型增生组织中Caveolin-1的表达状况,及其与胃癌的临床病理分期、淋巴结转移、Lauren分型及组织学分型的关系。Westernblot和RT-PCR法检测胃癌及相应癌旁组织与MGC-803和BGC-823细胞中Caveolin-1蛋白和RNA的表达情况。结果:免疫组化结果显示,Caveolin-1在非癌胃粘膜、肠上皮化生、异型增生和胃癌中的阳性率分别为86.2%(25/29)、81.8%(9/11)、57.1%(4/7)、17.9%(10/56);胃癌与其它各组间的阳性率有显著性差异(P<0.05)。进展期胃癌的Caveolin-1阳性率(16.0%)低于早期胃癌(33.3%),但无统计学意义(P>0.05)。弥漫型胃癌的阳性率(7.0%)明显低于肠型胃癌(26.9%,P<0.05)。有淋巴结转移的胃癌Caveolin-1阳性率(9.7%)低于无淋巴结转移(31.8%,P<0.05)。Westernblot及RT-PCR结果显示,胃癌组织和相应非癌胃粘膜组织中Caveolin-1的表达无显著性差异,但MGC-803和BGC-823细胞中Caveolin-1表达?

Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法

目的探讨小凹蛋白-1(caveolin-1)基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式,为深入研究caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。方法将引进的caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室,煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,根据美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory)提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型,采用caveolin-1^(+/-)杂合子互交、杂合子与caveolin-1^(-/-)纯合子杂交(正交及反交)、纯合子互交4种不同的交配方式,观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。结果琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200 bp和661 bp,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型;不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性、雄性caveolin-1^(-/-)纯合鼠具有一定的繁殖能力,三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。结论煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定caveolin-1基因敲除小鼠的基因型;caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。

Caveolin-1基因mRNA和蛋白在胃癌组织的表达

目的:通过研究Caveolin-1mRNA及蛋白在胃不同病变组织中的表达,对mRNA及蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数间的关系进行分析.方法:25例正常胃黏膜、65例不典型增生胃黏膜及71例胃癌组织,采用免疫组化SP法检测蛋白的表达情况;依据GenBank中Caveolin-1基因序列(NC-000007),设计并合成全长21bp的寡核苷酸探针,运用原位杂交技术对Caveolin-1mRNA的表达进行检测.结果:Caveolin-1mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞浆中的阳性表达率呈递减趋势,阳性率分别为:92.0%,83.1%,38.2%和88.0%,83.1%,28.2%.Caveo-lin-1mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移组、有无脉管侵犯组内表达率的差异有统计学意义(P<0.05),在年龄及性别组内表达率的差异无统计学意义(P>0.05).Caveolin-1mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.967,P<0.05).结论:Caveolin-1mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、胃癌中阳性表达率均逐渐降低,两者在不同病变组织中表达的一致性提示该基因在癌组织中的低表达发生于转录或以上水平的抑制.

caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌发生发展的关系及其临床意义

目的:研究正常胃黏膜及胃癌组织中caveolin-1、Dnmt1蛋白的表达,并探讨caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌发生发展的关系及其临床意义.方法:采取甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)检测不同分化程度的60例胃癌组织(其中包括新鲜组织50例、石蜡包埋组织10例)和14例正常胃组织中caveolin-1基因启动子区域甲基化状态;同时用SP免疫组织化学法、原位杂交法检测caveolin-1蛋白、Dnmt1蛋白及mRNA的表达.结果:14例正常胃组织中,未检测到caveolin-1基因甲基化;在60例胃癌组织中,检测到44例胃癌组织中存在甲基化,甲基化发生率为73.33%,两组间差异具有统计学意义(P<0.005).caveolin-1基因甲基化的发生与患者年龄有关.60例胃癌标本中,caveolin-1蛋白阳性表达率仅为30%(18/60),Dnmt1蛋白阳性表达率为63.3%(38/60),Dnmt1基因mRNA阳性表达率为53.3%(32/60).结论:在胃癌组织中,caveolin-1基因可能在Dnmt1基因的作用下发生甲基化,丧失其活性,进而导致胃癌的发生、发展.

