Cbfal基因与成骨细胞标志物在HOS TE85中的表达

目的 观察核心编码因子 (cbfal)基因在人的类成骨细胞株TE85的表达与骨钙素、Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶合成及分泌的关系。方法 原位杂交组织化学技术、放射免疫法、硝基苯酚法和3H脯氨酸掺入法。结果 (1)细胞培养至第 3天可见cbfal基因表达 ,第 9天达高峰 ,12d时表达减弱 ;(2 )骨钙素和Ⅰ型胶原的表达在第 12天时达峰值 ,碱性磷酸酶在第 15天时达峰值。结论 cbfal基因表达与成骨细胞标志物表达之间的时差关系 。

小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒构建及鉴定

目的构建小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞的感染情况。方法采用基因工程技术,经过2次亚克隆将Osf2/Cbfa1基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组后,脂质体转染293T细胞包装、扩增,将重组腺病毒对成纤维细胞株NIH3T3进行感染。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果酶切鉴定及PCR结果证明Osf2/Cbfa1基因重组腺病毒载体成功,病毒滴度达(1.6×1012)pfu/ml,并对NIH3T3细胞有很强感染能力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒载体。

低表达Cbfa1基因的人牙周膜细胞模型的建立及鉴定

目的:构建针对核心结合因子a1(Cbfa1)的mU6小干扰RNA载体,并将其转染到人牙周膜细胞hPDLCs,观察其干扰效果,以期建立稳定的低表达Cbfa1基因的hPDLCs模型.方法:设计针对Cbfa1基因编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经双酶切线性化的小干扰载体mU6中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.以脂质体法将mU6空载体和重组质粒分别导人hPDLCs细胞系.用含G418的培养液筛选,挑取阳性克隆后用RT-PCR技术检测各hPDLCs克隆内Cbfa1 mRNA水平的表达情况.结果:经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒Cbfa1-siRNA中插入的目的基因片段与预计片段完全一致.G418筛选转染细胞4wk后获得稳定转染mU6空载体的细胞克隆株hPDLCs-mU6和稳定转染重组质粒的细胞克隆株hPDLCs-siRNA.经RT-PCR鉴定,Cbfa1在hPDLCs-siRNA细胞中的表达比对照细胞明显降低.结论:成功构建了针对Cbfa1的小干扰RNA载体,成功建立了稳定的低表达Cbfa1的hPDLCs模型,为进一步研究Cbfa1的功能奠定了实验基础.

核结合因子的表达及其对骨细胞的作用研究

核结合因子α1(Cbfα1)是编码成骨细胞的特异性转录因子,不仅促进成骨细胞的分化及骨形成,而且参与了软骨细胞的发育与分化过程。此外,Cbfα1还调节骨保护素的表达,从而抑制破骨细胞的形成和骨吸收,由于Cbfα1既可促进骨形成,又可抑制骨吸收,因此将骨形成和骨吸收两个不同的过程联系起来。此外多种激素和细胞因子可影响Cbαf1的活性和表达。研究Cbfα1基因表达的调节并发现增加其表达的因子,为治疗骨代谢性疾病提供了新的方向。

骨肉瘤中cbfa1基因表达与临床因素的相关性研究

目的 cbfa1 基因是一种结合在Osteocalcin 启动子上并能调节其在成骨细胞中表达的转录因子, 在成骨细胞的分化和成熟中起着重要的作用。由于cbfa1 基因在成骨细胞分化过程中所起的重要作用, 研究骨肉瘤中cbfa1 的表达有重要的意义。方法 应用Southern blot 法和RT- PCR 技术对43 例骨肉瘤标本和3 株骨肉瘤细胞系(SaOS- 2 、HOS 和U - 2) 中cbfa1 基因的结构和表达进行了研究。结果 在43 例骨肉瘤标本中未发现cbfa1 基因重排、缺失或扩增的现象。43 例骨肉瘤标本中27 例(63 % ) 及3 株骨肉瘤细胞检出cbfa1 的m RNA。但cbfa1 的表达水平,在大多数的骨肉瘤细胞中低于正常淋巴细胞的表达。Osteocalcin (cbfa1 的靶基因) 的表达, 在大多数骨肉瘤标本中与cbfa1 基因的表达是平行的。cbfa1 转录水平和患者生存率之间在统计学上有明显的相关性。结论 肿瘤中有cbfa1 基因表达的患者比缺乏这种基因表达的患者有更长的生存期。cbfa1