日粮锌、硒水平对肉鸡肠道黏膜屏障结构的影响

为了探讨微量元素锌和硒相互作用对肉鸡肠道黏膜屏障结构的影响 ,将 2 4只 1日龄AA肉鸡随机分 3组 ,分别饲喂添加有高锌高硒(锌 1 0 0 0 mg/kg、硒 5mg/kg)、低锌低硒 (锌 3 4mg/kg、硒 0 .0 8mg/kg)或常锌常硒 (锌 50 mg/kg、硒 0 .1 5mg/kg)的日粮 45d后 ,观察肠黏膜上皮细胞、上皮内淋巴细胞和盲肠扁桃体的形态结构变化。结果表明 :高锌高硒或低锌低硒组肉鸡的肠黏膜结构有明显的损伤 ,表现为肠黏膜上皮细胞萎缩 ,绒毛长度下降 ,上皮内淋巴细胞数量减少 ;盲肠扁桃体的弥散淋巴组织和淋巴小结中 ,淋巴细胞数量减少 ,细胞出现肿胀 ,有的核消失 ,结缔组织增生 ,淋巴小结萎缩。尤其是高锌高硒组的损伤最为严重。而常锌常硒组肉鸡肠黏膜和盲肠扁桃体的形态结构正常。结论 :日粮中按锌 50 mg/kg、硒 0 .1 5mg/kg的比例添加 ,对于维持肠道黏膜的正常屏障结构是合适的。过高或过低的锌和硒对小肠黏膜有毒性作用 ,破坏其屏障功能 ;

益生素对雏鸡肠道黏膜体液免疫与细胞免疫的影响

为了观察益生素对雏鸡肠道黏膜免疫的影响，将60只雏鸡随机分为益生素组和对照组，分别在灌服益生素后1，4，7，10和18d，采集肠液、十二指肠派伊尔结和盲肠扁桃体，观测肠道黏膜抗体生成细胞数量、T细胞数量和肠液免疫球蛋白相对含量的变化，并在服用益生素后4d对盲肠扁桃体的超微结构进行了常规透射电镜及扫描电镜观察。结果表明，在服用益生素后7d，雏鸡肠液的IgA高于未服用益生素的对照雏鸡（P〈O．01），十二指肠派伊尔结的IgG生成细胞数量在10d、IgM生成细胞数量在7d明显高于对照组雏鸡（P〈O．05），盲肠扁桃体弥散区的IgA生成细胞数量在7～10d、IgG生成细胞数量在7d、IgM生成细胞数量在4～7d明显高于对照组雏鸡（P〈0．05）；盲肠扁桃体的T淋巴细胞在雏鸡服用益生素后7d明显高于对照组（P〈O．01）；盲肠扁桃体绒毛表面的微绒毛密度和长度在服用益生素后3d也明显提高；随着雏鸡日龄增加，益生素的影响逐渐减弱。可见，益生素能够提高雏鸡生长初期的肠道黏膜免疫。

柔嫩艾美球虫免疫与鸡盲肠扁桃体TNF-α基因表达动态的关系

根据GenBank上鸡β-actin、TNF-α的基因序列设计引物,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术克隆获得了β-actin和TNF-α基因,采用β-actin为内参的半定量方法检测TNF-αmRNA在鸡柔嫩艾美球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨TNF-α基因的表达动态与柔嫩艾美球虫免疫的关系。结果显示,TNF-α基因在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第9 d达到一个高峰,二免后第7d达到另一个高峰。结果表明,TNF-α在抗球虫感染中有一定的作用。

