猪CD1d蛋白多克隆抗体的制备及应用

[目的]制备猪源CD1d的多克隆抗体,为探究猪CD1d蛋白在非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染过程中的功能奠定基础。[方法]利用PCR方法扩增了猪CD1d基因,并将其同源重组至pGEX-6p1载体中,构建了原核重组表达质粒pGEX-6p1-CD1d。将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达,表达的GST-CD1d重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot(WB)方法鉴定,SDS-PAGE结果显示约50 ku处有一条明显的条带,该蛋白以包涵体形式表达。然后利用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法进行蛋白纯化,将纯化的GST-CD1d蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后,将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,采用颈背部多点皮下注射,免疫剂量为200μg/只,首免后第3周和第5周分别进行二免和三免,均采用弗氏不完全佐剂乳化,方法和剂量与首免相同。三免后第7天,通过耳缘静脉采血分离血清。首免后第7周进行第四次免疫,一周后心脏采血。该抗体经Protein G亲和层析纯化后冻存于-80℃冰箱。通过WB和间接免疫荧光(IFA)鉴定瞬时转染表达的外源CD1d蛋白和猪原代巨噬细胞(PAMs)表达的内源CD1d蛋白的表达与细胞定位情况。同样,制备的CD1d抗体可以将外源瞬时转染表达的CD1d通过IP拉下。为了探究CD1d在ASFV感染早期的情况,将ASFV接种于PAMs,制备ASFV感染0、15、30、60 min的样品,以CD1d为一抗,通过WB检测了CD1d蛋白的表达情况。在HEK293T细胞共转pCAGGS-HA-CD1d和pCAGGS-Flag-CD2v质粒,24 h后收取细胞裂解,加入Flag beads过夜结合蛋白,通过WB检测互作情况染,同时,质粒共转染于共聚焦小皿中的HEK293T细胞,用标签抗体对其进行孵育,选择相应的荧光二抗,通过激光共聚焦显微镜观察CD1d与CD2v在细胞中共定位情况。采用Co-IP验证CD1d与ASFV外囊膜蛋白CD2v的相互作用。[结果]原核表达的GST-CD1d蛋白以包涵体形式表达在感受态细胞中,分子质量约为35 ku;实验兔4次免疫CD1d重组蛋白后采血并分离血清,纯化的抗体经SDS-PAGE检测在45和25 ku处各出现一条特异性条带,分别为CD1d抗体的重链与轻链。以纯化的CD1d蛋白作为免疫原制备的兔抗CD1d抗体包含重链和轻链,且具有较好纯度;该抗体能够通过WB和IFA鉴定瞬时转染的外源以及PAMs内源CD1d蛋白的表达和细胞定位。进一步检测结果显示,ASFV感染PAMs后,CD1d蛋白表达水平明显增加,并且WB和IFA结果显示CD1d与ASFV编码的外囊膜蛋白CD2v存在相互作用和共定位。[结论]通过原核表达技术制备了CD1d的抗体,为进一步探究CD1d蛋白在ASFV感染过程中的生物学功能打下了基础。

CD1c下调与乳腺癌预后不良和免疫浸润相关

目的:通过TCGA数据库和GEO数据库探究CD1c基因在乳腺癌(BRCA)中的表达与预后的关系。方法:应用GEPIA、Kaplan-Meier Plotter和R软件对CD1c的功能和作用进行综合分析与验证。通过定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(IHC)方法检测CD1c在BRCA中的表达水平。结果:与乳腺正常组织相比,CD1c在BRCA中低表达。通过对多个数据集的样本进行Kaplan-Meier生存分析,结果显示CD1c低表达组患者总体预后明显较差。免疫相关性分析揭示CD1c与iDC细胞、T细胞、DC细胞及B细胞具有较强的相关性。qRT-PCR结果显示,相比配对的癌旁组织,CD1c在BRCA组织中低表达(P<0.01)。IHC结果显示,CD1c高表达与患者较长的PFS相关(P=0.024)。结论:CD1c的低表达与BRCA患者预后不良显著相关,其表达与免疫浸润联系紧密,或可为BRCA患者的免疫治疗提供新的帮助。