家鸽Caveolin-1基因全长cDNA的克隆、序列和组织表达分析

窖蛋白(Caveolin)是一类构成细胞膜上胞膜窖主要结构的标志蛋白,由Caveolin基因家族编码而成。Caveolin-1基因是Caveolin基因家族的成员之一。该实验采用RT-PCR与RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术成功地克隆了家鸽Caveolin-1基因的全长cDNA。该cDNA全长2605bp,包含537bp的完整编码区,编码178个氨基酸;分析发现家鸽Caveolin-1基因编码区与牛、家犬、鸡、褐家鼠等核苷酸同源性为80.1%～93.4%,氨基酸同源性高达85.4%～97.2%;半定量RT-PCR分析表明该基因在家鸽各种组织广泛表达,脂肪中表达量最高,各种肌肉中表达量次之,肝脏中表达量最低。此结果说明家鸽Caveolin-1基因可能与脂肪、肌肉中的某些代谢途径有关。

Caveolae/caveolin-1/ERK_(1/2)信号通路在降钙素基因相关肽抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用(英文)

业已证明,Caveolae及其蛋白caveolin-1参与了细胞膜的胆固醇转运和细胞膜的信号转导.我们前期工作发现降钙素基因相关肽(CGRP)抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的信号通路与抑制ERK1/2活性和上调caveolin-1表达有关.本文研究Caveolae及caveolin-1在CGRP抑制VSMC增殖中的作用,进一步研究caveolin-1表达增加是否有直接抑制ERK1/2信号激酶活性的作用.采用大鼠主动脉贴块法培养VSMC,取3～10代VSMC用于实验,10%小牛血清(FBS)用于刺激VSMC增殖,用β-环糊精(cyclodextrin)或菲律宾菌素(filipin)剥夺胆固醇破坏Caveolae结构;MTT法和流式细胞仪用于检测细胞增殖;蛋白质印迹和免疫共沉淀法分别用于检测目的蛋白的表达或蛋白质间相互作用.结果显示,CGRP呈时间和浓度依赖性显著抑制10%FBS诱导的VSMC增殖.细胞Caveolae结构的破坏能降低CGRP抑制VSMC增殖作用,同时也增加了ERK1/2的磷酸化;β-环糊精孵育细胞能降低caveolin-1的表达.免疫共沉淀发现10%FBS和/或CGRP共同孵育细胞对非磷酸化ERK1/2与caveolin-1的结合无差别,但10%FBS能降低磷酸化ERK1/2与caveolin-1的结合,CGRP预孵育细胞能增加这两者的相互作用.结果揭示,Caveolae及caveolin-1可以正调控CGRP抑制VSMC增殖作用,其机制可能与CGRP增加caveolin-1与p-ERK1/2在Caveolae的结合,并抑制p-ERK1/2核转位作用有关.

Caveolin-3基因多态性的筛查及其在中国汉族糖尿病患者中的特点

目的:观察我国汉族正常人和2型糖尿病(T2DM)患者Caveolin-3(CAV3)基因的多态性差异,并介绍一种研究CAV3相关遗传病的实用方法。方法:CAV3基因只有2个很短的外显子,使用PCR-SSCP进行筛查,然后选择性测序。针对性地设计引物,经过PCR-SSCP分别测定50例正常人和50例T2DM样本的基因外显子基因多态性情况。结果:PCR-SSCP发现T2DM患者CAV3基因电泳变异累计发生率为48%,而正常人变异累计发生率为7%,存在显著差异(P<0.001)。抽查变异条带,测序证实发生了碱基变异。结论:中国人T2DM的CAV3基因存在增加的多态性特征,PCR-SSCP法可有效地进行初步筛查;提示CAV3基因多态性可能是中国人T2DM发生的遗传背景之一。

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。

靶向沉默caveolin-1基因对胃癌耐药细胞增殖和迁移影响

目的:探讨靶向沉默caveolin-1(cav-1)基因对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的人胃癌耐药细胞SGC7901/ADR增殖和迁移作用的影响及可能机制.方法:通过小干扰R N A转染胃癌细胞S G C7901/A D R,以未转染细胞为正常对照组,转染siRNA Control为阴性对照组,RT-PCR法检测靶向沉默cav-1基因的效果,MTT法检测各组SGC7901/ADR细胞的增殖能力,Transwell小室迁移实验检测各组SGC7901/ADR细胞的迁移能力,Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin A1和Cyclin E蛋白表达水平.结果:靶向沉默cav-1基因显著抑制胃癌SGC7901/ADR细胞增殖,P<0.05;靶向沉默cav-1基因显著下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1和Cyclin A1,但对Cyclin E无影响;同时,靶向沉默cav-1基因显著抑制胃癌SGC7901/ADR细胞迁移能力.结论:靶向沉默cav-1基因可抑制胃癌耐药细胞的增殖和迁移,可能与其抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin A1和迁移相关分子有关.

