槲皮素通过抑制MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路减轻大鼠带状疱疹后神经痛的机制

目的 探讨槲皮素(Que)对大鼠带状疱疹后神经痛(PHN)及趋化因子配体3(CCL3,即MIP-1α)/C-C趋化因子受体(CCR)1/CCR5信号通路的影响。方法 将60只大鼠分为对照组(Con组)、PHN组、L-Que组(30 mg/kg)、M-Que组(60 mg/kg)、H-Que组(120 mg/kg)以及H-Que+MIP-1α组(120 mg/kg Que+0.4μg/kg重组MIP-1α)。检测各组大鼠机械痛阈值(PWT)、热痛阈值(TWL);试剂盒检测外周组织液腺苷、腺嘌呤核糖核苷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)以及脊髓背角样本肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;通过HE染色观察脊髓背角病理切片;免疫荧光染色检测脊髓背角小胶质细胞活化情况;Western blot检测MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路蛋白表达。结果 PHN组脊髓背角组织出现破裂现象,神经束排列混乱,炎性细胞浸润、水肿,神经元轻微萎缩现象。与Con组相比,PHN组PWT值、腺苷、AMP、ADP水平降低(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均升高(P<0.05);Que治疗后,大鼠神经束排列杂乱现象有所改善,炎性细胞浸润减少,神经元萎缩现象减轻;与PHN组相比,L-Que组、M-Que组、H-Que组的PWT值、腺苷、AMP、ADP水平升高(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均降低(P<0.05),且Que作用效果呈剂量依赖性;与H-Que组相比,H-Que+MIP-1α组的PWT值、腺苷、AMP、ADP水平降低(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均升高(P<0.05)。结论 Que可能通过抑制MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路减轻大鼠炎症反应,进而减轻PHN。

姜黄素调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制研究

目的:探讨姜黄素通过调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制。方法:利用生物信息学方法预测并分析转录因子FOXP3与CCR5启动子的结合位点;采用AutoDock 4.2软件对姜黄素与FOXP3进行柔性对接;MTT法检测姜黄素对Jurkat细胞活性的影响;qRT-PCR和Western blot检测不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;构建pcDNA3.1-FOXP3真核表达载体;结合转录因子预测结果,运用Overlap PCR法扩增突变型CCR5基因片段,构建突变型CCR5启动子报告载体pFireRluc-Mt-CCR5;利用双荧光素酶报告基因技术验证转录因子FOXP3与CCR5的启动子结合位点。结果:JASPAR转录因子预测结果显示,CCR5启动子区与转录因子FOXP3存在结合位点;分子对接结果显示,姜黄素能够与FOXP3的酶活区域结合;MTT结果显示,姜黄素作用24 h后对Jurkat细胞活性产生抑制作用,IC50为34.48μmol/L;qRT-PCR和Western bot结果显示,不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后,CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,且存在剂量依赖性;双荧光素酶报告基因技术证实FOXP3能够与CCR5启动子结合,且转录因子FOXP3可调控CCR5启动子活性;过表达FOXP3后,姜黄素对CCR5的作用结果显示:当姜黄素浓度为60μmol/L时,作用于共转染pcDNA3.1-FOXP3和pFireRluc-Wt-CCR5的HEK293T细胞CCR5启动子荧光素酶活性相对值明显高于pFireRluc-Wt-CCR5+curcumin-60组(P<0.01)。结论:FOXP3能够调控CCR5启动子活性,其作用机制可能是姜黄素通过作用于FOXP3与CCR5启动子结合位点影响CCR5启动子活性。

