cdc2基因在多种人类肿瘤细胞中的表达及意义

目的通过检测人表皮细胞Hacat和不同组织来源的6种肿瘤细胞的增殖能力以及cdc2基因在这些细胞中的表达情况,探讨cdc2基因与肿瘤发生、发展、增殖能力之间的关系。方法体外培养人表皮细胞Hacat和不同组织来源的6种肿瘤细胞(宫颈癌细胞Caski、神经胶质瘤细胞U87、肝癌细胞Hepg2、膀胱癌细胞T24、骨肉瘤细胞MG63、肺癌细胞A549)。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)法测定细胞中cdc2在mRNA和蛋白质水平的表达情况;采用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞增殖速度。结果 cdc2基因在Hacat中表达较低,在Caski、U87、Hepg2、T24、MG63和A549中表达较高。MTT法显示:Hepg2、U87、T24、A549、MG63增殖能力较强,Caski次之,Hacat最差。结论 cdc2基因可能参与了肿瘤的发生过程,并与肿瘤的增殖有关。

雌核发育二倍体鲫鲤及其他倍性鱼cdc2基因cDNA全序列克隆及表达

为研究雌核发育二倍体鲫鲤产生二倍体卵子的分子机制,实验采用PCR和cDNA末端快速分离法,克隆获得了雌核发育二倍体鲫鲤第三代(G3)、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的细胞周期相关基因——cdc2基因cDNA全序列。结果显示,4种不同倍性鱼cdc2基因均编码含有302个氨基酸蛋白,而且编码的蛋白都含有与其他CDK激酶相当保守的序列PSTAVRE;同源性分析发现,4种鱼cdc2基因编码的氨基酸序列之间的相似度大于97.6%,说明Cdc2蛋白在这4种不同倍性鱼中具有高度保守性。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)对cdc2基因在G3、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫及四倍体鲫鲤早期卵巢中的表达进行分析,结果发现,G3cdc2基因比普通二倍体红鲫和三倍体湘云鲫表达要高,比四倍体鲫鲤的表达水平低。该研究从分子水平证明了G3早期性腺中存在着大量的多倍体卵原细胞。同时,研究表明,cdc2基因在雌核发育二倍体鲫鲤早期卵巢的高表达暗示着G3多次进入S期却不经历M期导致二倍体配子的产生。

栗酒裂殖酵母CDC2基因克隆及淡水舟形藻表达载体构建

利用试剂盒提取栗酒裂殖酵母的总DNA,以其为模板进行PCR克隆CDC2基因,再将pBI121载体质粒和CDC2基因进行BamH I和SmaI双酶切,电泳分离和检测,最后连接目的片段构建重组载体pBI121-CDC2。克隆得到长度约为1.2 kb的CDC2基因片段与NCBI网站所公开的CDC2基因序列最大同源性达98%,所构建载体经酶切和PCR验证构建成功,并且在淡水舟形藻中得到表达,表明成功构建栗酒裂殖酵母CDC2基因的淡水舟形藻表达载体。

玉米（Zea mays L．）cdc2基因的染色体原位杂交物理定位

首次报道了玉米低拷贝ｃｄｃ２基因非放射性标记的探针染色体原位杂交的物理定位．供试探针为玉米，ｐ３４ｃｄｃ２的ｃＤＮＡ克隆ｃｄｃ２ＺｍＡ，片段长度仅为１．３ｋｂ．原位杂交检测结果表明，该基因位置在第４染色体及第９染色体长臂，同时在第８染色体长臂亦有杂交信号检出．３处信号检出位置距着丝粒距离和长臂长度百分比分别为５４．７９±２．５１６，８７．９４±１．５３７和２５．８６±０．８５６在第４、９和８染色体上信号检出率分别为２４．６％，１２．３％和６．６％．

玉米(ZeamaysL.)cdc2和prh1基因的染色体原位杂交物理定位

首次报道了玉米两个低拷贝基因ｃｄｃ２和ｐｒｈ１生物素标记的染色体原位杂交结果。供试探针为这两个基因的ｃＤＮＡ克隆ｃｄｃ２ＺｍＡ和ＺｍＰＰ１，其长度分别为１．３ｋｂ和１．７ｋｂ。结果表明，ｃｄｃ２ＺｍＡ的信号分布在第４、８和９染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为５７．８７±２．６８、２８．４２±１．４５和８８．１６±３．２８，检出率为１０．０７％．３．１３％和８．３３％。ｐｒｈ１ＺｍＰＰ１的信号分布在第４、６和８染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为５３．６２±１．１７．６０．７７±２．９０和１７．１０±１．６１，检出率为１２．０７％．５．１７％和６．４７％。对非放射性原位杂交技术以及基因ｃｄｃ２和ｐｒｈ１的物理位置与功能间的关系作了讨论。

RNAi沉默cdc2基因对人卵巢癌顺铂耐药细胞株增殖与凋亡的影响

目的探讨利用RNAi沉默cdc2基因对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP增殖、凋亡的影响,为卵巢癌顺铂耐药逆转提供一个可选择的靶点。方法针对cdc2基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染A2780/DDP,采用RT-PCR和免疫印迹法检测转染组cdc2基因表达是否抑制。用MTT法测定A2780/DDP细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变。结果构建cdc2-SiRNA表达载体能够有效抑制A2780/DDP中cdc2基因的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。RNAi沉默cdc2基因可抑制A2780/DDP细胞增殖,促进细胞凋亡,G2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过RNAi抑制cdc2基因的表达,可抑制A2780/DDP细胞增殖,促进A2780/DDP细胞凋亡,为研究卵巢癌顺铂耐药逆转奠定一定基础。

CDC2L1～2基因及与肿瘤的关系

细胞周期调节蛋白激酶（CDC2L）1和CDC2L2基因定位于人第1号染色体1p36.3区,在人体细胞中,通过选择性剪接,转录出超过20个不同的信使RNA和蛋白质,在CDC2L基因各种产物中指定的773～786氨基酸,总共有15个氨基酸的差异,12个非保守的和3个保守的.CDC2L1～2在细胞有丝分裂、凋亡、纺锤体形成、微管稳定,肿瘤发生、发展等方面均有重要作用.进一步研究CDC2L1～2基因在肿瘤中的具体发病机制将为肿瘤的预防、治疗、预后等方面带来新思路.