CD44与CD62P在肾脏疾病中的表达及意义

目的探讨肾小球病变患者外周血P选择素(CD62P)与细胞表面糖蛋白(CD44)的表达特征及临床意义。方法采用流式细胞术对90例肾脏疾病患者外周血CD62P和CD44进行了检测分析,以30例正常人作为对照。结果不同病因肾病患者CD62P和CD44表达均较正常组显著增高(P<0.01),其中慢性肾衰组CD44阳性细胞数增高极为显著,IgA肾病组CD62P和CD44表达均较其它肾脏疾病组降低(P<0.05),肾病患者CD62P和CD44表达为r=0.41;P<0.05呈正相关。结论CD62P和CD44在肾小球病变患者外周血中表达增强。

PSGL-1缺失导致MDSCs上调

目的 P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)主要特异性表达在白细胞上,我们的研究PSGL-1缺失在小鼠体内脾脏、骨髓中MDSCs的变化。方法利用我们实验室现有的PSGL-1-/-小鼠进行试验,经过鉴定后,PSGL-1-/-后代小鼠;利用流式细胞术检测C57和PSGL-1-/-小鼠脾脏、骨髓中Gr-1和CD11b阳性细胞的变化。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠MDSCs在脾脏、骨髓中显著上调(P<0.001),结论 PSGL-1的缺失导致小鼠脾脏、骨髓中MDSCs升高。

重组人P-选凝素及P-选凝素糖蛋白配基-1的表达与鉴定

P-选凝素表达于血管内皮细胞及血小板膜上,它可以与白细胞膜表面的P-选凝素糖蛋白配基-1(P-selectin glyco-protein ligand-1,PSGL-1)相互作用,在炎症过程中介导白细胞的滚动并启动随后的白细胞迁移级联过程。我们构建了重组人野生型可溶性P-选凝素及其钙离子结合位点突变体,同时构建了重组PSGL-1免疫球蛋白融合分子(PSGL-1-Rg),并应用昆虫杆状病毒表达系统在Sf9细胞中表达这些重组蛋白,最后用镍金属螯和柱或Protein A亲和柱予以纯化。结果显示,用该系统表达的P-选凝素或PSGL-1是有活性的,但是P-选凝素的4个钙离子结合位点突变体却没有活性。该研究证明了P-选凝素钙离子结合位点在其与配基相互作用中的重要性。

慢性肾功能衰竭患者TNF-α和CD62P的表达及意义

目的探讨慢性肾功能衰竭患者血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和外周血P选择素(CD62P)的表达及其意义。方法采用放射免疫法及流式细胞术对80例慢性肾功能衰竭患者血浆中TNF-α及外周血CD62P进行检测分析,并与40例正常人作为对照。结果慢性肾功能衰竭患者TNF-α和CD62P表达均较正常组显著增高(P<0.05);CRF氮质血症、尿毒症患者TNF-α和CD62P表达均呈正相关(r=0.45,P<0.05;r=0.68,P<0.01)。结论TNF-α和CD62P在慢性肾功能衰竭患者外周血中表达增强,两者可能在肾脏疾病的发展及病情变化过程中起着重要作用,它们共同参与了慢性肾功能衰竭的发病过程。

金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5抑制人脐血源性内皮祖细胞黏附功能及其机制研究

目的研究金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal superantigen-like prote in-5,SSL5)与人脐血源性内皮祖细胞(endothelial progen itor cells,EPCs)表面P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprote in ligand-1,PSGL-1)的结合情况,及其对内皮祖细胞黏附功能的影响。方法从金黄色葡萄球菌NCTC 8325菌株的基因组中,扩增ssl5基因,并进行重组SSL5蛋白表达载体的构建。采用密度梯度离心法分离得到脐血中的单个核细胞并进行体外培养,对贴壁细胞在激光共聚焦显微镜下观察其摄取乙酰化低密度脂蛋白(D iI-acLDL)和结合荆豆凝集素(FITC-UEA-1)的情况。以流式细胞仪分析SSL5与EPCs表面PSGL-1的结合情况;以calce in-AM负载EPCs后,定量分析SSL5对EPCs在P-选择素包被表面黏附的抑制作用。结果 D iI-acLDL/FITC-UEA-1双染阳性的细胞为EPCs。PSGL-1在EPCs表面有较丰富的表达,阳性细胞率为76.6%。SSL5与EPCs的结合随着SSL5浓度的增加而显著升高;并且,SSL5可竞争性抑制抗PSGL-1单克隆抗体(KPL-1)与EPCs的结合。SSL5可显著抑制EPCs在P-选择素表面的黏附,终浓度为30 mg/L的SSL5对EPCs在P-选择素表面黏附的抑制率已接近10 mg/L的KPL-1的效应,两者与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 SSL5可与EPCs表面的PSGL-1结合,而抑制EPCs在P-选择素表面的黏附,提示SSL5可能通过抑制EPCs与损伤内皮或激活的血小板之间的黏附,进而抑制EPCs对损伤内皮的修复作用。