柔嫩艾美尔球虫T细胞刺激性抗原的免疫原性

以抗原对脾脏和盲肠扁桃体 T细胞的刺激能力和动物保护性试验为指标观察了柔嫩艾美尔球虫 ( Eimeriatenella)孢子化卵囊可溶性抗原及其组分的免疫保护作用。纯化的孢子化卵囊经超声波粉碎 ,获得全可溶性抗原 ,用Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析后 ,获得 4个组分 ,分别命名为 1 .0蛋白、2 .0蛋白、3 .0蛋白和 4 .0蛋白。可溶性抗原及其各个组分 ,均能刺激球虫耐过鸡脾脏和盲肠扁桃体 T细胞增殖 ,其中以 3 .0蛋白作用最强。 3 .0蛋白再用Sephadex G- 75凝胶过滤层析 ,获得 3 .1蛋白、3 .2蛋白和 3 .3蛋白组分。其中 3 .2蛋白对脾脏和盲肠扁桃体 T细胞刺激作用最强。SDS- PAGE电泳显示 ,3 .2蛋白含有 2条多肽 ,相对分子质量分别约为 3 70 0 0和 4 0 0 0 0。动物免疫保护性试验表明 ,3 .2蛋白可以有效保护感染鸡抵抗柔嫩艾美尔球虫的攻击 ,盲肠病变计分为 1 .5 ,增重与不免疫不攻虫对照组相当 ,表明 3 .

柔嫩艾美耳球虫免疫期间鸡盲肠扁桃体γ干扰素表达动态的检测

根据GenBank鸡β-actin、IFN-γ的基因序列设计引物,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术克隆获得β-actin和IFN-γ基因,采用β-actin为内参的半定量方法检测IFN-γ mRNA在鸡柔嫩艾美耳球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨IFN-γ的表达动态与柔嫩艾美耳球虫免疫的关系。结果显示,IFN-γ在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第7天达到一个高峰,二免后第7天达到另一个高峰。

柔嫩艾美耳球虫卵囊免疫后鸡盲肠扁桃体IL-2基因表达的动态变化

为检测和评价鸡白细胞介素-2(ChIL-2)在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了长度为391 bp的ChIL-2。将实验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12日龄和22日龄时用E.tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每组取5只鸡的盲肠扁桃体,以鸡β-Actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChIL-2的表达动态变化。结果表明,试验组在第一次免疫后的第九天和第二次免疫后的第七天ChIL-2的表达量明显升高,提示ChIL-2参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChIL-2的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础。

柔嫩艾美耳球虫卵囊免疫后鸡盲肠扁桃体GM-CSF基因表达的动态变化

为检测和评价鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了ChGM-CSF编码基因的开放阅读框(ORF),其长为435 bp。将试验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12、22日龄时用E.tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每次取5只鸡采集盲肠扁桃体,以鸡β-actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChGM-CSF的表达动态。结果表明,在第1次免疫后的第1天(13日龄,P<0.05)和第2次免疫后的第7天(29日龄,P<0.01),试验组ChGM-CSF的表达量显著高于对照组;在第1次免疫后的第9天(21日龄)和第2次免疫后的第3天(25日龄)ChGM-CSF的表达量显著低于对照组(P<0.01)。本研究提示ChGM-CSF参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChGM-CSF的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础。

鸡盲肠扁桃体组织结构早期发育的动态观察

本研究利用HE染色方法结合图像分析软件和数据统计软件,观察雏鸡不同生长发育阶段盲肠扁桃体的组织学发育过程和结构特征。结果显示:随着日龄的增长,盲肠扁桃体特征结构不断发育成熟,并在21日龄时基本达到成熟水平。21日龄时,盲肠扁桃体粘膜层中下部形成生发中心,其数目在35日龄时达到稳定。证实,鸡出壳后初期,盲肠扁桃体免疫功能迅速增强,并在35日龄时达到成熟水平。

盲肠扁桃体提取物免疫调节作用的初步研究

目的探讨盲肠扁桃体提取物的生物活性。方法利用顺铂造成雏鸡免疫抑制，运用淋巴细胞转化试验、四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和测定白细胞介素-2（IL-2）分泌水平对提取物进行生物活性检测。结果提取物组的淋巴细胞转化率和IL-2水平明显高于抑制组（P〈0．01）；不同剂量提取物（1：1000—1：10000）的吸收度值明显高于抑制组（P〈0．01）。结论盲肠扁桃体提取物在一定实验浓度能增强免疫抑制性机体的免疫功能，恢复正常免疫水平。

鸡盲肠扁桃体组织结构早期发育的动态观察

本研究利用HE染色方法结合图像分析软件和数据统计软件,观察雏鸡不同生长发育阶段盲肠扁桃体的组织学发育过程和结构特征。结果表明:随着日龄的增长,盲肠扁桃体特征结构不断发育成熟,并在21日龄时基本达到成熟水平。21日龄时,盲肠扁桃体粘膜层中下部形成生发中心,其数目在35日龄时达到稳定。证实,鸡出壳后初期,盲肠扁桃体免疫功能迅速增强,并在35日龄时达到成熟水平。