外泌体miR-20a-5p调控Sp1/CD147信号通路促进非小细胞肺癌的骨转移

目的探究外泌体miR-20a-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)骨转移的调控作用及机制。方法提取并鉴定16HBE、A549、PC9、H1299细胞以及转染miR-20a-5p mimic和miR-NC的A549细胞所分泌的外泌体。qRT-PCR检测各种细胞及外泌体中miR-20a-5p的表达。将A549和RAW264.7细胞分为PBS组、16HBE exo组、A549 exo组、miR-NC exo组和miR-20a-5p exo组。Transwell小室检测A549细胞迁移和侵袭能力,TRAP染色检测破骨细胞分化。Western blot检测各组RAW264.7细胞Sp1和CD147的表达。6周龄的雌性Balb/c裸鼠随机分为5组,分别注射PBS(A组)、16HBE exo(B组)、A549 exo(C组)、miR-NC exo(D组)和miR-20a-5p exo(E组)外泌体4周,构建NSCLC骨转移的小鼠模型;HE染色观察各组小鼠骨转移情况。结果透射电镜下观察到A549 exo、PC9 exo、H1299 exo、16HBE exo为具有双层膜的囊泡样结构,粒径在30~100 nm,且均表达CD9、CD81、HSP70标志蛋白。miR-20a-5p高表达于NSCLC细胞及其外泌体。与PBS组相比,A549 exo组肿瘤细胞迁移和侵袭能力显著增加(P<0.001),RAW264.7细胞中miR-20a-5p表达上调(P<0.001),破骨细胞分化显著增加(P<0.001),Sp1和CD147表达显著增加(P<0.001)。与miR-NC exo组相比,miR-20a-5p exo组A549细胞迁移和侵袭能力增加(P<0.001),RAW264.7细胞中miR-20a-5p表达上调(P<0.001),破骨细胞分化显著增加(P<0.001),Sp1和CD147表达显著增加(P<0.001)。在小鼠体内实验中,A组、B组骨组织骨小梁结构完整,组织中有少量肿瘤细胞,骨髓腔相对完整,病变较少;C组小鼠骨组织出现大量肿瘤细胞且细胞紧密排列,骨小梁显著破坏,核浆比例严重失调,病变显著增加;E组小鼠骨组织中出现大量肿瘤细胞,骨小梁破坏严重,病变较D组显著。结论外泌体miR-20a-5p可显著促进NSCLC的体内外转移,其机制可能为激活破骨细胞Sp1/CD147信号通路从而促进破骨细胞的分化。

CD1d分子的结构与功能

CD1d是CD1家族中的一员,其结构类似MHCI类分子,主要表达于抗原提呈细胞、肝细胞和肠道上皮细胞等细胞表面。CD1d分子提呈糖脂抗原,在抗原装载、胞内运输及其加工处理等方面独具特色,并在感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病的发生发展过程中具有重要作用。

伴抗心磷脂抗体阳性的SLE患者外周血CD1c和CD1d表达增高

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者机体能产生多种抗非肽类自身抗体,如抗双链DNA（antidsDNA autoantibody）抗体及抗心磷脂抗体（anti-cardiolipin antibody,ACA））.ACA在约60％的SLE患者中高表达,与动静脉栓塞、血小板减少及狼疮抗凝因子（lupus anticoagulant,LA））显著相关.作为抗原递呈分子,CD1c和CD1d分子在SLE自身非肽类抗体的发生发展中可能发挥着重要作用.本实验对伴ACA阳性的SLE患者外周血CD1c及CD1d的表达及相关细胞因子进行了研究.