花旗松素调节MCP-1/CCR2轴对急性淋巴细胞白血病细胞恶性进展的影响

目的:研究花旗松素(Taxifolin)对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞恶性进展的影响及单核细胞趋化蛋白-1(CCL2)/CC趋化因子受体2(CCR2)轴发挥的作用。方法:体外培养ALL-T淋巴细胞CCRF-CEM;CCK-8法检测不同浓度Taxifolin对CCRF-CEM细胞活力影响,筛选本实验用Taxifolin浓度;将CCRF-CEM细胞分为control组、Taxifolin-L组、Taxifolin-M组、Taxifolin-H组、Taxifolin+rCCL2组;EDU法检测各组CCRF-CEM细胞增殖;流式细胞术检测各组CCRF-CEM细胞凋亡;Transwell检测各组CCRF-CEM细胞侵袭能力;平板克隆形成实验检测各组CCRF-CEM细胞集落形成能力;RT-PCR检测各组CCRF-CEM细胞CCL2、CCR2基因表达水平;Western blot检测各组CCRF-CEM细胞CCL2、CCR2、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果:选择25、50、100μmol/L三个Taxifolin浓度进行后续实验;与control组相比,Taxifolin-L、M、H组CCRF-CEM细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,CCRF-CEM细胞EDU阳性细胞率、侵袭细胞数量、细胞克隆集落数、CCL2、CCR2基因表达水平、CCL2、CCR2、Bcl-2蛋白表达水平均显著性降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与Taxifolin-H组相比,Taxifolin+rCCL2组CCRF-CEM细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著性降低,CCRF-CEM细胞EDU阳性细胞率、侵袭细胞数量、细胞克隆集落数、CCL2、CCR2基因表达水平、CCL2、CCR2、Bcl-2蛋白表达水平均显著性升高(P<0.05)。结论:Taxifolin可能通过抑制CCL2/CCR2轴,从而抑制CCRF-CEM细胞恶性进展。

MCP-1及CCR2在初诊弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的:分析MCP-1及CCR2在初治弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达,并评估其与临床病理特征和预后的相关性。方法:回顾性收集2017年1月至2022年5月期间蚌埠医学院第一附属医院血液科确诊及治疗的141例初治DLBCL患者的临床特征、病理学资料,通过免疫组化染色检测MCP-1及CCR2在初治DLBCL患者组织中的表达情况,分析其与患者的临床特征、预后及生存的关系。结果:MCP-1及CCR2的表达与DLBCL患者Ann Arbor分期晚、IPI评分高、乳酸脱氢酶(LDH)升高、Ki-67指数高及疗效差有关,与其他病理学参数(如性别、年龄、β2-微球蛋白、BCL-2、BCL-6、Hans分型、首发部位、有无B症状、骨髓是否受累)均无显著相关性。生存曲线分析显示,MCP-1或CCR2阳性组与阴性组OS及PFS具有统计学差异,且与预后不良有关。单因素Cox回归法分析结果显示,β2-微球蛋白、Ki-67指数、IPI评分、MCP-1、CCR2表达水平对患者的PFS和OS有影响,疗效不佳的患者的PFS和OS明显缩短(P<0.05),性别、年龄、LDH、BCL-2、BCL-6、Hans分型、肿瘤原发部位、有无B症状、骨髓是否受累、Ann Arbor分期对患者的PFS及OS无影响(P>0.05)。多因素分析结果表明,β2-微球蛋白高表达、Ki-67指数高、IPI评分高、MCP-1、CCR2高表达水平及疾病缓解的深度是患者预后不良的独立影响因素(P<0.05)。结论:MCP-1或CCR2在初治DLBCL中表达率高,且与DLBCL患者Ann Arbor分期、IPI评分、LDH及Ki-67指数相关预后差的临床指标有关,是影响PFS和OS的不良预后因素。

