小窝蛋白1介导TGF-β信号通道调控肺细胞外基质重塑机制研究

目的:探讨caveolin-1通过介导TGF-β信号通道在体外调控小鼠肺细胞外基质重塑的机制研究。方法:选取cav1-/-小鼠作为动物模型设为实验组,野生型C57BL/6J小鼠设为对照组,检测肺机械性指标,测定Ⅰ型胶原纤维与弹性纤维含量及mRNA水平,检测肺血管蛋白渗出及支气管灌洗液(BAL)中细胞含量及细胞因子水平,测定TGF-β下游信号分子Smad2及ERK1/2水平。结果:与对照组比较,实验组中肺顺应性下降,僵硬度增加(P<0.05);BAL中总蛋白及白蛋白水平和静脉注射伊文思蓝在肺组织的含量均明显增加(P<0.05);Ⅰ型胶原纤维与弹性纤维含量及mRNA水平增加(P<0.05);Smad2及ERK1/2水平均明显提高(P<0.05);但BAL中细胞含量及细胞因子水平无差异。结论:小窝蛋白1通过介导TGF-β信号转导在体外上调细胞外基质重塑,促进肺纤维化发生。

Caveolin-1RNA干扰真核表达载体的构建及其对人类胃癌细胞生物学行为的影响

目的构建针对Caveolin-1（CAV1）基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体psilence4．1-CMV-neo-CAV1并转染胃癌细胞株SGC7901，探讨siRNA抑制CAV1表达对人类胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响。方法根据GeneBank提供的CAVl基因核苷酸序列，设计并化学合成3对双链siRNA，瞬时转染胃癌细胞株SGC7901，通过半定量RT—PCR检测各转染细胞CAV1表达，筛选一个有效的siRNA序列。设计并合成能表达其小发卡结构RNA（shRNA）的DNA序列，构建CAV1基因的RNA干扰真核表达载体，稳定转染胃癌细胞株SGC7901，RT—PCR法鉴定SGC7901细胞中CAV1基因的表达，通过细胞生长曲线、克隆形成实验及流式细胞术检测抑制CAV1的表达对胃癌细胞生长增殖的影响。结果成功构建CAV1RNA干扰真核表达载体psilence4．1．CMV—neo—CAV1，稳定转染靶细胞后显著降低CAV1的表达，与转染空载体组比较，增生指数及集落形成率增高，差异有统计学意义（分别为t=7．98，P〈0．05；t=13．19，P〈0．01），生长速度亦增快。结论RNA干扰胃癌细胞CAV1的表达促进了胃癌细胞生长增殖能力。