稳定表达Caveolin-3基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株的构建

目的构建稳定表达Caveolin-3(CAV3)基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株。方法将野生型CAV3(CAV3-WT)、CAV3-P104L、CAV3-P47L装在带有GFP标签的质粒中,构建目的基因与GFP基因融合的表达质粒,以只含GFP的载体为对照。将C2C12细胞随机分为A、B、C、D组,分别转染对照空载体(NC)、CAV3-WT、CAV3-P47L及CAV3-P104L。以遗传霉素(G418)进行阳性克隆筛选,荧光显微镜下挑选稳定转染的细胞系,Western blotting法检测各组细胞中的CAV3-GFP融合蛋白,免疫荧光法检测各组细胞中的CAV3蛋白,以荧光强度代表目的蛋白相对表达量。结果经酶切和测序验证,证实4种表达质粒构建成功。B、C、D组细胞中测得CAV3-GFP融合蛋白,A组未测得融合蛋白。A、B、C、D组CAV3蛋白相对表达量分别为23.0±2.25、32.3±0.35、25.6±0.92、24.3±1.42,B组CAV3蛋白表达增强,与A组相比,P<0.01;A、C、D组CAV3蛋白表达下调,与B组相比,P均<0.01。结论成功构建了稳定表达CAV3-P47L和CAV3-P104L的C2C12细胞,两种细胞中CAV3蛋白表达下调。

Caveolin-1在肝细胞性肝癌中的表达及其与肿瘤进展和预后的关系

目的探讨caveolin-1(Cav-1)在肝细胞性肝癌(HCC)中的表达及其与肿瘤进展和预后的关系。方法应用半定量RT-PCR方法检测40例HCC组织、对应的癌旁组织和6例正常肝组织中Cav-1 mRNA的表达,分析Cav-1 mR-NA在3种不同组织中的表达差异及其与临床病理特征和预后的关系。结果Cav-1 mRNA在HCC、对应的癌旁组织和正常肝组织中的表达率分别为92.5%、85%和16.7%。Cav-1的高表达与肿瘤的转移(P=0.031)和预后(P=0.041)相关。结论Cav-1在HCC的发生和发展过程中起重要作用,Cav-1可作为判断HCC预后的因素之一。

Caveolin-1对胃癌细胞系MGC803细胞生长的影响

目的:研究Caveolin-1对胃癌细胞增殖、分化的影响,以探讨Caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性．方法:运用基因重组技术,将人全长 Caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系MGC803．建立能稳定表达Caveolin-1的胃癌细胞系．同时建立空载体转染的MGC803细胞系作为空白对照,另用PD98059处理48 h作为阳性对照．以重组细胞系作为研究模型,通过免疫细胞化学及Western blot确认Caveolin-1蛋白在被转染细胞中的稳定表达．运用光学显微镜观察转染前后MGC803细胞形态的变化;另运用细胞计数检测了Caveolin-1对MGC803细胞生长的影响,流式细胞术分析了Caveolin-1对MGC803 细胞周期分布的影响．结果:Western blot结果显示,基因转染组及阳性对照组细胞中Vaveolin-1表达比未处理组细胞中明显增强(P<0．001,q值分别为23．067 与13.3376),且基因转染组中Caveolin-1表达比阳性对照组更强(P<0．00l,q=9．7294);基因转染后的MGC803细胞形态发生明显变化,由异形性明显、核大、胞质很少、核分裂明显变得形态较一致、胞质丰富、核／质比明显变小、核分裂相很少见;基因转染后细胞的群体倍增时间明显延长,由46．67 h延长至65．46 h,差异有统计学意义(P<0．05,q =4．8695):基因转染后细胞周期分布发生了明显变化,G0／G1期细胞数明显增多(P<0．01, q=9．1824),S期细胞数明显减少(P<0．01,q= 7．827),G2／M期细胞数无明显变化(P>0．05), Caveolin-1基因转染组与阳性对照组间细胞周期分布的变化也有明显差异性(其中G0／G1期 P<0．01,q=4．9323;S期P<0．05,q=3．3295)．结论:Caveolin-1既能诱导MGC803细胞分化又能将其阻滞于G0/G1期,通过延长细胞群体倍增时间而抑制胃癌细胞的体外增殖．