CCR4在恶性肿瘤中的作用和靶向治疗研究进展

C-C型基序趋化因子受体4(C-C motif chemokine receptor 4,CCR4)属于G蛋白偶联受体家族,是一种趋化因子受体,胸腺活化调节趋化因子(thymus activation regulates chemokines,TARC/CCL17)与巨噬细胞衍生的趋化因子(macrophage-derived chemokines,MDC/CCL22)是其高亲和力受体。CCR4在某些肿瘤细胞中高表达,可促进肿瘤的发生、发展、增殖和转移,与肿瘤的不良生物学行为密切相关。同时,CCR4可以通过调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)导致肿瘤免疫逃逸。鉴于其在恶性肿瘤中的双重作用,其靶向治疗药物莫加珠单抗(mogamulizumab,mAb)在成人T细胞白血病/淋巴瘤(adult T cell leukemia/lymphoma,ATLL)以及皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphomas,CTCLs)中的开发和临床应用取得了显著成效,但目前mAb在实体瘤中的应用还不明确,尚需进一步的实验研究和探索。由于CCR4在不同肿瘤中的表达机制和意义不同,以及其单克隆抗体在恶性肿瘤中的研究进展的差异,本研究就CCR4在不同肿瘤中的双重作用以及其靶向药物的研究进展进行综述。

晚期肺腺癌瘤内趋化因子CCR1、CXCR6和CXCL9对免疫治疗的预测及预后作用分析

目的构建能够预测晚期肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者免疫检查点阻断(immune checkpoint blockade,ICB)治疗疗效与预后的趋化因子模型。方法从既往研究数据中回顾性收集确诊为晚期LUAD且经过ICB治疗的42例患者(训练队列),取得其ICB治疗前肿瘤组织转录组测序数据,通过生物信息学方法,筛选出显著影响ICB治疗疗效与患者生存预后的趋化因子,通过无进展生存期(progression-free disease,PFS)评价疗效,通过总生存期(overall survival,OS)评价患者的预后。从高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中的数据集(GSE 135222)下载25例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)转录组测序数据和相关的生存数据,将其作为验证队列。结果通过单因素Cox回归分析,筛选出9个与晚期LUAD患者良好OS显著相关的趋化因子,其中CCR1、CXCR6和CXCL9高表达的患者明显具有更长的OS。基于这3个趋化因子的表达量构建风险模型,生存分析结果表明风险分数与患者的PFS和OS呈负相关,即低风险(risk score≤-1.33)的晚期LUAD患者在ICB治疗中明显获益更多。低风险组中位PFS为19.7个月对比高风险组(risk score>-1.33)2.9个月[95%可信区间(confidence interval,CI)为0.12~0.51,P<0.001]。中位OS低风险组未达到对比高风险组6.0个月(95%CI 0.08~0.38,P<0.001)。GEO数据集验证了该结果,中位PFS低风险(risk score≤-1.85)对比高风险(risk score>-1.85)为2.7个月对比1.2个月(95%CI 0.12~0.93,P=0.009)。结论CCR1、CXCR6和CXCL9高表达表明晚期LUAD患者疾病进展的风险较低,与患者良好的PFS和OS相关,可能为晚期LUAD患者的ICB辅助治疗提供新的方向。

天麻素通过CCR5/JAK1/STAT1信号通路抑制缺血缺氧新生小鼠小胶质细胞介导的炎症反应

目的:探究天麻素(GAS)通过C-C趋化因子受体5(CCR5)对新生小鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后小胶质细胞JAK1/STAT1信号通路及其介导的炎症反应的影响。方法:选择新出生10 d的C57BL/6J小鼠48只,随机分为假手术(sham)组、HIBD模型组和HIBD与GAS联合处理(HIBD+GAS)组;体外培养BV-2小胶质细胞,分为对照(Con)组、氧糖剥夺(OGD)组、OGD+GAS组、GAS组、Maraviroc(MVC)组、OGD+MVC组和OGD+MVC+GAS组。通过RT-qPCR检测CCL4和CCR5的mRNA表达变化,Western blot检测CCR5、p-JAK1、p-STAT1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达变化,免疫荧光双标染色检测CCR5、p-JAK1和p-STAT1的表达变化。结果:(1)与sham组相比,HIBD组小鼠缺血侧胼胝体区CCL4和CCR5的mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平明显增高(P<0.05),而HIBD+GAS组中CCL4和CCR5 mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平显著低于HIBD组(P<0.05)。(2)与Con组相比,OGD组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平明显增高(P<0.05),而OGD+GAS组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平显著低于OGD组(P<0.05)。(3)CCR5拮抗剂MVC在0~80μmol/L范围内不会导致显著的BV-2细胞死亡。与OGD组相比,MVC+OGD组p-JAK1、p-STAT1、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著降低(P<0.05),而MVC+OGD组与OGD+MVC+GAS组无明显差异。结论:GAS可通过靶向CCR5抑制小胶质细胞p-JAK1/p-STAT1通路及相关炎症因子的表达,发挥神经保护作用。

