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Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定
被引量:
1
1
作者
朱俊
袁玉林
+3 位作者
彭涛
陈树
黄铄
李双
《海南医学院学报》
CAS
2015年第3期291-295,共5页
目的:构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-surviv...
目的:构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果:荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01(survivin)、36.33±1.21和43.26±1.02(cdk1)。结论:本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。
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关键词
鼻咽癌细胞株CNE
2
RNA干扰
cdc2/cdk1
SURVIVIN
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职称材料
HeLa细胞G2/M/G1进程中PKA、PKC与CDC2活性变化相关性之初探
被引量:
2
2
作者
郝智慧
柳惠图
王端顺
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
1997年第4期383-387,共5页
为了研究上游信使系统中两个重要激酶——蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)和蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)与周期进程的相关性。采用胸腺嘧啶核苷(thymidine,TdR)双阻断和笑...
为了研究上游信使系统中两个重要激酶——蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)和蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)与周期进程的相关性。采用胸腺嘧啶核苷(thymidine,TdR)双阻断和笑气(N2O)M期阻断相结合的方法,获得同步化的G2和M期细胞,并以此为模型,检测了信使系统中两个重要的蛋白激酶PKA、PKC以及M期引擎分子CDC2在HeLa细胞G2/M和M/G1过程中激酶活性变化情况,结果显示,PKC和PKA与CDC2活性变化分别呈正负相关性。
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关键词
HELA细胞
蛋白激酶
活性
相关性
细胞周期
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职称材料
题名
Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定
被引量:
1
1
作者
朱俊
袁玉林
彭涛
陈树
黄铄
李双
机构
武汉大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系
湖北省咸宁市中心医院
武汉大学中南医院耳鼻咽喉科
出处
《海南医学院学报》
CAS
2015年第3期291-295,共5页
基金
湖北省自然科学基金(301132174)~~
文摘
目的:构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果:荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01(survivin)、36.33±1.21和43.26±1.02(cdk1)。结论:本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。
关键词
鼻咽癌细胞株CNE
2
RNA干扰
cdc2/cdk1
SURVIVIN
Keywords
siRNA
cdc2/cdk1
survivin
CNE
2
分类号
R739.6 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
HeLa细胞G2/M/G1进程中PKA、PKC与CDC2活性变化相关性之初探
被引量:
2
2
作者
郝智慧
柳惠图
王端顺
机构
北京师范大学生物系细胞增殖及调控生物学开放实验室
出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
1997年第4期383-387,共5页
基金
国家自然科学基金
文摘
为了研究上游信使系统中两个重要激酶——蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)和蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)与周期进程的相关性。采用胸腺嘧啶核苷(thymidine,TdR)双阻断和笑气(N2O)M期阻断相结合的方法,获得同步化的G2和M期细胞,并以此为模型,检测了信使系统中两个重要的蛋白激酶PKA、PKC以及M期引擎分子CDC2在HeLa细胞G2/M和M/G1过程中激酶活性变化情况,结果显示,PKC和PKA与CDC2活性变化分别呈正负相关性。
关键词
HELA细胞
蛋白激酶
活性
相关性
细胞周期
Keywords
PKC
PKA
cdc
2
(
cdk
1)△ Department of Biology,Beijing Normal University,Beijing 100875, China
分类号
Q26 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定
朱俊
袁玉林
彭涛
陈树
黄铄
李双
《海南医学院学报》
CAS
2015
1
下载PDF
职称材料
2
HeLa细胞G2/M/G1进程中PKA、PKC与CDC2活性变化相关性之初探
郝智慧
柳惠图
王端顺
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
1997
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
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