Caveolin-1在载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成中的变化

目的 :探讨caveolin 1在apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成过程中的变化。方法 :取正常和apoE基因敲除小鼠 (品系均为C5 7BL 6J)作为研究对象 ,分别观察不同周龄apoE基因敲除小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白的含量及主动脉横断面积、斑块面积的变化。免疫组织化学染色法对caveolin 1进行半定量及定位分析 ,Western blotting检测caveolin 1在主动脉的表达。结果 :apoE基因敲除小鼠的血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白水平与对照组比较显著升高 ,并随小鼠周龄增加而升高 ;斑块面积及斑块面积与主动脉面积的比值也随小鼠周龄增加而增大。免疫组织化学染色法显示 ,caveolin 1在实验组血管内膜表达呈阳性减弱 ,其程度随周龄增加有减少趋势。免疫印迹检测显示实验组caveolin 1的表达与对照组比较有所减弱 ,并与小鼠周龄呈负相关。结论 :apoE基因敲除小鼠主动脉内皮细胞caveolin 1表达下调 ,可能与其动脉粥样硬化形成有关。

Caveolin-1基因转染对人胃腺癌细胞生长的影响

目的探讨外源性Caveolin-1基因在人胃腺癌细胞中的表达作用。方法将pcl-neo-caveolin-1人全长质粒转染入MGC803细胞中,用G418筛选得到细胞克隆并扩大培养,获得稳定表达caveolin-1的细胞系,通过Western-blot、细胞计数及流式细胞术等方法检测基因表达、细胞增殖分化等情况。结果与对照组和pcl-neo空质粒转染组相比,转染caveolin-1基因后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显增高,而P-ERK1/2的表达却明显下降;细胞的群体倍增时间明显延长:由46.67或47.32小时延长至65.46小时,差异有显著性(P<0.01);细胞周期分布发生明显变化:G0/G1期细胞比例由35.02%增加到51.98%,S期比例由56.97%下降至39.80%,G2、M期无明显变化。结论Caveolin-1通过抑制MGC803细胞的增殖而导致其发生G0/G1期阻滞,可为肿瘤基因治疗提供实验依据。

CO_2对宫颈癌细胞caveolin-1基因表达的影响及意义

目的探讨CO2人工气腹对宫颈癌Hela细胞caveolin-1(CAV-1)基因表达的影响及意义。方法宫颈癌Hela细胞用压力为8、16mm Hg的CO2作用4h,适时-荧光定量-PCR分别检测CO2未处理组及CO2处理后1、3、5d组caveolin-1基因mRNA的表达量。结果 CO2处理后宫颈癌细胞中caveolin-1mRNA明显降低,且caveolin-1基因的表达随CO2处理后时间的延长而降低。不同压力组间比较差异无统计学意义。结论 CO2人工气腹能抑制宫颈癌Hela细胞caveolin-1基因的表达,其可能是CO2气腹增强宫颈癌Hela细胞增殖能力的原因之一。

载脂蛋白E基因缺陷对小鼠主动脉壁caveolin-1表达的影响

目的探讨高脂喂养的C57BL/6J小鼠和普饲喂养的apoE基因缺陷(apoE-/-)小鼠(品系为C57BL/6J)caveolin-1表达的差异。方法取apoE-/-小鼠作为研究对象,以普饲和高脂喂养的C57BL/6J小鼠为对照组,测定各组小鼠血脂和主动脉壁斑块的变化,Western-blotting检测caveolin-1在主动脉的表达。结果普饲喂养的apoE-/-组和高脂喂养的C57BL/6J组血脂水平较普饲喂养的C57BL/6J组明显升高;普饲喂养的apoE-/-组的主动脉形成明显的斑块,高脂喂养C57BL/6J组没有形成斑块,但血管壁平滑肌细胞出现增殖,普饲喂养的C57BL/6J组未见明显变化。Wester-blotting检测显示普饲喂养的apoE-/-小鼠和高脂喂养的C57BL/6J小鼠caveolin-1的表达与普饲喂养的C57BL/6J小鼠比较明显减弱。结论血管壁caveolin-1的表达下调可能是apoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的重要原因。