基于CCL2/CCR2信号轴的肿瘤免疫治疗药物的研究进展

趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)及其受体CCR2与肿瘤的发生、发展密切相关。CCL2/CCR2信号轴通过多种机制促进肿瘤进展,一方面CCL2与肿瘤细胞表面的CCR2结合促进肿瘤的生长/存活和转移;更为重要的是CCL2可以招募多种免疫抑制细胞在肿瘤微环境中聚集,抑制免疫细胞的功能和活性,促进肿瘤进展。本文综述了CCL2/CCR2信号轴以及其在肿瘤及肿瘤微环境中的作用,并重点介绍了靶向CCL2/CCR2信号轴药物的临床研究进展,以期深入并全面了解CCL2/CCR2信号轴在肿瘤进展中的作用机制,开发更有效的肿瘤免疫治疗药物。

DCE-MRI减影联合血清甲胎蛋白、AFP-L3、CCR3预测TACE治疗肝细胞癌的疗效

目的:分析动态对比增强核磁共振(DCE-MRI)减影联合血清甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、C-C基序趋化因子受体3(CCR3)预测经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗肝细胞癌的疗效。方法:选取2021年4月—2023年5月泰安市立医院收治的90例肝细胞癌患者进行回顾性分析。收集患者临床资料,参考改良实体瘤疗效评估标准对TACE治疗后2个月进行疗效评估,将病情进展的肝细胞癌患者纳入术后不良组(n=30),完全缓解、部分缓解和稳定患者纳入术后良好组(n=60)。记录两组肝细胞癌患者动脉期及门静脉期减影后最佳对比度噪声比(CNR),并对比两组患者TACE治疗前血清甲胎蛋白、AFP-L3、C-CR3测定结果,以受试者特征曲线(AUC)分析DCE-MRI减影、血清甲胎蛋白、AFP-L3、CCR3及两者联合检测对肝细胞癌经TACE治疗后疗效不良的预测效能。结果:两组TACE治疗前,术后不良组动脉期CNR、甲胎蛋白、AFP-L3、CCR3水平均高于术后良好组,门静脉CNR低于术后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05)。动脉期CNR、门静脉CNR、血清甲胎蛋白、AFP-L3、CCR3对肝细胞癌经TACE治疗后疗效不良预测的AUC分别为0.831、0.734、0.886、0.928、0.832,联合检测AUC为93.330,联合检测AUC高于单项检测,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:DCE-MRI减影联合血清甲胎蛋白、AFP-L3、CCR3预测TACE治疗肝细胞癌疗效效能高,优于单独检测。

不同剂量阿糖胞苷联合抗生素对急性髓系白血病患儿血清MCP-1、CCR-2的影响

目的探讨阿糖胞苷联合抗生素对急性髓系白血病患儿血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、CC趋化因子受体-2(CCR-2)的影响。方法选取急性髓系白血病患儿96例,根据治疗方案分为观察组48例和对照组48例,观察组给与大剂量阿糖胞苷联合去甲氧柔红霉素,对照组给与常规剂量阿糖胞苷联合去甲氧柔红霉素,观察两组治疗疗效、不良反应,采用ELISA法检测血清MCP-1水平,流式细胞术检测单核细胞CCR-2水平。结果观察组治疗后完全缓解率高于对照组(P<0.05),血清MCP-1、CCR-2水平低于对照组(P<0.05);观察组病原菌感染发生率低于对照组(P<0.05)。两组治疗后不良反应差异无显著性(P>0.05)。结论大剂量阿糖胞苷联合去甲氧柔红霉素治疗急性髓系白血病患儿疗效显著,且明显降低血清MCP-1、CCR-2水平。