CD1限制性T细胞

在检测感染递呈抗原的细胞浆质时,CD1分子能与外来的脂类抗原结合。与T细胞识别CD1限制性外来脂质不同,CD1限制性T细胞具有自身抗原反应功能,作为自身效应器它可快速被激活,在CD1表达的递呈抗原细胞之间起到辅助和效应器功能。CD1限制性T细胞亚群及其通路之间功能上的差异表现在这些细胞既能影响树突状细胞(DC)的功能和耐受作用,同时还能激活自然杀伤(NK)细胞和其它淋巴细胞,从而揭示了CD1限制性T细胞如何调节抗微生物应答、抗肿瘤免疫和平衡免疫耐受、自身免疫。

microRNA-191-5p靶向PLCD1调控食管癌细胞顺铂耐药机制研究

目的:探究微小RNA(miR)-191-5p通过靶向磷脂酶CD1(PLCD1)调控食管癌细胞顺铂(DDP)耐药的机制。方法:分别转染miR-191-5p模拟物和阴性对照于DDP耐药的食管癌细胞株ECA109/DDP细胞中,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ECA109/DDP细胞转染后miR-191-5p的表达情况,比较ECA109/DDP与亲本细胞ECA109间miR-191-5p的表达差异。DDP处理转染后的ECA109/DDP细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测转染后ECA109/DDP细胞对DDP的敏感度。蛋白质印迹法检测PLCD1蛋白的表达情况。用双荧光素酶靶标实验验证miR-191-5p与PLCD1之间的作用关系。结果:ECA109/DDP中miR-191-5p的表达量明显低于亲本细胞ECA109,转染miR-191-5p模拟物的ECA109/DDP细胞与转染阴性对照的细胞相比miR-191-5p的表达水平明显升高。DDP联合处理后,miR-191-5p模拟物的转染使ECA109/DDP细胞的增殖活性降低。蛋白质印迹实验证明miR-191-5p模拟物转染组较阴性对照组PLCD1蛋白表达明显下降(P<0.05)。双荧光素酶靶标实验证明PLCD1是miR-191-5p的直接作用靶点。结论:miR-191-5p可能通过靶向PLCD1来抑制细胞的增殖,继而逆转ECA109/DDP细胞对DDP的耐药性。

食管鳞癌和转移淋巴结组织中CD1a和CD83的表达及其临床意义

目的:探讨食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和转移淋巴结组织中CD1a和CD83的表达及其与ESCC临床病理特征间的关系。方法:选取河北医科大学第四医院胸外科2002年5月至2003年12月间手术切除并经病理确诊的78例ESCC石蜡标本,采用流式细胞术检测78例ESCC、24例正常食管黏膜、35例正常淋巴结和32例转移淋巴结组织中CD1a和CD83的表达。结果:(1)ESCC组织中CD1a和CD83的表达量明显低于正常黏膜CD1a和CD83的表达量(均P<0.05)。(2)CD1a表达量与癌组织浸润深度、临床分期、分化程度及淋巴结转移无相关性(均P>0.05);CD83表达量与ESCC临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。(3)转移淋巴结组织中CD1a表达量与正常淋巴结无显著性差异(P>0.05);转移淋巴结组织中CD83表达量显著低于正常淋巴结组织(P<0.05)。结论:ESCC组织中CD83的表达量反映ESCC局部免疫状态,在ESCC的发生、发展过程中具有重要作用,可作为评价食管癌生物学行为的指标。

CD83、CD1a和Ki-67在大肠癌中的表达及意义

目的:探讨CD83、CD1a和Ki-67在大肠癌组织中的表达及预后意义.方法:采用免疫组织化学和流式细胞术检测60例大肠癌组织中CD83、CD1a和Ki-67的表达情况,并分析其与大肠癌临床病理特点和预后的关系.结果:免疫组织化学检测显示,低Dukes分期、预后好的癌组织中CD83和CD1a阳性率均显著高于对应组(均P<0.05),而FCM检测只显示CD1a阳性率显著高于对应组(均P<0.05);两检测均显示,高Dukes分期、预后差的癌组织中Ki-67阳性率显著高于对应组(均P<0.05).结论:CD83、CD1a和Ki-67的表达与大肠癌Dukes分期和预后相关,可以作为检测大肠癌预后的参考指标.