蛋氨酸缺乏对雏鸡盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群和细胞因子的影响

为了研究蛋氨酸缺乏对雏鸡盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群和细胞因子的影响,试验选取100只1日龄健康Cobb(科宝)雏鸡分为对照组和蛋氨酸缺乏组,分别采食对照日粮和蛋氨酸缺乏日粮,试验期为42 d,分别于14、28和42日龄对雏鸡进行剖检,取盲肠扁桃体样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测T淋巴细胞亚群和细胞因子。结果表明:与对照组相比,蛋氨酸缺乏组中盲肠扁桃体CD3+、CD3++CD4+、CD3++CD8+以及CD4+/CD8+比例均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。细胞因子白介素2(IL-2)、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ、TNF-α(LITAF)的含量及mRNA表达水平也呈现不同程度的下降(P<0.05或P<0.01)。说明蛋氨酸缺乏会导致盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群和细胞因子下降,进而影响雏鸡的特异性免疫功能。

IBDV感染雏鸡盲肠扁桃体的病理组织学变化

为了探究雏鸡感染传染性法氏囊病毒（IBDV）后盲肠扁桃体病理组织学变化的发展规律,用实验室保存的IBDV毒株感染19日龄雏鸡,分别在感染后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h取盲肠扁桃体,通过石蜡切片、HE染色,观察盲肠扁桃体的病理组织学变化.结果表明：在IBDV感染24 h,盲肠扁桃体淋巴小结内淋巴细胞开始出现坏死凋亡;IBDV感染48~72 h,淋巴小结和弥散淋巴组织区淋巴细胞大量减少,空泡化程度严重;IBDV感染96 h,盲肠扁桃体固有层弥散淋巴组织区和淋巴小结内空泡减少,淋巴细胞增多;IBDV感染120~192 h,组织结构开始恢复正常形态.由IBDV感染造成的雏鸡盲肠扁桃体的损伤在感染72 h后最为严重,96 h后开始恢复.

玉屏风多糖脂质体对雏鸡肠黏膜及淋巴组织形态结构的影响

为探讨玉屏风多糖脂质体对雏鸡肠黏膜相关淋巴组织形态结构的影响,将150只13日龄雏鸡随机分成5组,玉屏风多糖脂质体低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg)、玉屏风多糖组(200 mg/kg)和空白对照,在试验1 d^7 d和14 d^21 d喂食添加药物的日粮,空白对照组喂食普通日粮。每周称重,在试验第30天时,各组选取12只雏鸡处死并采集十二指肠、空肠、回肠及盲肠扁桃体,中性福尔马林固定,常规石蜡切片,HE染色,测量与计算小肠各段绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度比值、小肠上皮与固有层淋巴细胞数量和盲肠扁桃体淋巴滤泡面积。结果显示,各组雏鸡体重无明显差异(P>0.05);与空白对照组相比,玉屏风多糖和玉屏风多糖脂质体各剂量组均显著或极显著增加小肠绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度的比值、小肠上皮内和固有层淋巴细胞数量以及促进盲肠扁桃体淋巴细胞的成熟和增殖(P<0.05或P<0.01),且高剂量玉屏风多糖脂质体的效果更佳。说明玉屏风多糖脂质体能有效促进雏鸡肠黏膜相关淋巴组织的生长发育及免疫调节。