Caveolin-2基因甲基化状态在胃癌组织中的检测

目的:探讨Caveolin-2基因启动子区域5'CpG岛甲基化与胃癌发生发展的关系.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测33例胃癌组织及5例距肿瘤5cm以上的癌旁正常胃组织中Caveolin-2基因启动子区域5'CpG岛甲基化状态.结果:5例正常胃组织Caveolin-2基因启动子区域5'CpG岛均为甲基化阴性.33例胃癌组织中29例甲基化阳性,甲基化率为87.9%(29/33),其中20例癌组织(60.6%)表现为完全甲基化,9例癌组织(27.3%)表现为部分甲基化.4例癌组织(12.1%)表现为甲基化阴性.统计学结果显示癌组织中Caveolin-2基因启动子区域5'CpG岛甲基化率显著高于正常组织.结论:胃癌组织中存在较高的Caveolin-2基因启动子区域5'CpG岛甲基化率,甲基化可能与胃癌的发生有关.

Caveolin-1基因的功能、多态性与疾病关系的研究进展

Caveolin-1 (CAV-1)是一种膜标记性蛋白,对调节细胞内外环境稳态起着重要的作用。近年来,对其编码基因CAV-1的研究逐渐成为热点,该文旨在综述CAV-1的结构、功能、基因多态性与临床疾病易感性的关系,以期提高临床对CAV-1的认识。

Caveolin-1在肿瘤发生发展及耐药机制中的作用

Caveolin-1是细胞膜微囊(caveolae)的重要组成结构,在大多数正常的细胞中表达丰富。通过其脚手架区域,在多种信号分子向胞内传递信息的过程中发挥着重要作用,其功能研究是生物学研究的热点。而近来研究表明caveolin-1在大多数肿瘤细胞中表达下降甚至缺如,过表达caveolin-1能抑制其恶性生长性状。近来的癌细胞转化及基因敲除等实验结果倾向于caveolin-1就是7q31位点的肿瘤抑制基因。但在少数肿瘤如前列腺癌、乳腺癌患者的细胞中检测到caveolin-1高表达。在纤维原细胞和上皮细胞的凋亡中起促进作用。Caveolin-1与多种肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移以及凋亡关系密切,且可能是肿瘤细胞多药耐药逆转的一个新靶点,以类似于介导胆固醇流出途径的方式将药物排出细胞导致细胞耐药性增强。

层流剪切力作用下miR-21对内皮细胞Caveolin-1基因表达的影响

目的探讨层流剪切力(SS)作用下miR-21对内皮细胞Caveolin-1基因表达的影响。方法采用Lipofectamine2000将miR-21 mimics和miR-21 inhibitor分别转染到人主动脉内皮细胞,将转染后的内皮细胞分别加载低[0.4 Pa(4 dyn/cm^2)]和高[1.5 Pa(15 dyn/cm^2)]SS,并作用24 h。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot技术检测Caveolin-1 m RNA和Caveolin-1蛋白的表达。结果对照组、低SS+miR-21 mimics组、低SS+miR-21 inhibitor组、高SS+miR-21 mimics组及高SS+miR-21 inhibitor组Caveolin-1 mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达分别为1.08±0.17、0.44±0.16、1.19±0.34、0.93±0.27及1.70±0.39,Caveolin-1/β-actin蛋白分别为1.02±0.24、0.44±0.24、0.98±0.34、1.01±0.35及1.51±0.48。低SS+miR-21 mimics组Caveolin-1蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),高SS+miR-21 inhibitor组Caveolin-1蛋白表达显著高于其他4组(P<0.05),低SS+miR-21 inhibitor组及高SS+miR-21 mimics组Caveolin-1蛋白表达显著高于低SS+miR-21 mimics组(P>0.05)。结论 miR-21对层流SS作用下内皮细胞的Caveolin-1基因的表达可能具有重要的调控作用。