CD1s在Graves病患者外周血淋巴细胞及单核细胞中的表达

目的:CD1s是一种可以识别脂质抗原的特殊分子,在多种自身免疫病中发挥了重要作用。本实验研究Graves病(GD)患者外周血淋巴细胞及单核细胞中CD1s(CD1a、CD1b、CD1c、CD1d)的表达。方法:取33例GD患者作为试验组,另取17例正常人为对照组,用流式细胞仪检测其外周血淋巴细胞和单核细胞中CD1s+表达细胞的百分数,并同时使用微量放射免疫法检测GD患者的甲状腺功能(FT3、FT4、TSH)。结果:GD患者外周血淋巴细胞及单核细胞中CD1a+表达的细胞百分数较对照组显著升高(P<0.05),而CD1b+、CD1c+及CD1d+表达的细胞百分数与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。CD1c+与FT3、FT4间呈显著正相关。结论:部分CD1s在GD患者中的表达较正常对照组升高,这将为我们探究GD的发病机制提供了一条新的途径。

15～25岁1型糖尿病患者外周血单核细胞和淋巴细胞CD1分子的表达

目的 CD1分子能够识别脂类抗原,脂类抗原提呈途径的发现为研究1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）的发病机制提供了一个新的视角。文中旨在观察15~25岁T1DM患者单核细胞和淋巴细胞表面CD1分子的表达,探讨其可能的发病机制。方法选取26例15~25岁,病程小于6个月的T1DM患者作为观察组和23名健康人作为对照组,采用流式细胞术检测外周血单核细胞和淋巴细胞CD1分子的表达。结果观察组外周血单核细胞和淋巴细胞CD1a和CD1c表达的百分数显著高于对照组,并且CD1a在单核细胞和淋巴细胞的表达与病程成正相关。结论高表达的CD1a和CD1c分子可能提示CD1限制性T细胞对β细胞的攻击并导致其凋亡,且这一效应可能与脂类抗原提呈有关。

S-100蛋白、CD1a、CD83及Ki-67在口腔朗格汉斯细胞组织细胞增生症中的表达及意义

目的对口腔朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)病例进行临床病理回顾性研究及多种免疫表型检测,观察该类疾病的临床病理特征,并对其诊断、鉴别诊断等进行探讨。方法选择原病理诊断为LCH的29例患者为研究对象,分析其临床病理特点;采用链亲和素-生物素-过氧化物酶(SP)法和Elivison二步法检测S-100蛋白、CD1a、CD83及Ki-67在LCH中的表达情况,观察其免疫组织化学结果并进行统计学分析。结果 29例LCH中有5例S-100蛋白、CD1a检测为阴性,排除LCH诊断。在24例LCH中,男性15例,女性9例;患者中位年龄为7.50岁;14例发生于下颌骨,5例发生于上颌骨,5例发生于上下颌骨;按照Bartnick分类,Ⅰ类9例,Ⅱ类13例,Ⅲ类2例;S-100蛋白、CD1a均为阳性表达;颌面部单发骨病损与侵及软组织的颌面部病损相比,Ki-67阳性率较低,而CD83阳性率较高。结论 S-100蛋白、CD1a对于LCH的诊断具有重要意义。颌面部单发的骨LCH可能具有较低的增殖活性,并处于较高的成熟状态;侵及软组织的颌面部LCH可能具有较高的增殖活性,并处于较低的成熟状态。