基于MCP-1/CCR2通路研究miR-28-5p对老龄自发性高血压大鼠的干预作用

目的研究基于单核细胞趋化蛋白(MCP)-1/CC趋化因子受体(CCR)2通路微小核糖核酸-28-5p(miR-28-5p)对老龄自发性高血压大鼠的干预作用。方法选取SPF级雄性Wistar大鼠6只设为正常组,自发性高血压大鼠18只分为模型组、对照组、miR-28-5p组各6只,miR-28-5p水平检测采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测肺功能相关指标,采用酶联免疫法检测炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测MCP-1及CCR2通路相关蛋白表达。结果与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及左室收缩压(LVSP)水平明显较高,左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)水平明显较低(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较高(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05)。结论miR-28-5p可通过调控MCP-1、CCR2通路蛋白水平改善老龄自发性高血压大鼠的心功能,干预抑制炎性反应。

高脂饮食喂养的apoE基因敲除小鼠外周血和主动脉CCR2 mRNA表达变化

目的探讨动脉粥样硬化模型小鼠外周血和主动脉组织中CCR2 mRNA表达变化趋势。方法将40只apoE基因敲除小鼠分为高脂饮食组和普通饮食组,每组20只,在喂养的第4周开始进行外周血和主动脉CCR2 mRNA测定,了解动脉粥样硬化发展过程中CCR2 mRNA表达的变化。在第2周和第14周对小鼠进行血脂测定,并对主动脉组织进行油红O染色以及免疫荧光检测验证模型建立并了解CCR2 mRNA在组织中的表达。结果高脂饮食喂养的apoE基因敲除小鼠外周血CCR2 mRNA在第4周即开始出现,在第10周达高峰并且维持较高水平,而主动脉组织中CCR2 mRNA的表达在第8周开始逐渐增加。高脂饮食组小鼠在第14周可见血脂显著增高,油红O染色提示主动脉粥样斑块形成,动脉粥样硬化模型建立成功,斑块内可见CCR2 mRNA大量表达。结论外周血CCR2 mRNA的升高可能是动脉粥样硬化相关早期单核细胞活化的一个有效预测指标。

CCR5拮抗剂的抗肿瘤作用研究进展

趋化因子受体CCR5是G蛋白偶联受体家族成员之一。随着对CCR5研究的深入,发现其不仅作为重要辅助受体参与艾滋病毒(HIV)感染过程,还与各种炎症、癌症的发生、发展密切相关。CCR5与其配体CCL5通过特异性结合激活一系列下游传导途径,促进肿瘤生长和转移。靶向阻断CCL5/CCR5生物轴对肿瘤治疗具有较大的意义和价值。本文通过对CCR5拮抗剂抗肿瘤作用的研究进展进行综述,以期为新型抗肿瘤CCR5拮抗剂的发现提供理论依据和启发。

