迷你SCC重组质粒的构建及ccr重组酶对SCCmec基因岛的整合功能研究

目的构建4组迷你SCC重组质粒载体,并导入受体菌N315ex中,验证并比较ccrC和ccrAB重组酶具有识别特异性DNA片段,进而把Ⅴ型或Ⅱ型SCCmec基因岛整合入细菌染色体上的功能。方法以转化株0342(pSR5C)和N315(pSR2AB)中抽提的染色体DNA为模板,PCR扩增DNA片段attⅤ和attⅡ,并连接到pYT3载体上,构建pYTattⅤ和pYTattⅡ;将PCR扩增的重组酶基因ccrC0342和ccrAB315分别交叉克隆到pYTattⅤ和pYTattⅡ上,构建重组质粒,并导入N315ex受体菌,在适宜温度培育下充分表达质粒,应用在不同温度培养下含药培养基上菌落数量变化及PCR方法,检测各转化株中质粒整合频率,验证质粒插入方向。结果成功构建4组迷你SCC重组质粒。转化株N315ex(pSR5attⅤ)、N315ex(pSR5attⅡ)和N315ex(pSR2attⅡ)中迷你SCC质粒以不同频度和特定方向整合入细菌染色体中,整合效率分别为8.600%、0.005%和7.200%。N315ex(pSR2attⅤ)中未见整合发生。结论与ccrAB仅可识别Ⅱ型SCCmec基因岛的attⅡ相比,ccrC重组酶可识别V型SCCmec的attⅤ和Ⅱ型SCCmec的attⅡ两组DNA片段,发挥其重组整合作用。