尖锐湿疣组织CD1a、上皮细胞钙粘素分子及其mRNA的表达和朗格汉斯细胞的电镜观察

目的:研究尖锐湿疣(Condyloma accuminatum,CA)组织中朗格汉斯细胞(Langerhans cell,LC)数目、形态和功能改变及其分子机制。方法:免疫组化SP法和逆转录RT-PCR法分别检测LC表面标记分子CD1a、粘附分子上皮细胞钙粘素(E-cadherin)及其mRNA表达,透射电镜观察LC的超微结构,并以正常包皮组织作为对照。结果:与正常对照组(21.59±10.48)相比,CA组织中CD1a+LC数目(10.66±11.71)减少(P<0.05),胞体缩小,树突减少。CD1a mRNA表达(0.4066±0.2671)低于正常(0.7444±0.3667)(P<0.01);CA组织中E-cadherin染色变淡,平均积分值(2.36±1.41)低于正常对照(7.67±1.64)(P<0.01),E-cadherin mRNA表达(0.1737±0.1083)较正常对照(0.3786±0.1460)相比显著降低(P<0.01);CD1a+细胞数目与E-cadherin表达强度之间存在正相关关系(r=0.9404,P<0.05)、CD1a mRNA与E-cadherin mRNA的表达呈正相关(r=0.8381,P<0.05);CA组织LC胞质内细胞器稀少,Birbeck颗粒少见。结论:CA组织中存在着LC的缺失和抗原提呈功能异常,可能导致HPV持续性感染,LC的减少可能与E-cadherin表达下降导致LC在表皮内难以滞留有关。

血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子-α、CD1a、γδTCR^＋ T在胸腔积液和外周血中表达及其对肺结核和肺癌的诊断价值

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和CD1a、γδTCR+T在胸腔积液和外周血中的表达及其对胸腔积液诊断的价值分析,以及TNF-α表达与结核性胸膜肥厚的关系。方法对36例结核性胸膜炎合并胸腔积液和34例肺癌合并胸腔积液患者,用ELISA法检测VEGF、TNF-α在胸腔积液和外周血中表达;用流式细胞仪检测CD1a、γδTCR+T在胸腔积液和外周血中阳性表达,分析TNF-α表达与结核性胸膜炎患者胸膜肥厚的关系。60例健康人的外周血作对照。结果肺癌患者胸腔积液中VEGF的含量高于结核性胸腔积液(P<0.05),而TNF-α含量却低于结核性胸腔积液(P<0.001)。结核性胸腔积液患者外周血中VEGF表达与健康人外周血中表达差异无统计学意义(P>0.05),而肺癌胸腔积液患者外周血中VEGF表达却明显高于结核患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001);结核性胸腔积液患者外周血中TNF-α表达与健康对照组、肺癌胸腔积液患者外周血比较差异有统计学意义(P<0.01)。结核性胸腔积液中TNF-α的表达与胸膜肥厚的程度呈正相关(r=0.463,P<0.01)。肺癌胸腔积液中CD1a、γδTCR+T阳性表达明显高于结核性胸腔积液(P<0.001),也高于其自身外周血中的表达(P<0.001);两组患者外周血中CD1a、γδTCR+T阳性表达与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF、TNF-α表达及CD1a、γδTCR+T阳性表达,可作为结核性胸膜炎合并胸腔积液与肺癌并胸腔积液鉴别诊断的参考依据;结核性胸膜肥厚程度与TNF-α的表达呈正相关。