骨髓间充质干细胞外泌体miR-126-3p靶向CCR1抑制非小细胞肺癌细胞恶性增殖及转移

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)来源的外泌体中miR-126-3p靶向趋化因子受体1(chemokine receptor 1,CCR1)对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养BMSCs,提取外泌体并通过外泌体标志蛋白CD63和TSG101进行鉴定;外泌体共培养A549细胞不同时长(0、24、48、72 h)后,CCK-8检测细胞存活率,q RT-PCR检测miR-126-3p和CCR1 m RNA表达,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blotting检测CCR1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、神经钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(Vimentin)相对表达。结果外泌体呈边缘高亮、中间灰暗的圆形或椭圆形杯状结构,粒径分布范围152 nm左右,有CD63、TSG101蛋白表达;外泌体中miR-126-3p表达高于A549细胞,A549细胞中CCR1 m RNA表达高于外泌体,而在A549细胞与外泌体共培养后,A549细胞中miR-126-3p表达升高,CCR1表达降低;A549细胞与外泌体共培养0、24、48、72 h,细胞的存活率、迁移和侵袭能力和CCR1、N-cad和Vimentin蛋白表达及CCR1 m RNA表达均随着培养时间的延长逐渐降低,而miR-126-3p水平和E-cad蛋白表达随着培养时间的延长逐渐升高。结论BMSCs来源的外泌体与A549细胞共培养可提高细胞中miR-126-3p的表达,miR-126-3p通过靶向抑制CCR1表达可降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力。

CCR2^(+)巨噬细胞与病理性心肌重构的研究

心肌重构被认为是导致临床心力衰竭(heart failure,HF)的决定因素,心肌重构是指心脏的大小、形状、功能和(或)结构因负荷或损伤而发生变化,即基因组表达、分子、细胞和间质的改变。这种重构可以是生理性的(如运动训练可引起),也可以是病理性的(如心脏在MI后、高血压或梗阻性主动脉瓣疾病引起的压力超负荷而发生重构)。心脏损伤后,单核细胞和组织驻留巨噬细胞发生了显著的表型和功能变化,在组织修复、再生和纤维化过程中具有关键调节作用。心肌重构的过程中,免疫细胞亚群的积累导致心脏细胞成分的改变,并促进心力衰竭的发展。本综述将围绕CCR2^(+)巨噬细胞的起源、在心脏中的浸润以及在病理性心肌重构中的作用展开阐述。

多靶点沉默CCR5基因载体构建及沉默效果验证

目的筛选沉默CCR5基因的靶点并验证多靶点沉默CCR5基因的效果。方法检索人CCR5基因的cDNA序列,设计针对CCR5 mRNA的siRNA,选择与靶基因结合具有高特异性的3个siRNA序列,合成shRNA双链,构建多靶点沉默CCR5重组质粒。同时合成CCR5过表达质粒。经测序验证后进行质粒慢病毒包装。首先,用CCR5过表达慢病毒转染Jurkat T细胞,实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测CCR5过表达情况。Control组(空白对照)为Jurkat T细胞,将CCR5过表达细胞分组为CCR5-OE组(CCR5过表达)、CCR5-OE-NC组(CCR5过表达阴性对照)、CCR5-OE-沉默组(CCR5过表达沉默)。RT-qPCR和Western bolt检测CCR5沉默重组质粒对目的基因的沉默效果。实验中各项数据的分析选用SPSS软件,作图选用GraphPad Prism软件。结果测序结果证明,CCR5过表达质粒含有目的序列,CCR5沉默重组质粒中含有3个目的靶点序列。RT-qPCR检测CCR5过表达情况显示,细胞CCR5的基因表达显著升高,可进行后续实验。CCR5沉默慢病毒感染后,RT-qPCR和Western bolt检测各组CCR5表达结果显示,多靶点CCR5沉默组的CCR5基因表达水平和蛋白表达水平较CCR5-OE组降低(P均<0.05)。结论成功构建多靶点沉默CCR5基因重组质粒,验证多靶点沉默CCR5基因的有效性,为基因编辑治疗艾滋病提供实验数据。