中国黄羽鹌鹑盲肠扁桃体的增龄变化及组织学观察

采集0、1、2、3、4、5、6、10、14、18、22、26、30、34、38周龄健康中国黄羽鹌鹑的盲肠扁桃体,测量盲肠扁桃体的生长指标,观察盲肠扁桃体的显微组织结构及超微结构变化.结果表明:中国黄羽鹌鹑盲肠扁桃体位于回肠、盲肠、直肠三者连接处的盲肠基部,盲肠扁桃体近盲肠的基底部分由于盲肠壁增厚、增宽,容易与其他部位分离,盲肠扁桃体在鹌鹑孵化时已存在,0~38周龄皆具备完整的外部形态,表面光滑且饱满;盲肠扁桃体的结构由内到外分为黏膜、黏膜下层、肌层和浆膜,黏膜包括上皮、固有层和肠腺;在透射电镜下可见结构清楚的内质网、线粒体、溶酶体和肠绒毛,且线粒体嵴清晰可见;盲肠扁桃体质量、生长指数及左、右侧的长和宽的变化趋势基本保持一致,均为早期随着周龄的增加不断增长,后趋于平稳,绝对质量和生长指数均在6周龄达到最大,除22周龄右侧长径外,10~38周龄盲肠扁桃体生长指标间的差异均无统计学意义.中国黄羽鹌鹑盲肠扁桃体的发育在出生后逐渐发育,0~6周龄为快速发育期,在6周龄达到成熟,10~38周龄为成熟持续期.

白介素21在42日龄中国黄羽鹌鹑盲肠扁桃体中的定位

为探明白介素21(IL-21)在鹌鹑机体免疫调节的作用机制,观察IL-21的分布特点,取42日龄中国黄羽鹌鹑盲肠扁桃体,运用免疫组织化学法对白介素21进行组织学定位,观察阳性细胞的形态及分布情况。结果显示,IL-21阳性反应细胞多呈圆形或椭圆形,少数呈梭形,有的呈团块状,阳性反应细胞主要分布于黏膜上皮下固有层中,少数位于肠腺周围,生发中心周围也有少量阳性细胞分布。证实IL-21在鹌鹑盲肠扁桃体中广泛存在,分布数量及反应强度与局部免疫细胞及机体免疫状态有关。

氯化镍对雏鸡盲肠扁桃体影响

本研究采用显微组织学、超微组织学以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)等方法,研究了日粮中高水平氯化镍(NiCl_2)对雏鸡盲肠扁桃体的影响。结果表明,NiCl_2处理组与对照组相比,盲肠扁桃体发育受到明显抑制;淋巴滤泡内弥漫排列的淋巴细胞明显减少。超微结构和TUNEL检测发现,900 mg/kg处理组盲肠扁桃体凋亡细胞增多,淋巴细胞线粒体肿胀或空泡化,同时也观察到淋巴细胞核膜扩张。结果表明,日粮中NiCl_2水平超过300 mg/kg时,可抑制盲肠扁桃体的生长,引起组织结构和细胞器的损伤,提示过量NiCl_2可使盲肠扁桃体正常发育和功能受损,从而导致雏鸡消化系统黏膜免疫功能降低。

刺五加多糖对雏鸡黏膜淋巴组织发育影响的组织学观察

为了研究刺五加多糖(ASPS)对雏鸡黏膜淋巴组织发育的影响,试验从组织学水平对ASPS的黏膜免疫增强作用进行了评价,选取7日龄海兰褐公雏100只,随机分为ASPS组和对照组,每组50只。两组分别皮下注射200 mg/mL的ASPS和灭菌生理盐水0.2 mL,每天给药1次,连续3 d。最后一次给药(9日龄)后的第7,14,21,28天分别取盲肠扁桃体(CT)、肺脏和眼结膜,制作病理切片并进行H.E.染色,观察并比较两组器官中淋巴组织的结构变化。结果表明:与对照组比较,ASPS组CT黏膜固有层底部的淋巴组织更为发达,生发中心数目明显增多,而且单个面积明显增加,尤其是给药后21,28天时更为明显;ASPS组各日龄肺脏中的支气管相关淋巴组织(BALT)均比同日龄对照组发达,从最后一次给药后第14天开始,位于初级支气管黏膜中的淋巴组织开始大范围合并,合并程度和面积明显大于对照组,并且黏膜上皮已经转变为淋巴上皮,到21,28天时BALT更为发达,而且突入到初级支气管管腔中;与对照组比较,ASPS组结膜相关淋巴组织(CALT)出现和发育都较早,最后一次给药后14天CALT所在的黏膜上皮已经转化为淋巴上皮,21天时在黏膜底部出现生发中心。说明ASPS能够增加CT淋巴组织、BALT和CALT面积,并促进这些淋巴组织中生发中心和淋巴上皮等特征性结构的形成和发育,从而为黏膜免疫功能的增强提供了组织结构基础。