CD1a标记树突细胞在声门型喉鳞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:树突细胞(dendriticcell,DC)是最重要的抗原呈递细胞(antigenpresentingcell,APC),而CD1a作为未成熟DC的标记物,在肿瘤的发生及发展过程中有一定的影响。本文旨在探讨CD1a+DC与声门型喉癌病理分级、T分期及局部复发的关系,从而间接了解它与预后的关系。方法:收集111例有完整病理资料及临床随诊资料的声门型喉鳞癌病例,并取17例非肿瘤组织做对照。用免疫组化技术检测CD1a+DC在癌组织中的表达,分析癌组织中CD1a+DC在不同病理分级、T分期及局部复发组织中的表达,间接了解其与声门型喉鳞癌预后的关系。结果:111例声门型喉鳞癌病例中,CD1a阳性率为59.46%(66/111);高分化组阳性率为71.43%(55/77),中低分化组阳性率为28.57%(11/34);T1+T2组阳性率为67.16%(45/67),T3+T4组阳性率为47.73%(21/44)。局部复发组阳性率为42.86%(12/28),局部无复发组阳性率为65.06%(54/83)。17例非肿瘤组织中CD1a均为阴性。结论:声门型喉鳞癌中,肿瘤细胞分化越差,T分期越高,则CD1a标记树突细胞阳性率越低。局部复发者CD1a+DC阳性率低。CD1a可作为预测声门型喉鳞癌预后的参考指标之一。

CD83、CD1a标记肿瘤浸润性树突状细胞在大肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤浸润性树突状细胞(TIDC)在大肠癌组织中的表达及其对预后的意义。方法收集≥5年生存组和<3年死亡组大肠癌病例各30例,免疫组化和流式细胞术分别检测大肠癌组织内TIDC的CD83、CD1a表达状况,分析其与大肠癌临床病理特点和预后的关系。结果 CD83、CD1a的表达与大肠癌的分化程度、淋巴结转移无关,与Dukes分期和预后相关。免疫组化检测显示,60例大肠癌组织中19例检测到CD83阳性表达,24例检测到CD1a阳性表达。CD83、CD1a的表达随着Dukes分期的升高而降低,≥5年生存组表达高于<3年死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测到低水平CD83(60/60)、CD1a(60/60)和Ki-67(60/60)表达。在大肠癌组织的不同Dukes分期间,CD83、CD1a在A期+B期大肠癌组织中的表达高于C期+D期大肠癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);CD1a在≥5年生存组表达高于<3年死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大肠癌组织中TIDC的特征性标记物CD83、CD1a的表达与预后相关,可以作为检测大肠癌预后的参考指标。

CA-9、CD1a、CD3和EGFR在Ⅰ期非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究低氧标记物CA-9、肿瘤侵袭相关的EGFR表达、与肿瘤免疫功能有关的DC,T淋巴细胞浸润、以及肿瘤坏死程度在Ⅰ期非小细胞肺癌患者中的临床和预后意义。方法:应用免疫组化法检测59例I期非小细胞肺癌患者的CA-9、CD1a、CD3和EGFR的表达。结果:CD1a、CD3和EGFR在腺癌中的表达明显高于鳞癌(P<0.05);CA-9高表达和肿瘤高坏死者,其肿瘤中的CD1a浸润低(P<0.05);肿瘤高坏死的患者,生存率明显低于低坏死者(P<0.05);术后化疗组与未化疗组在生存率上未发现有显著性差异,但进一步分层分析显示:在CA-9阳性表达和CD1a阴性的患者中,术后化疗组的生存率明显短于未行化疗组(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌早期即有免疫细胞的浸润,肿瘤低氧、不同病理学类型和肿瘤的坏死程度可能影响免疫细胞的浸润;肿瘤的坏死程度影响患者的生存率;检测CA-9和CD1a的表达可能对Ⅰ期非小细胞肺癌患者术后是否应该化疗有指导意义。