趋化因子CCL11-糖胺聚糖-趋化因子受体CCR3的相互作用研究

目的 探究趋化因子CCL11与受体CCR3、糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)相互作用过程及机制,为深入阐明CCL11-GAGs-CCR3相互作用关系提供理论参考。方法 利用基因工程技术,构建筛选了CCR3-EGFP单分子表达水平的CHO稳转细胞系,利用全内反射荧光成像(total internal reflection fluorescence,TIRF)与等温滴定量热(isothermal titration calorimetry,ITC)技术研究了不同体外溶液条件下GAGs与CCL11的相互作用,并利用趋化实验及活细胞单分子成像实验考察了GAGs-CCL11对CCR3-EGFP稳转细胞趋化行为的调控及CCR3-EGFP在细胞膜上聚集状态的影响。结果 随着硫酸软骨素链长度的增加,其与CCL11结合放热增多,表明其相互作用力增强,其促进CCL11聚集作用增强。单分子荧光成像技术结合趋化试验研究发现,不同种类及不同比例的GAGs均会影响CCL11与CCR3的相互作用,GAGs的加入,抑制了CCL11对CCR3-EGFP稳转细胞的趋化效应及促CCR3-EGFP聚集的能力,且随着硫酸软骨素分子质量的增加,抑制作用显著增强。结论 GAGs的存在可以显著调控CCL11的聚集状态,进而影响其与受体CCR3的相互作用,本研究为进一步阐明CCL11-GAGs-CCR3相互作用关系提供了一定的实验基础。

Phe112、Trp86和Tyr108对CCR5与趋化因子CCL5结合及趋化作用的影响

目的:揭示人趋化因子受体5(human C-C chemokine receptor 5,hCCR5)中与人趋化因子配体5(hu⁃man C-C motif chemokine ligand 5,hCCL5)结合并影响hCCL5趋化作用的关键氨基酸。方法:根据生物信息学分析提示的信息,采用定点突变技术,对CCR5受体中Phe112、Trp86和Tyr108分别构建了CCR5-F112A、CCR5-W86A和CCR5-Y108A突变体质粒,并通过慢病毒感染技术感染人胚胎肾细胞HEK293T,分别获得了CCR5-F112A、CCR5-W86A和CCR5-Y108A突变体细胞株。通过激光共聚焦显微镜技术,进一步检测了这些突变对CCR5受体与趋化因子CCL5结合的影响。此外,通过CCK8细胞增殖和Transwell侵袭实验,检测了这些突变对趋化因子CCL5对CCR5受体所带来的肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。结果:实验结果显示,CCR5中的Phe112或Trp86位点发生突变后,CCR5受体与CCL5的结合能力以及CCL5的趋化作用均显著减弱,但Tyr108并不显著。结论:CCR5受体中Phe112和Trp86是影响CCR5与CCL5结合的关键氨基酸。此外,这些构建的突变体,也可为进一步揭示CCL5/CCR5生物轴对其在肿瘤疾病中重要生物学功能的研究提供实验研究工具。

Ccr4-Not复合物的生物学功能研究进展

文章综述了Ccr4-Not复合物的组成、结构、功能以及与病毒和疾病相关的研究进展,为深入了解该复合物提供参考。

LncRNA109897-JrCCR4-JrTLP1b forms a positive feedback loop to regulate walnut resistance against anthracnose caused by Colletotrichum gloeosporioides

Walnut anthracnose induced by Colletotrichum gloeosporioides is a disastrous disease that severely restricts the development of the walnut industry in China.Long non-coding RNAs(lncRNAs)are involved in adaptive responses to disease,but their roles in the regulation of walnut anthracnose resistance response are not well defined.In this study,transcriptome analysis demonstrated that a C.gloeosporioides-induced lncRNA,lncRNA109897,located upstream from the target gene JrCCR4,upregulated the expression of JrCCR4.JrCCR4 interacted with JrTLP1b and promoted its transcriptional activity.In turn,JrTLP1b induced the transcription of lncRNA109897 to promote its expression.Meanwhile,transient expression in walnut leaves and stable transformation of Arabidopsis thaliana further proved that lncRNA,JrCCR4,and JrTLP1b improve the resistance of C.gloeosporioides.Collectively,these findings provide insights into the mechanism by which the lncRNA109897-JrCCR4-JrTLP1b transcriptional cascade regulates the resistance of walnut to anthracnose.