食管癌组织及其区域淋巴结中树突细胞CD1a、CD80、CD86的表达

背景与目的:树突细胞(dendriticcell,DC)是重要的抗原提呈细胞,参与抗肿瘤免疫。本研究通过检测人食管癌组织及其区域淋巴结中树突细胞CD1a(特异性标志)、CD80、CD86(共刺激分子)的表达,探讨食管癌发生及其免疫逃逸的机制。方法:采用流式细胞术检测58例食管癌病例(Ⅰ-Ⅱ期27例,Ⅲ-Ⅳ期31例;G1-237例,G321例;鳞癌49例,腺癌9例;有淋巴结癌转移者37例,无淋巴结癌转移者21例)的癌组织及癌旁组织、11例食管炎性组织、12例正常食管组织、31枚有癌转移的区域淋巴结、34枚无癌转移的区域淋巴结中树突细胞CD1a及CD80、CD86的表达。结果:(1)树突细胞CD1a、CD80、CD86的表达在食管癌组织中(6.18±1.47,5.37±1.13,37.35±7.42)明显低于正常食管组织(10.28±2.11,9.67±1.94,48.76±10.23)、食管炎性组织(11.89±2.65,10.46±1.79,51.55±10.60)及癌旁组织(11.79±2.41,10.49±1.89,9.78±12.31)中的表达(P<0.01);(2)树突细胞CD1a、CD80、CD86的表达在食管癌患者有癌转移的区域淋巴结中的表达(8.34±1.66,6.78±1.42,41.70±8.71)明显低于无癌转移的淋巴结中的表达(12.23±2.14,10.82±2.11,59.63±12.52)(P<0.01);(3)癌旁组织及食管炎性组织中树突细胞CD1a、CD80、CD86的表达与正常食管组织中的表达的差异无统计学?

胃癌组织CD1α和survivin表达及临床意义

目的:观察胃癌组织中树突状细胞及树突状细胞前体的分布,并探讨survivin作为胃癌生物治疗靶抗原的可能性.方法:用免疫组织化学染色对不同类型胃癌组织132例(中分化腺癌72例,低分化腺癌60例)CD1α,CD68,S100和survivin蛋白的表达进行了检测.结果:中分化腺癌CD1α表达率为33%(24/72),低分化腺癌CD1α表达率为10%(6/60),二者有显著性差异(X2=6.56,P<0.05).中分化腺癌$100表达率为50%(36/72),低分化腺癌表达率30%(18/60),二者无显著性区别(P>0.05).CD1α阳性胃癌组织S100表达均阳性,二者有良好的一致性.中分化腺癌CD68表达为91.6%(66/72),低分化腺癌表达率为60%(36/60),二者无显著性差别(P>0.05),CD68和CD1α在中分化腺癌和低分化腺癌中的分布也有良好的一致性.Survivin在中分化腺癌的表达为91.7%(66/72),低分化腺癌表达为90%(54/60),二者无显著性差别(P>0.05).结论:survivin和DC的结合在胃癌生物治疗中具有潜在而重要的应用价值,以survivin为靶抗原的胃癌个体化DC疫苗值得进一步深入研究.

Cd1-型亚硝酸盐还原酶脱氮工程菌的构建与表达

目的用基因工程技术将铜绿假单胞菌PAO1中nirS基因定向克隆至表达载体pQE-30上，使nirS基因得到高效表达。方法根据GenBank公布的nirS碱基序列和表达载体pQE-30的多克隆位点设计引物，以铜绿假单胞菌PAO1的基因组DNA为模板，应用PCR技术扩增目的片段nirS；之后经过BamH I和HindⅢ双酶切，定向克隆到pQE-30上，化学转化DH5α，构建含有重组质粒的转化子pQE30-nirS-DH5α；经酶切和测序鉴定，扩增产物的碱基序列与GenBank公布的序列完全吻合，再将重组质粒pQE30-nirS转化表达菌株SG13009构建脱氮基因工程菌pQE30-nirS-SG-13009（PNS）。最后用SDS-PAGE（IPTG浓度：0．05mmol／L；诱导温度：25℃；诱导时间：2～3h）和His-tag in-gel Stain鉴定cd1-型亚硝酸盐还原酶的分子量与特异性。结果构建了高效表达cd1-型亚硝酸盐还原酶的脱氮基因工程菌PNS。结论Cd1-型亚硝酸盐还原酶能够在脱氮基因工程菌PNS中得到正确和高效的表达。